CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. BIỂU HIỆN PROTEIN TÁI TỔ HỢP OmpL1
3.2.2.2. Nồng độ chất cảm ứng IPTG
Protein ngoại lai được điều khiển tổng hợp bởi promoter T7 trên vector pET32a. Promoter này được cảm ứng bởi sự có mặt của IPTG trong mơi tr ởi động quá trình sinh tổng hợp protein ngoại lai. Do đó, lượng chất cảm ứng cho vào dịch nuôi cấy cần đảm bảo vừa đủ để trung hòa chất ức chế, qua đó tăng hiệu suất quá trình cảm ứng. Tuy nhiên, nồng độ chất này quá cao có thể gây độc cho tế bào trong khi nồng độ quá thấp dẫn đến tổng hợp kém protein ngoại lai. Như vậy, nồng độ chất cảm ứng ảnh hưởng lớn đến quá trình biểu hiện protein ngoại lai. Đối với hệ biểu hiện pET chứa T7 promoter, hang Novagen khuyến nghị nồng độ IPTG cuối cùng là 0,4 mM. Hơn nữa, đây là loại hóa chất đắt tiền nên việc xác định nồng độ chất cảm ứng IPTG cần bổ sung ở những nồng độ thấp mà hiệu quả biểu hiện của protein OmpL1 cao sẽ tiết kiệm kính phí. Vì vậy, trong thí nghiệm này chúng tơi tiến hành khảo sát IPTG ở những nồng độ sau: 0,1 mM; 0,2 mM; 0,4 mM; 0,6 mM ở 32°C và thu mẫu sau 5 giờ cảm ứng. protein OmpL1 đã biểu hiện ngay ở nồng độ IPTG 0,1 mM và hàm lượng protein OmpL1 có xu hướng tăng dần theo nồng độ IPTG và đạt đỉnh ở nồng độ 0,2 mM. Kết quả điện di kiểm tra protein tổng số của sinh khối trên gel polyacrylamide cho thấy, lượng protein OmpL1 tái tổ hợp được tổng hợp nhiều nhất tương ứng với nồng độ chất cảm ứng IPTG 0,4mM (Hình 3.14). Do đó, chúng tôi lựa chọn nồng độ IPTG 0,4 mM cho các bước tiếp theo.ường ni cấy. Khi có mặt IPTG, lac promoter hoạt động và khởi động việc tổng hợp T7 polymerase, chính enzyme này bám vào vị trí T7 promoter để khởi động quá trình tổng hợp protein ngoại lai.
Hình 3.14: Điện di đồ sản phẩm biểu hiện của protein OmpL1 ở E. coli BL21 trong các điều kiện nồng độ cảm ứng IPTG khác nhau
M: Protein Ladder; 1: Nồng độ IPTG 0.1mM; 2: Nồng độ IPTG 0.2 mM; 3: Nồng độ IPTG 0.3 mM; 4: Nồng độ IPTG 0.4mM