- Các chỉ tiêu ký sinh trùng
3. Xác định E.coli trong thịt theo TCVN 7924-2: 2008.
Nguyên lý:
E. coli dương tính - glucuronidaza. Vi khuẩn ở nhiệt độ 44°C hình thành các khuẩn lạc màu xanh điển hình trên môi trường Tryptone Bile X-glucuronide (TBX). Dựa vào đặc tính này ta có thể phát hiện và định lượng được vi khuẩn E. coli.
Cách tiến hành:
Cấy ở 3 độ pha loãng 10-1; 10-2; 10-3, mỗi độ pha loãng nuôi cấy trên 2 đĩa môi trường. Dùng pipet vô trùng chuyển 1 ml dung dịch mẫu ở các độ pha loãng tương ứng vào giữa các đĩa petri vô trùng. Rót vào mỗi đĩa khoảng 15 ml môi trường TBX đã đun tan chảy và được làm nguội đến nhiệt độ 44 – 47°C. Xoay nhẹ đĩa theo chiều kim đồng hồ hoặc lắc sang hai bên để cho mẫu tan đều vào môi trường, để đông tự nhiên ở nhiệt độ phòng trên mặt phẳng nằm ngang. Lật ngược các đĩa, nếu cần ủấm các đĩa này ở 37°C/4h sau đó chuyển sang ủ ấm ở 44°C/18 - 24h.
Tính kết quả:
Chọn các đĩa có chứa ít hơn 150 khuẩn lạc điển hình của E. coli dương tính glucuronidaza và ít hơn 300 khuẩn lạc tổng số trên mỗi đĩa thạch.
Số lượng khuẩn lạc E. coli trong 1g mẫu thửđược tính theo công thức:
Trong đó:
N: Số khuẩn lạc E. coli trong 1g thịt (CFU/g )
a: Là tổng số các khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa được giữ lại sau 2 độ pha loãng liên tiếp, có ít nhất 1 đĩa chứa tối thiểu 15 CFU màu xanh. n1: Sốđĩa được giữ lại ởđộ pha loãng thứ nhất
n2: Sốđĩa được giữ lại ởđộ pha loãng thứ hai
V: Thể tích mẫu cấy đã dùng trên mỗi đĩa, tính bằng ml
d: Hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ nhất được giữ lại (d = 1 trong trường hợp các mẫu ở dạng lỏng khi mẫu thửđược cấy trực tiếp). Nếu đĩa chứa ít hơn 10 khuẩn lạc, nhưng có ít nhất 4 khuẩn lạc, thì tính kết
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 quả theo trường hợp chung ở trên và báo cáo kết quả là sốước tính nhân với VSV trong 1ml hoặc 1g sản phẩm.
Nếu tổng số khuẩn lạc từ 3 đến 1, thì độ chụm của kết quả là quá thấp và kết quả phải được ghi như sau: “Có mặt vi sinh vật nhưng nhỏ hơn (4 × d) trên 1g hoặc 1ml.
Trong trường hợp ở nồng độđầu tiên không có khuẩn lạc đặc trưng nào mọc lên thì tổng số E. coli được biểu thị kết quả như sau: “ít hơn 1/d vi sinh vật trong 1ml (sản phẩm dạng lỏng)” hoặc “ ít hơn 1/d vi sinh vật trong gam (sản phẩm dạng khác).
Với d là hệ số pha loãng mẫu của huyền phù ban đầu hoặc độ pha loãng thứ nhất đã cấy hoặc giữ lại.