- EMEM 5%FCS PBS
3.5.2Chuẩn ựộ kháng thể bằng phương pháp IPMA
đối với phương pháp IPMA, chúng tôi thực hiện chuẩn ựộ kháng huyết thanh chế ựược pha loãng theo cơ số 2 bắt ựầu từ 1/10 ựến 1/10240, sau ựó cho gắn vào các giếng của tế bào MARC 145 ựã có bệnh tắch (liều vi rút gây nhiễm là 500 TCTD50/1ml sau 72 giờ). Khi phản ứng kết thúc kết quả chuẩn ựộ kháng huyết thanh ở ựộ pha loãng là 1/320 bệnh tắch tế bào bị nhiễm vi rút có kháng thể gắn enzyme và cơ chất phát màu cho hình ảnh rõ ràng, ở ựộ pha loãng này hình ảnh kết hợp kháng nguyên kháng thể trên tế bào là ựặc trưng, thể hiện trong nguyên sinh chất của tế bào bắt màu ựỏ sẫm rất rõ ràng so với các tế bào không có sự kết hợp kháng nguyên và kháng thể. đối với các nồng ựộ pha loãng từ 1/10-> 1/160 và 1/640 ựến 1/10240 hình ảnh bệnh tắch không
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 60
rõ ràng rất khó ựể chọn là hình ảnh ựối chứng của phản ứng IPMA.
Dưới ựây là một số hình ảnh về kết quả sau khi làm phản ứng IPMA. đối với các nồng ựộ khác nhau thì các hình ảnh về bệnh tắch có miễn dịch là khác nhau. đối với hình ảnh nồng ựộ kháng huyết thanh pha loãng càng thấp thì mật ựộ các tế bào bắt màu ựỏ ựậm trong nguyên sinh chất nhiều tuy nhiên rất khó ựánh giá chắnh xác. Nồng ựộ pha loãng kháng huyết thanh thắch hợp thì hình ảnh ựỏ ựậm trong nguyên sinh chất càng rõ ràng và dễ ựánh giá kết quả.
Một số hình ảnh của các nồng ựộ pha loãng kháng huyết thanh chuẩn ựộ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 61
Hình 3.12. Kháng huyết thanh pha loãng 1/320 trong phản ứng IPMA
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 62
Hình 3.14. Kháng huyết thanh pha loãng 1/5120 trong phản ứng IPMA
Hình 3.15. Kháng huyết thanh pha loãng 1/10240 trong phản ứng IPMA
Trên ựây là một số hình ảnh ở các nồng ựộ pha loãng kháng huyết thanh ựược nhuộm bằng phương pháp IPMA. Kết quả ựược mô tả bằng hình 3.12 là hình ảnh rõ ràng ựặc trưng của phản ứng, phân nguyên sinh chất của tế bào bắt màu ựỏ ựậm rõ ràng khó có sự nhầm lẫn giữa tế bào bệnh tắch ựược gẵn miễn dịch và tế bào bệnh tắch không ựược gắn miễn dịch. Do ựó nồng ựộ pha loãng kháng huyết thanh 1/320 là nồng ựộ tối ưu, ựặc trưng cho phản ứng IPMA.