trái phép trong trong chế phẩm đơng dược bằng sắc ký lớp mỏng (HPTLC) hiệu suất cao”.
Phương pháp xác định các chất ức chế phosphodiesterase - 5 trộn trái phép trong trong chế phẩm đơng dược bằng HPTLC của nhĩm tác giả đã sử dụng chất chuẩn gồm sildenafil citrat,
tadalafil (chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương), vardenafil (chuẩn Dược điển châu Âu). Mẫu tự tạo thêm chuẩn vào nền mầu viên nang, viên hồn, cao thuốc dựa trên bài thuốc Sâm nhung bổ thận, Minh Mạng thang, Điều nguyên cứu bản thang. Mẫu thực gồm 24 mẫu chế phẩm đơng dược, thực phẩm bảo vệ sức khỏe lưu hành tại Việt Nam.
Điều kiện sắc ký được khảo sát và lựa chọn là phương pháp HPTLC gồm pha tĩnh HPTLC silica gel 60 F254, phát hiện dưới đèn UV 254 nm và quét phổ vết tương ứng của chất, phân tích trên máy scanner để định tính và lựa chọn bước sĩng định lượng.
Điều kiện xử lý mẫu cũng được khảo sát và lựa chọn thực nghiệm bằng các hệ dung mơi chiết: Methanol, methanol-nước (70:30), metha- nol-nước-ammoniac 25% (75:25:1), acetonitrile để từ đĩ lựa chọn dung mơi cho hiệu suất chiết cao.
Phương pháp đã được thẩm định theo hướng dẫn của AOAC, ICH với các tiêu chí gồm độ đặc hiệu, độ phù hợp của hệ thống, độ chọn lọc, khoảng tuyến tính, giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), độ lặp lại, độ đúng.
Với việc lựa chọn điều kiện sắc ký là hệ ethyl acetat-isopropanol-amoniac 25% (45:5:2,6) cho Rf của sildenafil, vardenafil, tadalafil tương ứng 0,21; 0,35; 0,56. Bước sĩng định lượng đối với sildenafil, vardenafil và tadalafil lần lượt là 304 nm, 251nm và 285 nm... Kết quả thu được là:
Cmax: Nồng độ tối đa của thuốc trong huyết tương.
IC50 cho PDE-5: Nồng độ của thuốc cần thiết để ức chế 50% hoạt tính của PDE-5. T1/2: Thời gian bán hủy của thuốc.
Tmax: Thời gian để nồng độ thuốc đạt tối đa trong huyết tương.
Chỉ tiêu Yêu cầu Kết quả
Độ chọn lọc
Tương đương Rf Hệ số tinh khiết ≥ 0,99 Hệ số chồng phổ ≥ 0,99
Sắc ký đồ mẫu nền khơng cĩ pic tại Rf của 3 chất chuẩn. Sắc ký đồ mẫu chuẩn và mẫu chuẩn trên nền mẫu cĩ hình dạng và màu sắc Rf tương đương nhau, hệ số chồng phổ của 3 chất ≥ 0,99. Độ phù hợp
của hệ thống
RSD ≤ 2,0% (n=6)
S pic với RSD của sildenafil là 1,4%;Tadalafil là 1,9%; Vardenafil là 1,5%