CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. BIỂU HIỆN PROTEIN TÁI TỔ HỢP OmpL1
3.2.2. Biểu hiện protein OmpL1 tái tổ hợp
Để biểu hiện gen trong E. coli, plasmid tái tổ hợp pET32a/protein
OmpL1 được biến nạp vào E. coli BL21 và biểu hiện. Quy trình biến nạp
được thực hiện theo mô tả ở phần phương pháp. Protein tổng số thu được sau biểu hiện được điện di kiểm tra trên gel SDS-PAGE. Theo tính tốn lý thuyết, đoạn gen OmpL1 được biểu hiện dưới dang protein tái tổ hợp sẽ có khối lượng phân tử khoảng 38 kDa. Kết quả trên đường chạy có IPTG trong Hình 3.12 cho thấy, dịng tế bào tái tổ hợp mang gen OmpL1 tổng hợp một protein ngoại lai có khối lượng phân tử đúng theo tính tốn lý thuyết.
Hình 3.12: Điện di đồ sản phẩm biểu hiện protein OmpL1 ở E. coli BL21 BL21
(1): Protein tổng số của E. coli BL21 mang vector pET32a /OmpL1 không cảm ứng IPTG, (2): Protein tổng số của E.coli BL21 mang vector pET32a/OmpL1 cảm ứng IPTG ở dạng không tan, (3): Protein tổng số của
Đối với dịng đối chứng âm khơng được cảm ứng IPTG khơng biểu hiện được băng có kích thước như vậy. Để kiểm tra protein đang nghiên cứu ở dạng tan hay không tan, chúng tôi tiến hành siêu âm sinh khối E. coli trong
đệm PBS, ly tâm thu dịch pha trên, pha cặn, sau đó tiến hành xử lý mẫu và điện di kiểm tra trên gel polyacrylamide. Kết quả là protein OmpL1 được biểu hiện chủ yếu nằm ở pha không tan. Do đó, chúng tôi tiến hành biểu hiện protein OmpL1 ở các điều kiện khác nhau về nhiệt độ, nồng độ chất cảm ứng IPTG, thời gian thu mẫu để cải thiện tính tan của protein OmpL1 và thu được lượng protein mt OmpL1 tốt nhất.
Tối ưu các điều kiện biểu hiện gen OmpL1.
Quá trình tổng hợp protein trong tế bào chủ phụ thuộc vào nhiều yếu tố như nhiệt độ nuôi cấy, nồng độ chất cảm ứng, thời gian cảm ứng, các chất dinh dưỡng,... nên việc khảo sát các điều kiện tối ưu cho tổng hợp protein đích là điều quan trọng. Vì vậy, chúng tơi tiến hành khảo sát nhiệt độ nuôi cảm ứng, nồng độ chất cảm ứng IPTG và thời gian nuôi cảm ứng để thu được protein OmpL1 tốt nhất sử dụng cho tạo kháng khuyên.