- Các chỉ tiêu ký sinh trùng
7. Xác định Coliforms tổng số trong thịt theo TCVN 6848 :
Nguyên tắc: Cấy một lượng mẫu thử xác định (mẫu lỏng) hoặc với một lượng xác định huyền phù ban đầu (mẫu khác) lên cặp đĩa petri trống vô trùng. Đổ khoảng 12-15ml môi trường VRBL (Violet Red Bile lactoza) vào trung tâm đĩa. Lắc hoặc xoay sao cho vi khuẩn phân tán đều trong lòng thạch. Sử dụng các dung dịch pha loãng thập phân cần thiết (10-1, 10-2, 10-3).
Ủ các đĩa ở 30oC/24h
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 77 lên men lactoza.
Xử lý sơ bộ và pha loãng mẫu
Đồng nhất mẫu bằng cách cân chính xác 25 g hoặc 10 g mẫu thử đặc (hoặc 25 ml hoặc 10 ml đối với mẫu thử lỏng) trong túi đập mẫu vô trùng.
Bổ sung 225 ml hoặc 90 ml nước đệm pepton vô trùng để thu được lượng dịch mẫu pha loãng ban đầu 10-1. Đập mẫu bằng máy Stomacher, dung dịch thu được gọi là dung dịch mẫu.
Dùng pipet vô trùng chuyển 1ml mẫu thử (dạng lỏng) hoặc huyền phù ban đầu
(10-1) nếu ở dạng khác vào 1 cặp đĩa Petrri vô trùng. Tiến hành tương tự với các nồng độ pha loãng tiếp theo.
Đổđĩa:
Rót vào mỗi đĩa khoảng 15 ml thạch VRBL trước đó đã được đun tan chảy và làm nguội đến 44 – 47oC trên nồi cách thủy.
Trộn đều thạch và mẫu thử bằng cách quay sang trái và phải mỗi chiều 5 vòng cho vi khuẩn phân tán đều trong thạch. Đểđông tự nhiên ở mặt phẳng nằm ngang. Chuẩn bịđồng thời 1 đĩa để kiểm tra vô trùng.
Sau khi đông đặc hoàn toàn, rót khoảng 4 ml cùng loại môi trường trên lên bề mặt các đĩa. Để đông tự nhiên.
Lật ngược các đĩa, để vào tủấm ở 30oC/24 ± 2h.
Đọc kết quả: Đếm các khuẩn lạc điển hình trên môi trường VRBL, tính kết quả số khuẩn lạc Coliform/g hoặc ml sản phẩm.(khuẩn lạc có màu đỏ ánh tía có ĐK 0.5mm hoặc lớn hơn, đôi khi có vùng mật tủa hơi đỏ bao quanh).
Với các khuẩn lạc không điển hình, cấy 5 khuẩn lạc vào các ống nghiệm chứa canh thang mật lactoza lục sáng. Ủ các ống này ở 30oC/24h. Các ống Durham cho thấy sinh khí được coi là có chứa Coliform.
Tính kết quả từ các khuẩn lạc điển hình trên môi trường VRBL theo công thức sau:
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 78 C: số khuẩn lạc điển hình đếm được trên các đĩa
n1, n2: sốđĩa ở 2 nồng độ pha loãng 1, 2 d: hệ số pha loãng thứ nhất được chọn
N: số khuẩn lạc trên 1 g hoặc 1 ml mẫu thử và được biếu thị kết quả dưới dạng thập phân giữa 1,0 và 9,9 nhân với 10x là số mũ thích hợp.