CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. NHÂN DÒNG ĐOẠN GEN OmpL1
3.1.3. Nhân dòng đoạn gen OmpL1 vào vector pJET1.2
(1) L. bataviae, (2) L. canicola, (3) L. grippotyphosa, (4) L. icterohaemorrhagiae, (5) L. Pomona, (6) Đối chứng âm
Trước khi thực hiện nhân dịng, Đoạn gen mã hóa cho kháng ngun OmpL1 được khuếch đại từ DNA tổng số của 5 chủng Leptospira bằng kỹ
thuật PCR theo mô tả trong phần phương pháp. Kết quả đã thu được 1 băng sản phẩm duy nhất, rõ nét và khơng có vạch phụ kèm theo, có kích thước khoảng 650bp phù hợp với tính tốn lý thuyết của cặp mồi đã thiết kế (Hình 3.6). Sau đó, sản phẩm PCR được tinh sạch, xử lý hai đầu và gắn vào vector pJET1.2 bằng enzyme T4 ligase để hình thành plasmid tái tổ hợp pJET/OmpL1 và biến nạp vào chủng khả biến E. coli DH5α. Các khuẩn lạc được nuôi cấy và tách DNA plasmid để cắt kiểm tra bằng hai enzyme cắt giới hạn XhoI và EcoRV để chắc chắn vector mang đoạn gen đích.
Q trình tách DNA plasmid từ dịch ni vi khuẩn sử dụng bộ Anapure plasmid mini kit và thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Sản phẩm cắt được điện di kiểm tra trên gel Agarose 1% (Hình 3.7).
Hình 3.7: Điện di đồ sản phẩm cắt vector pJET1.2/OmpL1
(1) Vector pJET1.2/OmpL1; (2) Sản phẩm của quá trình cắt bằng enzyme XhoI và EcoRV.
Kết quả cho thấy xuất hiện hai băng DNA mảnh, rõ nét, trong đó một băng có kích thước ngắn hơn plasmid trước khi cắt một đoạn rất nhỏ được dự đốn là sản phẩm cịn lại của plasmid sau q trình cắt. Băng cịn lại có kích thước khoảng 650bp tương đương với đoạn gen OmpL1 được thiết kế. Như vậy, quá trình cắt đã được thực hiện thành công, phù hợp với tính tốn lý thuyết và sản phẩm cắt đạt chất lượng tốt, có thể sử dụng cho các bước tiếp theo