- EMEM 5%FCS PBS
3.9 Kết quả so sánh 343 mẫu bằng 2 phương pháp ELISA và IPMA
Trong các phương pháp chẩn ựoán huyết thanh học bệnh PRRS phương pháp ELISA ựược dùng phổ biến trong các phòng thắ nghiệm. Ngoài ra phương pháp IPMA (Phương pháp miễn dịch có gắn enzym trên tế bào 1 lớp MARC 145) cũng ựược coi là phương pháp có ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu cao, do có sự kết hợp trực tiếp giữa kháng nguyên và kháng thể. Trong nghiên cứu này chúng tôi ựã làm phản ứng với 343 mẫu kiểm tra bằng 2 phương pháp ELISA và IPMA. ELISA sử dụng 2 nguyên liệu: Nguyên liệu (kháng nguyên, kháng thể) 07196 và nguyên liệu của kắt HerdCheck 3X làm trong ngày, với
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 70
phương pháp IPMA phức tạp hơn phải làm trong 2 tuần và kết quả ựược ựánh giá ở bảng 3.11.
Bảng 3.11. Kết quả so sánh của 2 phương pháp ELISA và IPMA Dương tắnh Âm tắnh Phương pháp Số mẫu Tỉ lệ % trong 343 mẫu Số mẫu Tỉ lệ % trong 343 mẫu IPMA 178 51,90% 165 48,10% Kắt Herdcheck X3 183 53,35% 160 46,65% KN, KT 07196 181 52,77% 162 47,23%
Từ bảng 3.11 cho thấy phản ứng ELISA so sánh giữa 2 nguyên liệu khác nhau cho kết quả dương tắnh là tương ựương nhau về mức ựộ các mẫu dương tắnh. Trong 343 mẫu kiểm tra có 183 mẫu dương tắnh với kắt herdcheck 3X và 181 mẫu với kháng nguyên và kháng thể 07196. Như vậy ở cùng ựiều kiện làm phản ứng chỉ khác nhau về kháng nguyên cốt trên ựĩa ELISA và kháng thể ựối chứng, kết quả chỉ có 2 mẫu huyết thanh có sự sai khác, kắt Herdcheck 3X có ựộ nhạy cao hơn ựối với kháng nguyên và kháng thể 07196.
Với phương pháp IPMA có 178 mẫu dương tắnh chiếm 51.90%. Kiểm tra bằng kắt Herdcheck 3X có 183 mẫu dương tắnh chiểm 53.35% mẫu còn với phương pháp ELISA sử dụng kháng nguyên và kháng thể 07196 theo kết quả cho thấy có 181 mẫu dương tắnh chiếm 52,77%. Như vậy theo bảng 3.11 kết quả bằng phương pháp IPMA và ELISA sử dụng kháng nguyên kháng thể
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 71
cho thấy tỉ lệ các mẫu dương tắnh của 2 phương pháp là tương ựương nhau sự sai khác rất nhỏ. Tuy nhiên với phương pháp ELISA có ựộ nhạy cao hơn phương pháp IPMA ở cùng ựiều kiện về kháng nguyên và kháng thể kiểm tra là 0,87%. Mức ựộ chênh lệch giữa các phương pháp chúng tôi thể hiện ở bảng 3.12.
Bảng 3.12. So sánh của phương pháp ELISA và IPMA Tỉ lệ % dương tắnh trong 343 mẫu huyết thanh kiểm tra
Phương pháp ELISA Phương pháp IPMA
Chênh lệch Kắt Herdcheck 3X 53,35% 1,45% KN, KT 07196 52,77% 51,90% 0,87%
đối với phản ứng IPMA tỉ lệ dương tắnh thấp hơn so với phản ứng ELISA nguyên liệu kắt HerdCheck 3X là 1,45%. Như vậy về ựộ nhạy của phương pháp IPMA là không cao so với phương pháp ELISA, khả năng còn có những mẫu âm tắnh giả trong số mẫu nghiên cứu. Do vậy ựể chẩn ựoán kháng thể kháng vi rút PRRS thì phương pháp ELISA vẫn là phương pháp ựược ưu tiên lựa chọn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 72
Hình 3.16. đồ thị so sánh 2 phương pháp chuẩn ựoán kháng thể PRRS 3.10 Mỗi tương quan giữa nguyên liệu tự chế và kắt Herdcheck 3X
So sánh mối tương quan giữa 2 nguyên liệu ở cùng một thời gian, ựiều kiện làm phản ứng cho thấy mối tương ựồng giữa 2 nguyên liệu là tốt, mật ựộ tập trung cao.
Kết quả kiểm tra của hai nguyên liệu chẩn ựoán chúng tôi biểu diễn bằng biều ựồ 3.17
Trong kết quả biểu ựồ 3.17 cho thấy ựộ lệch chuẩn tương ựương với ựộ chắnh xác của 2 nguyên liệu ựạt là 0,84% vậy còn 0,16% không tương ựương. Với ựộ tin cậy của phản ứng là 95%, dao ựộng cho phép về ựộ chuẩn xác và ựộ lệch chuẩn trong khoảng là 0,81-> 0,86%.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 73
Hình 3.17. Mối tương quang giữa kháng nguyên, kháng thể tự chế và kắt Herdcheck 3X
Mặt khác mật ựộ các giá trị S/P của nguyên liệu tự chế 07196 nằm trong khoảng là 0,4->3, các mẫu dương tắnh của nguyên liệu kắt HerdCheck 3X, giá trị S/P nằm tập trung trong khoảng 0,4 -> 4,85. Kết quả trên cho thấy các mẫu dương tắnh của kháng nguyên và kháng thể 07196 có kết quả tập trung hơn. Sự tương ựồng giữa kháng nguyên và kháng thể kiểm tra tốt hơn kắt HerdCheck 3X. Dựa vào kết quả này một lần nữa chứng minh ựộ ựặc hiệu của kháng nguyên kháng thể 07197 ựạt 100% khi dùng làm nguyên liệu cho phản ứng ELISA phát hiện kháng thể PRRS.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 74
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ Kết luận
1. Chế ựược kháng nguyên chẩn ựoán huyết thanh học bệnh PRRS dưới 2 dạng là kháng nguyên sống dùng trong phản ứng IPMA là 150ml và dạng protein vi rút dùng làm kháng nguyên cho phản ứng ELISA là 20ml. 2. Chuẩn ựộ kháng huyết thanh ựối chứng cho phản ứng ELISA, xác ựịnh nồng ựộ pha loãng là 1/160 và phản ứng IPMA, xác ựịnh nồng ựộ pha loãng là 1/320. Lượng kháng huyết thanh thu ựược là 200ml.
3. Kiểm tra ựộ nhạy của kháng nguyên và kháng thể trong chẩn ựoán bệnh PRRS bằng phản ứng ELISA ựạt 96,66% và ựộ ựặc hiệu ựạt 100%. 4. Thử nghiệm 343 mẫu của 3 tỉnh là Bắc Giang, Bạc Liêu, Gia Lai bằng nguyên liệu tự chế so sánh với kắt Herdcheck 3X cho kết quả về mức ựộ tương ựồng cao ựạt 0.86% và dao ựộng cho phép từ 0,81->0,86%.
đề nghị
1. Tiếp tục nghiên cứu về bản chất của kháng nguyên, kháng thể 07196 ựể có thể cho chế phẩm sự dụng rộng rãi trong chẩn ựoán phát hiện kháng thể kháng vi rút PRRS chủng Bắc Mỹ.
2. để có ựược những kết quả chắnh xác hơn về ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu của kháng nguyên và kháng thể 07196 ựề nghị ựược có những nghiên cứu tiếp theo với số lượng mẫu so sánh lớn hơn.
3. Cần có nghiên cứu tiếp theo ựể ựánh giá ựược mức ựộ chuẩn xác khi dùng kháng nguyên và kháng thể trong chẩn ựoán huyết thanh học bệnh PRRS bằng cách tham chiếu ở các phòng thắ nghiệm chuyên sâu trên thế giới.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 75