môi trường nhân giống dạng dịch thể
Màu sắc của môi trường nhân giống dung dịch màu sắc được tạo ra do màu của các chất dinh dưỡng bổ sung vào thành phần của môi trường qua quá trình khử trùng ở nhiệt độ cao sẽ tạo ra những màu sắc đặc trưng cho từng công thức môi trường khác nhau. Trong nghiên cứu này do môi trường có sự tham gia của pepton cung cấp nguồn nitơ, đường Glucose cung cấp cacbon và các hợp chất vô cơ bổ sung dinh dưỡng khoáng khác. Cho nên môi trường sau hấp khử trùng xong có màu nâu đậm của quá trình caramel hóa, dịch giống màu nâu đậm nhưng rất trong tiện quan sát trong quá trình nuôi giống.
Khi quan sát màu sắc và độ đặc của dịch giống qua các giai đoạn nuôi khác nhau cho kết quả như trong Bảng 4.10.
Bảng 4.10. Màu sắc và độ đặc dung dịch giống của 5 chủng nấm C. militaris trong môi trường nhân giống dịch thể qua các giai đoạn
Chỉ tiêu
Chủng nấm
Thời gian sau cấy giống
48 giờ 72 giờ 96 giờ 120 giờ 144 giờ
Mầu sắc
ĐT1 Nâu đậm Nâu Nâu sáng Nâu nhạt Trắng ĐT2 Nâu đậm Nâu Nâu sáng Nâu nhạt Trắng ĐT3 Nâu đậm Nâu Nâu sáng Nâu nhạt Trắng ĐT4 Nâu đậm Nâu Nâu sáng Nâu nhạt Trắng ĐT5 Nâu đậm Nâu Nâu sáng Nâu nhạt Trắng
Độ đặc
ĐT1 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc ĐT2 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc ĐT3 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc ĐT4 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc ĐT4 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc ĐT5 Loãng Loãng Huyền phù Huyền phù Đặc
Như vậy, màu sắc của dung dịch giống nấm được biến đổi theo sự tăng lên của kích thước KLC cũng như sinh khối sợi bên trong, trong các giai đoạn khi mới cấy giống được 48 giờ do sinh khối sợi nấm chưa nhiều nên dung dịch có mầu nâu đậm của môi trường và dịch loãng, sang giai đoạn 72h sau cấy do sinh khối sợi tăng nên dịch có màu nâu, nhưng do sinh khối sợi chưa đủ lớn nên dung dịch vẫn có dạng nước loãng.
Sang giai đoạn tuổi giống đạt 96h thì màu sắc và tính chất vật lý của dung dịch đã thay đổi: màu nâu nhạt dần đi, dịch có dạng huyền phù do sự tăng lên của sinh khối sợi hai tính chất này tiếp tục biến đổi khi tuổi giống được 144h, lúc này sinh khối sợi rất lớn chiếm gần như toàn bộ dịch giống làm cho dịch trở lên rất đặc và màu dịch giống gần như có màu của hệ sợi nấm, màu nâu của môi trường còn lại rất ít và mất dần thay thế vào đó là màu của hệ sợi nấm.
Môi trường nuôi cấy đông trùng hạ thảo là môi trường giàu dinh dưỡng, diện tích bề mặt môi trường rộng độ thông thoáng và độ ẩm cao nên là điều kiện lý tưởng cho vi khuẩn cũng như các loại nấm bệnh xâm nhiễm, do đó kích thước KLC của chủng giống nhỏ, tỷ lệ đồng đều cao, dịch giống dạng huyền phù sẽ thuận lợi trong việc cấy chuyển vào môi trường nuôi trồng, giúp cho giống nấm phân bố đều trên bề mặt cơ chất, khả năng xâm chiếm bề mặt nhanh hạn chế được sự lẫn tạp của vi khuẩn và các loài nấm bệnh khác trong quá trình ươm sợi. Với những đặc thù và yêu cầu nhất định như vậy sẽ giúp cho sản xuất chọn ra được bình giống dịch C. militaris đạt yêu cầu để đưa vào sản xuất.
4.3. SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN, NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG DƯỢC LIỆU CỦA 5 CHỦNG NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS TRONG NUÔI TRỒNG NHÂN TẠO
Khác với loài C. sinensis không nuôi trồng được hoàn chỉnh để tạo quả thể trong môi trường nhân tạo, nấm C. militaris có vòng đời hoàn chỉnh khi nuôi cấy trong môi trường nhân tạo, và do sản lượng nấm này trong tự nhiên không đáng kể nên không đáp ứng được nhu cầu tiêu dùng hiện nay, do đó những năm gần đây có nhiều nghiên cứu trên việc nuôi cấy quy mô lớn quả thể để ứng dụng trong nghành công nghiệp dược liệu và thực phẩm chức năng (Gu et al., 2007).
Để sản xuất quy mô lớn về số lượng quả thể nấm C. militaris hiện nay người ta sử dụng môi trường rắn có chứa các hợp chất hữu cơ và có bổ sung thêm bột nhộng tằm B. mori hoặc nuôi trực tiếp trên ấu trùng tằm B. mori. Tuy nhiên, việc nuôi cấy quả thể trên côn trùng rất tốn kém, năng suất thập, tỷ lệ thành công không cao do bị nhiễm tạp, chi phí thiết bị nhà xưởng lớn. Do đó hiện nay nấm chủ yếu được nuôi trồng trên môi trường có thành phần chính là gạo lứt, bổ sung thêm dung dịch dinh dưỡng.
Trong nghiên cứu này tôi tiến hành thí nghiệm đánh giá khả năng sinh trưởng, phát triển hệ sợi và hình thành quả thể nấm đông trùng hạ thảo trên môi trường nuôi trồng nhân tạo. Công thức môi trường có sử dụng gạo lứt là thành phần cơ chất chính trong nuôi trồng nấm Cordyceps militaris, là nguồn cung cấp
carbon cho sinh trưởng hệ sợi, hình thành và phát triển quả thể nấm Cordyceps
militaris. Sử dụng cao nấm men, pepton, dịch chiết nhộng tằm là nguồn cung cấp
nitơ hữu cơ cho sinh trưởng của hệ sợi cũng như năng suất và chất lượng dược liệu của 5 chủng C. militaris trong nghiên cứu, ngoài ra có sử dụng thêm các chất khác để bổ sung khoáng, vi lượng, vitamin cần thiết trong quá trình nuôi cấy.
Có 4 giai đoạn chính trong sự phát triển của nấm Cordyceps militaris, bao gồm: Giai đoạn tạo hệ sợi, giai đoạn tạo săc tố, giai đoạn tạo mầm và giai đoạn phát triển quả thể (Lu et al., 2005).