Nguyờn liệu (kg) KP1 (12,5-0,65) KP2 (13,5-0,75) KP3 (14,5-0,85) KP4 (15,5 –0,95) Cỏm gạo loại 1 6,00 6,00 6,00 6,00 Ngụ vàng 63,44 58,64 54,62 51,25 Cỏm mỡ 11,67 11,40 11,50 10,30 Khụ đỗ tương cú vỏ 8,60 13,70 17,90 22,60 Bột cỏ Kiờn Giang 7,00 7,00 7,00 7,00 DCP 0,93 0,89 0,85 0,81 Bột sũ 1,07 1,08 0,83 0,68 Muối ăn 0,19 0,20 0,20 0,20 L-Lysine 0,20 0,20 0,21 0,23 DL-Methionine 0,05 0,04 0,02 0,01 L-Threonine 0,15 0,15 0,17 0,22 Premix K-VTM 0,50 0,50 0,50 0,50 Vitamin C 0,20 0,20 0,20 0,20 Tổng cộng 100 100 100 100 Thành phần dinh dưỡng VCK (%) 87 87 87 87 DE (Kcal/kg) 3.400 3.400 3.400 3.400 Protein tiờu húa (%) 12,5 13,5 14,5 15,5
Lys tiờu húa (%) 0,65 0,75 0,85 0,95
Met tiờu húa (%) 0,17 0,43 0,69 0,95 Met+Cys tiờu húa (%) 0,42 1,07 1,72 2,37
Thr tiờu húa (%) 0,52 1,32 2,12 2,92 Try tiờu húa (%) 0,12 0,30 0,48 0,66
Khẩu phần thớ nghiệm cú cỏc mức năng lượng tương đương nhau (3.400 kcal DE/kg tă). Cỏc axớt amin như Met, Met + Cys, Thr và Try được tớnh theo tỷ lệ tương
đối so với Lys là 26, 65, 80 và 18% (NRC, 1998) [19]. Giỏ trị dinh dưỡng tiờu húa của khẩu phần thớ nghiệm được tớnh toỏn dựa trờn tỷ lệ tiờu húa cỏc chất dinh dưỡng cú trong nguyờn liệu thức ăn ở thớ nghiệm tiờu húa.
e. Chuồng thớ nghiệm
Sử dụng chuồng cỏ thể song sắt, ứ = 34 mm, kớch thước chuồng 2,5m x 2,5m x 1,3 m. Trong chuồng cú lắp đặt mỏng ăn, nỳm uống cỏ thể phự hợp. Kiều chuồng kớn, sử dụng hệ thống cooling pad cú gắn bộ phận cảm ứng nhiệt tựđộng để kiểm soỏt nhiệt
độ chuồng nuụi. Nhiệt độ chuồng nuụi được duy trỡ ở mức 25-260C.
f. Cỏch cho ăn
Lợn đực được cho ăn 2 lần /ngày vào cỏc thời điểm 8 giờ sỏng và 4 giờ chiều với chế độ ăn hạn chế 2,0 kg thức ăn /con/ngày. Thức ăn dạng bột khụ. Nước uống
được cung cấp tự do bằng nguồn nước giếng khoan với nỳm uống tựđộng.
g. Chỉ tiờu theo dừi
- Thể tớch tinh dịch của một lần lấy tinh sau khi lọc bỏ keo phốn (V) (đo bằng cốc thủy tinh chuẩn cú chia vạch thể tớch)
- Tỷ lệ tinh trựng cú hoạt động tiến thẳng (A)
- Nồng độ tinh trựng (C) (triệu /ml)
- Số lượng tinh trựng tiến thẳng trong 1 lần lấy tinh (VAC)
2.3.7 Thu thập và xử lý số liệu
Số liệu thu thập theo giỏ trị trung bỡnh của từng nghiệm thức. So sỏnh giữa cỏc số trung bỡnh bằng trắc nghiệm F. So sỏnh giữa cỏc tỷ lệ bằng trắc nghiệm χ2 . Xử lý số
liệu trờn phần mềm MINITAB phiờn bản 12.2 (2000).
2.4 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH
- Lấy mẫu và xử lý mẫu theo TCVN 4325-2007.
- Xỏc định vật chất khụ theo Tiờu chuẩn Việt nam TCVN 4801 – 89 cú tham khảo phương phỏp AOAC 930.15 (1990).
- Năng lượng thụ được được đo bằng mỏy Bomb calorimeter của hĩng Parr dựa vào chất chuẩn là acid benzoic. Phương phỏp dựa theo sổ tay phõn tớch của Viện Nghiờn cứu Động vật, bang Queensland, Úc.
- Xỏc định hàm lượng protein thụ theo Tiờu chuẩn Việt nam TCVN 4328 –1:2007 cú tham khảo phương phỏp AOAC 984.13 (1990). Sử dụng CuSO4 làm xỳc tỏc thờm K2SO4 làm tăng độ sụi của H2SO4.
- Xỏc định hàm lượng bộo thụ theo Tiờu chuẩn Việt nam TCVN 4802-89.
- Xỏc định hàm lượng xơ thụ theo Tiờu chuẩn Việt nam TCVN 4329 – 93, cú tham khảo phương phỏp của Foss và sử dụng hệ thống fibertec system M2.
- Xỏc định hàm lượng khoỏng tổng số theo Tiờu chuẩn Việt nam TCVN 4327-2007 và tham khảo phương phỏp AOAC 942.05 (1990).
- Xỏc định hàm lượng NaCl theo TCVN 4806-2007.
- Định lượng kớch thớch tố bằng kỹ thuật miễn dịch cạnh tranh với cỏc bộ kit ADVIA Centaurđ System tại trung tõm y khoa MEDIC, TP.HCM. Độ nhạy đối với progesterone và testosterone là 0,15 ng/ml và đối với estrogen là 10 pg/ml.
- Xỏc định hàm lượng axớt amin: phương phỏp đảo pha sử dụng sắc ký lỏng cao ỏp (phương phỏp Water ACCQ.Tag) dựa theo sổ tay phõn tớch của Viện Nghiờn cứu
Động vật, bang Queensland, Úc.
Ưu điểm của phương phỏp
• Là phương phỏp tiến tiến nhất và được sử dụng rộng rĩi nhất hiện nay và được thay thế cho cỏc phương phỏp truyền thống trước kia khi xỏc định hàm lượng cỏc axớt amin trong thức ăn chăn nuụi là phương phỏp so màu và phương phỏp phõn tớch phõn tớch vi sinh.
• Thời gian phõn tớch nhanh hơn và kết quả chớnh xỏc hơn cỏc phương phỏp truyền thống.
Cỏc bước tiến hành
• Thủy phõn mẫu
+ Nhúm axớt amin chứa lưu huỳnh (Cys, Met): thủy phõn trước bằng axit formic
để tạo thành dạng tương ứng là axit cysteic và sulfur methionine trước khi đem thủy phõn với HCl 6N cựng với cỏc axớt amin khỏc.
+ Đối với tryptophan: do tryptophan sẽ bị phõn hủy hồn tồn khi thủy phõn với HCL nờn phải cú một phương phỏp khỏc cho tryptophan đú là thủy phõn kiềm với xỳt cú nồng độ 4.2N ở nhiệt độ 1100C trong thời gian 18,5 giờ.
+ Thủy phõn mẫu bằng HCl 6N ở nhiệt độ 1100C trong thời gian 18,5 giờ (khụng bao gồm thủy phõn tryptophan).
• Sau khi thủy phõn bằng HCl, mẫu tiếp tục được xử lý qua nhiều cụng đoạn khỏc nhau. Sau đú, một lượng nhỏ mẫu được sử dụng để tạo dẫn xuất trước khi đưa vào phõn tớch bằng hệ thống sắc ký lỏng cao ỏp. Để tạo dẫn xuất trước cột, một số
Trong qui trỡnh phõn tớch axớt amin ỏp dụng tại phũng thớ nghiệm Viện Khoa học Kỹ thuật Nụng nghiệp miền Nam, chất AccQ.Fluor (6-aminoquinolyl-N- hydroxysuccinimimidyl carbamate) được sử dụng để tạo dẫn xuất phỏt quang.
• Đối với cỏc mẫu được thủy phõn bằng kiềm (tryptophan), dung dịch mẫu được
điều chỉnh về pH thớch hợp trước khi cho vào hệ thống sắc k ý.
• Chạy hệ thống sắc ký lỏng cao ỏp (của hĩng Shimadzu với đầu dũ UV–ViS và cột water AccQ– Tag, thời gian chạy 45 phỳt, bước súng 280nm, thể tớch mẫu đưa vào 5àl): Cỏc axit amin được phõn tỏch qua cột sắc ký và hàm lượng của từng axit amin sẽ được xỏc định dựa trờn mẫu chuẩn. Với cỏc axớt amin được thủy phõn bằng HCl, cột phõn tớch chuyờn dụng cho axit amin được sử dụng với đầu dũ huỳnh quang ở bước súng 395nm. Để phõn tớch tryptophan, cột C18 được sử dụng với đầu dũ UVvis, đo tại bước súng 280nm.
Chửụng 3