- EMEM 5%FCS PBS
3.8 Kết quả so sánh mẫu huyết thanh chẩn ựoán bằng kháng nguyên và kháng thể tự chế với kắt Herdcheck 3X.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 68
Một trong những mục tiêu nghiên cứu là ựưa kháng nguyên và kháng thể 07196 vào chẩn ựoán huyết thanh học bệnh PRRS bằng phản ứng ELISA, nhằm mục ựắch giảm giá thành. Do ựó chúng tôi tiến hành thử nghiệm với một số lượng lớn mẫu huyết thanh nghi. Thử nghiệm lấy mẫu trên 3 tỉnh Bắc Giang, Gia lai, Bạc Liêu với số lượng mẫu mỗi tỉnh lớn hơn 80 mẫu, các mẫu huyết thanh lợn ựược lấy ngẫu nhiên không xác ựịnh ựã tiêm vắc xin hay không. Mục ựắch của thắ nghiệm là xem xét khả năng phát hiện kháng thể của kháng nguyên, kháng thể 07196 bằng phản ứng ELISA. Khi tiến hành làm phản ứng chúng tôi làm song song giữa kháng nguyên cốt trên ựĩa ELISA, kháng huyết thanh 07196 và kháng nguyên cốt sẵn trên ựĩa ELISA, kháng thể ựối chứng của kắt HerdCheck 3X. Phản ứng thực hiện cùng một thời gian và dung dịch ựệm, ựiều kiện phòng thắ nghiệm.
Phép thử của chúng tôi tiến hành trên 343 mẫu, do ựiều kiện kắt HerdCheck 3X giá thành ựắt nên chúng tôi chỉ so sánh ựược một lượt. Kết quả tắnh toán từ giá trị OD thu ựược của máy ựọc ELISA, giá trị S/P tổng hợp và phân tắch trình bày ở bảng 3.10
Bảng 3.10. Kết quả so sánh của 343 mẫu huyết thanh trên 2 phản ứng KN, KT tự chế Kắt Herdcheck 3X Tỉnh Tổng số 343 mẫu HT Dương tắnh Tỉ lệ dương tắnh (%) Dương tắnh Tỉ lệ dương tắnh (%) Bắc Giang 85 6 7,06 6 7,06 Bạc Liêu 152 104 68,42 107 70,39 Gia Lai 106 71 66,98 70 66,04
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 69
Từ kết quả bảng 3.10, ựể ựánh giá kết quả của 2 phản ứng ELISA chúng tôi xác ựịnh ngưỡng ựánh giá dương tắnh và âm tắnh của hai phản ứng. Khi mẫu huyết thanh kiểm tra có giá trị S/P lớn hơn hoặc bằng 0,4 tức là phản ứng. điều này ựược khẳng ựịnh khi chúng tôi ựã chuẩn hóa kháng nguyên và kháng thể về ựộ nhạy của kháng nguyên và kháng thể tự chế là 96,66% và ựộ ựặc hiệu ựạt là 100% qua 3 phép thử ựã kết luận.
Trong 343 mẫu huyết thanh kiểm tra ngẫu nhiên tại 3 tỉnh Bắc Giang, Bạc Liêu, Gia Lai kết quả so sánh của 2 phản ứng cho kết quả không sai khác nhiều.
+ Với huyết thanh của tỉnh Bắc Giang ựạt là 6/85 mẫu ở cả 2 phản ứng. + Mẫu của Bạc Liêu có 3/152 mẫu chênh lệch nhau về kết quả giữa 2 phản ứng ựạt là 68,42% và 70,39%. Như vậy phản ứng kháng nguyên và kháng thể tự chế thấp hơn phản ứng của kắt HerdCheck 3X là 1.97%.
+ Mẫu kiểm tra của tỉnh Gia Lai kết quả xét nghiệm là tương ựương nhau 66,98% và 66,04% chỉ có 1 sai khác về kết quả. Khi làm phản ứng song song giữa hai nguyên liệu (KN, KT) thì thấy ựộ nhạy và ựộ ựặc hiệu của nguyên liệu tự chế 07196 là giống với nguyên liệu của Herdcheck 3X sự sai khác rất nhỏ ựộ tin cậy lớn hơn 95%.