- EMEM 5%FCS PBS
2.3.6 Phương pháp kiểm tra ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu của kháng nguyên và kháng thể tự chế
kháng thể tự chế
* đánh giá ựộ nhạy chẩn ựoán (DSe- Diagnotic Sensitivity)
Ớ Mục ựắch: đánh giá khả năng phát hiện chắnh xác các mẫu huyết thanh lợn ựược tiêm phòng vắc xin PRRS chủng Bắc Mỹ có kháng thể kháng vi rút PRRS ựược xác ựịnh bằng kháng nguyên tự chế thông qua phản ứng ELISA. Mẫu huyết thanh này gọi là mẫu huyết thanh dương tắnh.
Ớ Phương pháp:
- Nguyên liệu: 140 mẫu huyết thanh lợn ựã ựược xác ựịnh là dương tắnh với kháng thể kháng vi rút PRRS (kắt Herdcheck 3X).
- Dùng kháng nguyên tự chế cốt ựĩa làm phản ứng ELISA
- Phương pháp xét nghiệm: Phương pháp ELISA - Dùng công thức bảng 2x2
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 41
ELISA
Huyết thanh ựã ựược xác ựịnh(kắt Herdcheck X3) Dương tắnh Âm tắnh Dương tắnh a b
KN thắ
nghiệm Âm tắnh c d
đánh giá ựộ nhạy của kháng nguyên tự chế ựược tắnh theo công thức sau: a
độ nhạy (DSe) = --- x 100 a + c a: Số mẫu dương tắnh với KN, KT tự chế
a +c: Tổng số mẫu HT dương tắnh (Kắt Herdcheck 3X)
* đánh giá ựộ ựặc hiệu chẩn ựoán (DSp- Diagnotic Specifitity)
Mục ựắch: đánh giá khả năng phát hiện chắnh xác các mẫu huyết thanh lợn không ựược tiêm phòng vắc xin PRRS và không có kháng thể kháng vi rút PRRS ựược xác ựịnh bằng kháng nguyên tự chế thông qua phản ứng ELISA. Mẫu huyết thanh này gọi là mẫu huyết thanh âm tắnh chuẩn.
Phương pháp:
- Nguyên liệu: 70 mẫu huyết thanh lợn âm tắnh với kháng thể PRRS (âm tắnh ựối với chỉ tiêu cần kiểm tra Ờ kắt Herdcheck 3X).
- Phương pháp xét nghiệm: Phương pháp ELISA
đánh giá ựộ ựặc hiệu của kháng nguyên tự chế ựược tắnh theo công thức sau (theo bảng 2x2 ở trên):
d độ ựặc hiệu (DSp) = --- x 100 b + d
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 42
d: Số mẫu âm tắnh với KN,KT tự chế
2.3.7 Phương pháp tắnh TCID50 theo công thức Karber:
TCID50= log [L- d(S- 0.5)]
(lượng nhỏ vào các giếng là 50ộl vi rút pha loãng)