CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. NHÂN DÒNG ĐOẠN GEN OmpL1
3.1.1. Tách DNA tổng số của 5 chủng Leptospira interrogans
DNA tổng số là nguồn nguyên liệu rất quan trọng trong các nghiên cứu liên quan đến sinh học phân tử. Từ nguồn nguyên liệu này, các đoạn gen mục tiêu có thể được khuếch đại phục vụ cho các thí nghiệm. Mặc dù hiện nay trình tự DNA của rất nhiều lồi sinh vật đã được công bố trên ngân hàng dữ liệu gen NCBI, tuy nhiên, đây chỉ là các trình tự mang tính chất tham khảo, phục vụ các đánh giá ban đầu do bộ gen của các sinh vật có khả năng biến đổi sau nhiều thế hệ. Vì vậy, việc sử dụng DNA tổng số làm nguyên liệu cho PCR và giải trình tự là biện pháp chính xác nhất để thu được trình tự của đối tượng nghiên cứu.
Để thu được DNA hệ gen của L. interrogans, vi khuẩn L. interrogans được nuôi lắc trong môi trường LB lỏng ở 37°C qua đêm và tiến hành tách chiết bằng bộ kit QIAamp DNA Mini Kit theo quy trình tách chiết do nhà sản xuất đưa ra. Bộ kit này sử dụng một màng lọc đặc biệt có khả năng bắt giữ và giải phóng DNA phụ thuộc vào độ pH của mơi trường. Trong q trình tách chiết, DNA được giữ lại trên màng, các thành phần khác được rửa trôi qua màng thông qua li tâm tốc độ cao. Cuối cùng, DNA tổng số được thu hồi bằng dung dịch Elution Buffer cung cấp kèm theo bộ kit và được kiểm tra bằng phương pháp điện di trên gen Agarose 1%. Kết quả tách chiết DNA tổng số được trình bày trên Hình 3.1.
Kết quả kiểm tra trên điện di đồ cho thấy DNA là một băng rõ nét, có vệt mờ khơng đáng kể, có kích thước lớn hơn băng ladder 10kb, đủ điều kiện để làm khuôn nhân gen OmpL1 bằng kỹ thuật PCR.
Hình 3.1: DNA tổng số tách chiết được của 5 chủng Leptospira (1) L. bataviae, (2) L. canicola, (3) L. grippotyphosa, (1) L. bataviae, (2) L. canicola, (3) L. grippotyphosa,
(4) L. icterohaemorrhagiae, (5) L. Pomona