- EMEM 5%FCS PBS
3.5.1 Chuẩn ựộ kháng huyết thanh bằng phương pháp ELISA
Qua theo dõi hàm lượng kháng thể tăng theo các tuần chúng tôi thu hoạch huyết thanh của 3 lợn ở cuối tuần thứ 4 sau khi công. Từ 3 lợn ựược dùng chế kháng thể chúng tôi lấy tĩnh mạch cổ của cả 3 lợn, chắt lấy thu huyết thanh sau ựó trộn ựều, lượng huyết thanh chúng tôi thu ựược là 200ml. Sử dụng 2 kháng nguyên tự chế và Herdcheck 3X, chuẩn ựộ kháng huyết thanh chế ựược. Kháng nguyên sử dụng ựể cốt ựĩa cho phản ứng là là kháng
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 58
nguyên tự chế pha loãng 1/200 và ựĩa, nguyên liệu của của Herdcheck 3X, huyết thanh pha loãng theo 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640. Tổng hợp kết quả S/P trung bình cho 3 lần chuẩn ựộ kháng huyết thanh chế ựược của cùng loại kắt ELISA nhưng với 2 loại kháng nguyên khác nhau ựược thể hiện ở bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả chuẩn ựộ kháng huyết thanh bằng 2 kháng nguyên Kháng nguyên cốt ựĩa Kháng thể pha loãng Kháng nguyên tự chế 1/200 (S/P) Kháng nguyên Herdcheck 3X (S/P) 1/20 2,033 1,921 1/40 1,330 1,118 1/80 1,017 0,954 1/160 0,667 0,616 1/320 0,305 0,215 1/640 0,211 0,191
Từ kết quả bảng 3.6 cho thấy khi làm phản ứng ở cùng một thời ựiểm và ựược lặp lại 3 lần kết quả trung bình cho thấy kháng huyết thanh pha loãng ở nồng ựộ 1/20, 1/40 và 1/80 có giá trị S/P quá lớn, lớn hơn rất nhiều ngưỡng giá trị S/P là 0,4. Khi kháng nguyên ựã ựược chuẩn hóa 1/200 và ựưa vào chẩn ựoán kiểm tra kháng thể thì theo kết quả chuẩn ựộ này chúng tôi chọn kháng huyết thanh pha loãng là 1/160 có giá trị S/P trong khoảng 0,667, khi so sánh với kắt Herdcheck 3X thì cho kết quả S/P tương ựương là 0,616. Như vậy ở ngưỡng S/P là >= 0,4. Lấy kắt Herdcheck 3X làm chuẩn thì kết quả của kháng nguyên và kháng thể chế ựược có giá trị tương ựương. Ở trong nghiên cứu này chúng tôi chọn ựộ pha loãng kháng nguyên 1/200 và kháng thể là 1/160 làm nồng ựộ chuẩn sử dụng trong phản ứng ELISA. Nồng ựộ pha
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 59
1/320, 1/640 của kháng huyết thanh, ở ngưỡng giá trị S/P của 2 phản ứng <0,4 giá trị này quá thấp và kháng thể là âm tắnh.
Hình 3.10. Biểu ựồ kết quả chuẩn ựộ kháng thể sau khi chế