4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4. Quy trình sản xuất chitosanoligosaccharide sử dụng enzyme chitosanase
chitosanase
Dựa trên các kết quả thu ựược ở trên và một số kết quả nghiên cứu trước chúng tôi ựề xuất quy trình thu nhận COS bằng công nghệ enzyme trên quy mô phòng thắ nghiệm (ựồ 4.2).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 84
Sơ ựồ 4.2 Quy trình thu nhận COS từ chitosan sử dụng enzyme chitosanase
Enzyme chitosanase ựược thu nhận bằng việc nuôi cấy xạ khuẩn
Streptomyces griceus (chủng NN2). Tiến hành sấy ựông khô và tủa muối ở phân ựoạn 50 - 70% sau ựó ựi thẩm tắch nhằm tinh sạch enzyme ta ựược enzyme chitosanase kĩ thuật.
Sau khi thu ựược dung dịch chitosan 2% ta tiếp tục cho enzyme chitosanase vào ựể thuỷ phân thu nhận dịch COS. Các ựiều kiện ựược tiến hành như sau: enzyme ựược ựưa và theo tỷ lệ enzym/cơ chất (E/S) là 0,12
Dung dịch chitosan 2% Dịch COS Acid acetic 2% - Thêm enzyme tỷ lệ E/S=0,12 - điều chỉnh pH= 6,5 - Ủ ở 60oC trong 10 giờ - Bất hoạt enzyme bằng cách ựun sôi trong 2 phút
Tinh sạch Cô ựặc Siro COS Enzyme chitosanase Chitosan
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 85
(Venzyme = 0,6ml; Vchitosan = 5ml). Sau ựó chuẩn pH môi trường về pH = 6,5 bằng HCl 0,1N và NaOH 0,1N. đưa hỗn hợp dung dịch trên ựem ựi ủ ở 600C trong 10 giờ. Sau 10 giờ lấy dung dịch ựem ựi ựun sôi trong 2 phút ựể bất hoạt enzyme. Tiến hành làm lạnh nhanh tới nhiệt ựộ phòng, sau ựó ly tâm 6000 vòng trong 5 phút ựể loại bỏ cặn tủa ta thu ựược dịch COS.
Thực hiện tinh sạch dịch ựường bằng cách bổ sung than hoạt tắnh và ựất trợ lọc theo một hàm lượng nhất ựịnh vào trong dịch ựường sau khi thuỷ phân. Than hoạt tắnh ựóng vai trò là chất hấp thụ, khử màu và mùi của dịch ựường. đất trợ lọc hỗ trợ khử màu, khử mùi của dịch ựường, vai trò chủ yếu là chất trợ lọc.
Dịch COS sau khi ựược tinh sạch ta tiến hành cô ựặc tới 300 Ờ 400Brix ta thu ựược siro COS.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 86