- Các chỉ tiêu ký sinh trùng
1. TCVN 6187-2:1996 (ISO 9308 2: 1990) Chất lượng nước xác định phát hiện và đếm vi khuẩn Coliform, vi khuẩn Coliform chịu nhiệt và Escherichia col
giảđịnh.
Phương pháp nhiều ống (số có xác suất cao nhất)
Nguyên tắc: Cấy các phần mẫu thửđã được pha loãng hoặc không pha loãng vào một dãy ống nghiệm chứa môi trường nuôi cấy chọn lọc dạng lỏng có lactoza. Kiểm tra các ống thử sau 24h và 48h nuôi ở nhiệt độ 35°C hoặc 37°C; cấy chuyển tiếp từ mỗi ống có biểu hiện đục kèm sinh khí vào một ống môi trường khẳng định chọn lọc hơn và khi muốn tìm E. coli giả định cấy vào một môi trường mà qua đó có thể quan sát thấy sự tạo thành indol. Nuôi các môi trường khẳng định này cho tới 48h ở nhiệt độ 35°C hoặc 37°C để xác định các loại Coliform chịu nhiệt và E. coli giảđịnh. Bằng các bảng thống kê, tính toán số xác suất cao nhất các dạng Coliform,
Coliform chịu nhiệt và E. coli giảđịnh có thể có trong 100ml mẫu thử từ số các ống thử có kết quả xác nhận dương tính.
Nuôi cấy: Chuẩn bị mẫu thử, tiến hành pha loãng mẫu cấy vào môi trường phân lập các phần mẫu thử theo ISO 8199.
Cấy và ủ mẫu vào môi trường Trypton Lauryl Sulfat (TLS): Mỗi nồng độ pha loãng cấy vào 3 dãy liên tiếp mỗi dãy chứa 5 ống môi trường TLS. Cấy 10ml mẫu thử vào mỗi ống ở dãy 5 ống đầu tiên, 1ml mẫu thử vào mỗi ống ở dãy 5 ống tiếp theo và 0,1ml mẫu thử vào mỗi ống ở dãy 5 ống cuối cùng.
Nuôi cấy ở 37ºC, đếm số lượng các ống TLS cho kết quả dương tính ở mỗi dãy sau 24h – 48h.
Để khẳng định Coliform: Cấy chuyển một vòng que cấy từ mỗi ống TLS dương tính sang một ống nghiệm chứa một trường Brilliant Green Bile 2% broth (BGB), ủở 30ºC trong 24 h.
Để khẳng định E. coli cần thực hiện tiếp:
Cấy chuyển và ủ môi trường Escherichia coli broth (EC): Cấy chuyển một vòng que cấy từ mỗi ống nghiệm TLS dương tính sang mỗi ống nghiệm đựng canh
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 68 thang EC, ủ ở 44ºC trong 24h ± 2h. Đếm số lượng các ống EC cho kết quả dương tính ở mỗi dãy. Các ống dương tính trong môi trường EC được cấy chuyển sang môi trường nước pepton không indol để kiểm tra sự sinh Indol.
Cấy và ủ môi trường nước pepton không Indol:
Cấy một vòng que cấy canh khuẩn từ mỗi ống nghiệm EC dương tính sang mỗi ống nghiệm đựng 5-10ml nước pepton không Indol, ủ ở 44ºC trong 24h ± 2h. Sau đó kiểm tra sự sinh khí Indol.
Kiểm tra sự sinh Indol:
Nhỏ 0,5 ml thuốc thử Kovac vào các ống nghiệm chứa nước pepton không Indol đã được ủ, trộn kỹ và kiểm tra sau 1 phút. Nếu xuất hiện vòng màu đỏ phía trên chứng tỏ là có mặt E. coli. Ghi nhận số lượng các ống nghiệm có E.coli dương tính ở mỗi độ pha loãng của mẫu.
Tính kết quả: Từ số lượng các ống nghiệm có E.coli, Coliform dương tính ở mỗi độ pha loãng của mẫu, dùng bảng bảng thống kê trong ISO 8199, số có xác suất cao nhất của vi khuẩn Coliform và E. coli giảđịnh.