4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.2.1. Chọn lựa các ựiều kiện môi trường nuôi cấy tối ưu xạ khuẩn Streptomyces griceus (chủng NN2) ựể sinh tổng hợp chitosanase
Streptomyces griceus (chủng NN2) ựể sinh tổng hợp chitosanase
Sau khi chúng tôi tiến hành các thắ nghiệm ở phần 3.3.3.1 chúng tôi thu ựược kết quả sau (trình bày ở bảng 4.1)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 60
Bảng 4.1 Ma trận qui hoạch thực nghiệm Doehlert theo phương pháp qui hoạch trực giao bậc 2, ba yếu tố và kết quả
Stt X1 (Nhiệt ựộ) (0C) X2 (pH) X3(Nồng ựộ rỉ ựường)(%) Hoạt tắnh(U/ml)
1 45 6 3 0.414 2 29 6 3 0.479 3 41 7 3 0.525 4 33 5 3 0.145 5 41 5 3 0.187 6 33 7 3 0.624 7 41 6 4 0.152 8 33 6 2 0.411 9 41 6 2 0.600 10 37 7 2 0.341 11 33 6 4 0.152 12 37 5 4 0.135 13 37 6 3 0.651
Sau khi xử lý kết quả nhờ phần mềm Nemrodw ta ựược kết quả:
Bảng 4.2 Hệ số trong phương trình hồi qui và mức ý nghĩa
Hệ số phương trình hồi qui Giá trị của hệ số hồi qui độ tin cậy
b0 0.65133 <0.01*** b1 0.00017 63.9 b2 0.15564 <0.01*** b3 -0.18643 <0.01*** b11 -0.20517 <0.01*** b22 -0.30663 <0.01*** b33 -0.40120 <0.01*** b12 -0.08179 <0.01*** b13 -0.08723 <0.01*** b23 0.09220 <0.01***
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 61
Phương trình hồi quy tổng quát là:
Y = b0 + b1*X1 + b2*X2 + b3*X3 + b11*(X1*X1) + b22*(X2*X2) + b33*(X3*X3) + b12*(X1*X2) + b13*(X1*X3) + b23*(X2*X3) Trong ựó : b0 là hệ số tự do bi là hệ số tuyến tắnh bi j là hệ số tương tác cặp
Qua ựộ tin cậy của hệ số hồi quy b2 là 63,9 > 0,01 có nghĩa là sự ảnh hưởng của yếu tố nhiệt ựộ ở dạng bậc 1 là ảnh hưởng không có ý nghĩa.
Dấu âm của giá trị b3 có nghĩa khi tăng nồng ựộ môi trường rỉ ựường trong khoảng khảo sát thì hoạt tắnh của enzyme giảm.
Vậy phương trình hồi quy có dạng là:
Y = 0.65133 + 0.15564*X2 Ờ 0.18643*X3Ờ 0.20517*(X1*X1) Ờ 0.30663*(X2*X2) Ờ 0.40120*(X3*X3) Ờ 0.08179*(X1*X2)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 62
đồ thị 4.1 (a) đồ thị biểu diễn mối quan hệ của X1 (nhiệt ựộ, 0C), X2 (pH) và X3 (nồng ựộ rỉ ựường, %) là tâm
Nhìn vào ựồ thị 4.1(a) thì khi lấy nồng ựộ rỉ ựường làm tâm (X3 =3%) ta thấy ựược sự tương tác giữa hai yếu tố nhiệt ựộ và pH ảnh hưởng ựến hoạt tắnh của enzyme. Trên ựồ thị không gian ba chiều thì vùng mầu ựỏ biểu thị vùng tối ưu có hoạt tắnh enzyme chitosanase là cao nhất. Qua ựồ thị 4.1 (a) ta thấy hoạt tắnh của enzyme chitosanase ựạt cao nhất khi X1 (nhiệt ựộ) nằm trong khoảng 350C ựến 390C, X2 (pH) nằm trong khoảng 6 ựến 6,5 và X3 (nồng ựộ rỉ ựường) là 3%.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 63
đồ thị 4.1 (b) đồ thị biểu diễn mối quan hệ của X1 (nhiệt ựộ, 0C), X3 (nồng ựộ rỉ ựường, %) và X2 (pH) là tâm
Qua ựồ thị 4.1 (b) ta thấy ựược sự tương tác giữa nhiệt ựộ và nồng ựộ rỉ ựường ảnh hưởng ựến khả năng sinh hoạt tắnh của enzyme. Ta lấy ựiều kiện pH làm tâm tức là giá trị pH = 6,5. Trên ựồ thị không gian ba chiều thì vùng có mầu ựỏ biểu thị vùng tối ưu ở ựó hoạt tắnh enzyme chitosanase là cao nhất. Nhìn vào ựồ thị mặt phẳng ta thấy rằng vùng tối ưu mà enzyme cho hoạt tắnh cao nhất với X1 nằm trong khoảng 350C ựến 39,50C; X3 nằm trong khoảng 2,5% ựến 3% và X2 = 6,5.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 64
đồ thị 4.1 (c) đồ thị biểu diễn mối quan hệ của X2 (pH), X3 (nồng ựộ rỉ ựường, %) và X1 (nhiệt ựộ, 0C) là tâm
Qua ựồ thị 4.1(c) biểu diễn mối quan hệ giữa pH và nồng ựộ rỉ ựường ảnh hưởng ựến khả năng sinh hoạt tắnh của enzyme. Ta lấy ựiều kiện nhiệt ựộ làm tâm tức là tại ựó giá trị nhiệt ựộ 370C. Ta thấy trên ựồ thị của không gian ba chiều vùng mầu ựỏ biểu thị vùng tối ưu ở ựó hoạt tắnh enzyme chitosanase là cao nhất. Nhìn vào ựồ thị mặt phẳng ta thấy rằng vùng tối ưu mà enzyme cho hoạt tắnh cao nhất với X2 nằm trong khoảng 5,9 ựến 6,7; X3 nằm trong khoảng 2,4% ựến 3% và X1 370C.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 65
Qua ựồ thị 4.1 (a), (b), (c) ta thấy hoạt tắnh của enzyme chitosanase ựạt cao nhất khi X1 nằm trong khoảng từ 350Cựến 40,50C; X2 từ 6 ựến 6,5; X3 từ 2,5% ựến 3%.
Qua bảng 4.2 thì hoạt tắnh của enzyme chitosanase ựạt cao nhất là: 0,651 (U/ml) ở ựiều kiện nuôi cấy nhiệt ựộ là 370C, pH môi trường 6, nồng ựộ rỉ ựường thay thế 3%.
Trên cơ sở ựó, chúng tôi chọn X1, X2, X3 tối ưu lần lượt là: 370C, 6, 3% ựể xạ khuẩn chủng NN2 sinh tổng hợp cao enzyme chitosanase.
Qua tham khảo những nghiên cứu về chọn lựa ựiều kiện nuôi cấy tối ưu cho xạ khuẩn Streptomyces griceus sinh tổng hợp chitosanase ựã công bố [4], [19]. Số liệu thu ựược của chúng tôi là phù hợp.