3. đỐI TƯỢNG Ờ NỘI DUNG Ờ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.5.Xây dựng quy trình thu nhận enzyme chitosanase và ựường chitosanoligosaccharide (COS)
chitosanoligosaccharide (COS)
3.3.5.1. đề xuất quy trình thu nhận enxzyme chitosanase từ chủng xạ khuẩn Streptomyces griceus (chủng NN2)
Giống gốc Streptomyces griseus
(chủng NN2)
- Hoạt hóa - Nhân giống
Dịch trong
điều kiện nuôi cấy Môi trường nuôi cấy MT3 Giống khởi ựộng Môi trường hoạt hoá 36-48h - Lọc, ly tâm lạnh 40C, 6000 vòng/phút loại sinh khối cặn Lên men
Dịch lên men thô ngoại bào
Tủa phân ựoạn cồn và muối Li tâm lạnh 6000 vòng/phút Thời gian 20 phút
Loại bỏ
Dịch trong
Tủa phân ựoạn tốt nhất Li tâm lạnh 6000 vòng/phút Thời gian 20 phút Tủa Tủa Loại bỏ Hoà tan bằng ựệm axetate 0.2M pH=5 Chế phẩm enzyme chitosanase kỹ thuật
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 55
3.3.5.2. đề xuất quy trình thu nhận chitosanoligosaccharide (COS)
a. Quy trình
b. Thuyết minh quy trình
Chuẩn bị cơ chất và enzyme
- Pha dung dịch chitosan 2%.
Hoà tan chitosan bột 99.9% trong dung dịch acid acetic 2%. Sau 48 giờ dung dịch chitosan tan hoàn toàn. Sau ựó lên nước cất ựến thể tắch cần dùng ta ựược dung dịch chitosan 2%.
- Thu nhận enzyme chitosanase
Dung dịch chitosan 2%
Dịch COS
Acid acetic 2%
- Thêm enzyme tỷ lệ E/S - điều chỉnh pH, nhiệt ựộ, thời gian
- Bất hoạt enzyme bằng cách ựun sôi trong 2 phút
Tinh sạch Cô ựặc Siro COS Enzyme chitosanase Chitosan
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 56
Enzyme chitosanase ựược thu nhận bằng việc nuôi cấy xạ khuẩn
Streptomyces griceus (chủng NN2). Tiến hành sấy ựông khô và tủa muối ở phân ựoạn tốt nhất sau ựó ựi thẩm tắch nhằm tinh sạch enzyme ta ựược enzyme chitosanase kĩ thuật.
Thu nhận dịch COS
Sau khi thu ựược dung dịch chitosan 2% ta tiếp tục cho enzyme chitosanase vào ựể thuỷ phân thu nhận dịch COS. Các ựiều kiện ựược tiến hành như sau: enzyme ựược ựưa và theo tỷ lệ enzym/cơ chất (E/S) ựã ựược xác ựịnh. Sau ựó chuẩn pH môi trường về pH tối ưu bằng HCl 0,1N và NaOH 0,1N. đưa hỗn hợp dung dịch trên ựem ựi ủ ở nhiệt ựộ tối ưu trong 10 giờ. Sau 10 giờ lấy dung dịch ựem ựi ựun sôi trong 2 phút ựể bất hoạt enzyme. Tiến hành làm lạnh nhanh tới nhiệt ựộ phòng, sau ựó ly tâm 6000 vòng trong 5 phút ựể loại bỏ cặn tủa ta thu ựược dịch COS. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tinh sạch dịch COS
Thực hiện tinh sạch dịch ựường bằng cách bổ sung than hoạt tắnh và ựất trợ lọc theo một hàm lượng nhất ựịnh vào trong dịch ựường sau khi thuỷ phân. Than hoạt tắnh ựóng vai trò là chất hấp thụ, khử màu và mùi của dịch ựường. đất trợ lọc hỗ trợ khử màu, khử mùi của dịch ựường, vai trò chủ yếu là chất trợ lọc.
Cô ựặc
Dịch COS sau khi ựược tinh sạch ta tiến hành cô ựặc tới 300 Ờ 400Brix ta thu ựược siro COS.