V. YÊU CẦU CỦA MỘT VACXIN
3.2. Quy trình kiểm nghiệm vacxin virus
3.2.1. Quy trình kiểm nghiệm vacxin Newcastle chủng Lasota
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ chủng virus Lasota phòng bệnh Newcastle cho gà dưới 2 tháng tuổi, dạng ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92
Kiểm tra an toàn:
Dùng 20 gà mẫn cảm (2 - 10 ngày tuổi) chia làm 2 tổ:
- Tổ 1: 10 con, mỗi con ựược uống 10 liều vacxin sử dụng - Tổ 2: 10 con làm ựối chứng.
Theo dõi trong 10 ngàỵ Gà ở mỗi tổ không ựược chết quá 3 con. Số gà chết bằng nhau hoặc tổ 1 chết ắt hơn và không ựược có triệu chứng bệnh tắch giống bệnh Newcastlẹ
Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Gây miễn dịch cho 10 gà (dưới 2 tháng tuổi) mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Sau 14 ngày các gà miễn dịch (sau khi ựã ựược lấy máu làm phản ứng HI) cùng với 5 gà ựối chứng ựược thử thách với virus Newcastle cường ựộc, mỗi con 105 - 106 EID50. Theo dõi trong 14 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: gà ựối chứng chết ắt nhất 3 con; gà miễn dịch chết không quá 2 con. Trường hợp gà chết không ựúng, quá quy ựịnh thì hiệu giá HI bình quân của gà miễn dịch phải từ 1/20 trở lên.
Phương pháp thay thế:
Chuẩn ựộ hàm lượng virus. Mỗi liều vacxin phải chứa ắt nhất 106 EID50.
3.2.2. Quy trình kiểm nghiệm vacxin Newcastle chủng Hệ I
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ chủng virus Newcastle hệ I phòng bệnh Newcastle cho gà trên 2 tháng tuổi, dạng ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra an toàn:
Tiêm dưới da cho 3 gà mẫn cảm (trên 2 tháng tuổi trọng lượng từ 0,7 kg trở lên), mỗi con 10 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 10 ngày, tất cả gà phải sống khoẻ.
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Gây miễn dịch cho 3 gà (tiêu chuẩn như trên), mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Sau 10 - 14 ngày, các gà miễn dịch cùng với 3 gà ựối chứng ựược thử thách với virus cường ựộc Newcastle, ựường dưới da, mỗi con từ 105 - 106 EID50. Theo dõi trong 14 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: Tất cả các gà miễn dịch ựều sống khoẻ, gà ựối chứng chết ắt nhất 2 con.
Phương pháp thay thế:
Chuẩn ựộ hàm lượng virus. Mỗi liều vacxin phải chứa ắt nhất 106 EID50.
3.2.3. Quy trình kiểm nghiệm vacxin Newcastle chủng F
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ chủng F phòng bệnh Newcastle cho gà, dạng ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92
. Kiểm tra an toàn:
Dùng 20 gà mẫn cảm (2 - 10 ngày tuổi) chia làm 2 tổ:
- Tổ 1: 10 con, mỗi con ựược nhỏ mắt 10 liều vacxin sử dụng - Tổ 2: 10 con làm ựối chứng.
Theo dõi trong 10 ngày, gà ở mỗi tổ không ựược chết quá 3 con. Số gà chết bằng nhau hoặc tổ 1 chết ắt hơn và không ựược có triệu chứng bệnh tắch giống bệnh Newcastlẹ
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Gây miễn dịch cho 10 gà (10 - 15 ngày tuổi) mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Sau 14 ngày, các gà miễn dịch cùng với 5 gà ựối chứng ựược thử thách với virus Newcastle cường ựộc mỗi con 100 LD50. Theo dõi 10 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: gà ựối chứng chết ắt nhất 4 con, gà miễn dịch chết không quá 2 con.
Phương pháp thay thế: Chuẩn ựộ hàm lượng virus. Mỗi liều vacxin phải chứa ắt nhất 106 EID50.
3.2.4. Quy trình kiểm nghiệm vacxin Gumboro nhược ựộc
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ phôi gà hoặc tế bào ựã ựược gây nhiễm bằng một chủng virus Gumboro (Infections Bursa Disease Virus - IBDV) nhược ựộc hoặc vô ựộc tự nhiên. Vacxin dạng ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92
Kiểm tra tạp nhiễm virus Newcastle bằng phản ứng ngưng kết hồng cầụ
. Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài:
Nhỏ mắt hoặc uống cho 15 gà mẫn cảm (1ngày tuổi) mỗi con 10 liều vacxin sử dụng. 15 gà khác cùng nguồn gốc và lứa tuổi ựược nuôi cách ly nghiêm ngặt làm ựối chứng. Sau 3 tuần theo dõi ựánh giá bằng 1 trong 2 cách sau:
- Xét nghiệm bệnh lý tổ chức tuyến túi Fabricius. Tất cả gà ựều không ựược có dấu hiệu bệnh lý của IBD ở túi Fabricius
- So sánh tỷ lệ giữa trọng lượng của túi và thể trọng của gà ở cả hai lô dùng vacxin và ựối chứng. Tỷ lệ giữa trọng lượng của túi và thể trọng của gà giữa hai lô không ựược có sai khác ựáng kể (P < 0,01).
Phương pháp thay thế:
Nhỏ mắt cho 10 gà 1 ngày tuổi (hoặc cho uống), mỗi con 10 liều vacxin sử dụng, 10 gà khác cùng nguồn gốc và lứa tuổi ựược nuôi cách ly nghiêm ngặt làm ựối chứng. Sau 14 ngày cả 2 lô gà ựược miễn dịch bằng vacxin Newcastle chủng Lasota hoặc chủng F, mỗi con một liều qui ựịnh. Theo dõi tiếp trong 10 - 14 ngàỵ Toàn bộ gà ựược lấy máu kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng Newcastle bằng phản ứng ngăn cản ngưng kết hồng cầu (HI). Hiệu giá HI giữa 2 lô gà không ựược có sự khác biệt ựáng kể (không quá 30% mẫu máu của lô miễn dịch thấp hơn lô ựối chứng).
Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Miễn dịch cho 20 gà (1 tuần tuổi) mỗi con 1 liều vacxin quy ựịnh. Sau 10 - 14 ngày, gà miễn dịch cùng với 20 gà ựối chứng ựược thử thách với virus cường ựộc IBD tương ứng với liều 102 TCID50. Theo dõi trong 10 ngàỵ Vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn hiệu lực khi ắt nhất 50% gà ựối chứng chết hoặc có triệu chứng của IBD, số ựối chứng còn lại phải có dấu hiệu bệnh lý tổ chức nặng ở túi Fabricius, còn ựối với gà ựược miễn dịch thì yêu cầu gà khoẻ mạnh ựạt từ 70% trở lên sau khi công cường ựộc ựược 10 ngàỵ
Phương pháp thay thế:
Chuẩn ựộ hàm lượng virus có trong vacxin. Mỗi liều vacxin phải có không ắt hơn 103 TCID50. Xác ựịnh hiệu giá kháng thể trung hoà. Không ắt hơn 10 mẫu máu gà ựã ựược miễn dịch như quy ựịnh, ựược kiểm tra bằng phản ứng trung hoà với liều virus cố ựịnh 102 TCID50. Huyết thanh phản ứng phải ựạt hiệu giá ắt nhất 1/256.
3.2.5. Quy trình kiểm nghiệm vacxin ựậu gà
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ một chủng virus ựậu nhược ựộc thắch hợp (ựậu gà, ựậu gà tây, ựậu bồ câu) trên phôi gà hoặc tế bàọ Vacxin dạng ựông khô. . Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92
. Kiểm tra an toàn: Chủng vacxin vào dưới da cho 10 gà (1 - 2 tuần tuổi) mỗi con 10 liều quy ựịnh. Theo dõi trong 14 ngày, tất cả gà phải sống khoẻ.
Phương pháp trọng tài:
Miễn dịch cho 10 gà (2 - 6 tuần tuổi) mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Sau 3 tuần tuổi gà miễn dịch cùng với 5 gà ựối chứng ựược thử thách với chủng virus ựậu cường ựộc. Theo dõi trong 10 ngày, tất cả gà ựối chứng phải có bệnh tắch mụn ựậu trong khi gà miễn dịch không có.
Phương pháp thay thế:
Miễn dịch cho 10 gà (3 - 10 ngày tuổi) mỗi con 1 liều sử dụng bằng cách chủng vào dưới dạ Theo dõi trong 10 ngày, vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn hiệu khi có không ắt hơn 8 gà có mụn ựậu ở nơi chủng trong khoảng 3 - 5 ngàỵ
102 EID50.
3.2.6. Quy trình kiểm nghiệm vacxin vô hoạt Egg Drop syndrome
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt chế từ chủng virus Egg Drop Syndrome 76 (EDS), phòng bệnh hội chứng giảm ựẻ ở gà.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm".
. Kiểm tra vô trùng: theo 10 TCN 161 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình kiểm tra vô trùng".
Kiểm tra vô hoạt:
Ít nhất 10 phôi thai vịt 11 - 12 ngày tuổi, mẫn cảm với virus EDS, mỗi phôi ựược tiêm 0,2ml vacxin vào xoang niệụ Trứng ựược ấp tiếp 3 - 7 ngàỵ Mổ thu hoạch nước trứng, kiểm tra virus bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA), có thể tiến hành kiểm tra virus trên tế bào gan phôi hoặc tế bào xơ phôi thai vịt.
Kết quả ựạt nếu không có dấu hiệu của virus EDS.
Kiểm tra an toàn:
20 gà khỏe mạnh 4 - 6 tuần tuổi, mỗi con 2 liều vacxin sử dụng, tiêm bắp. Theo dõi 14 ngày, tất cả gà phải sống khỏẹ
Kiểm tra hiệu lực:
20 gà khỏe mạnh, 4 - 6 tuần tuổị Mỗi con ựược tiêm 1 liều vacxin sử dụng, tiêm bắp. Sau 3 tuần gà ựã ựược miễn dịch cùng 5 gà ựối chứng (không tiêm vacxin) ựược lấy máu kiểm tra huyết thanh bằng phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) hoặc bằng phương pháp ELISẠ
- Kháng nguyên dùng trong phản ứng HI là chủng virus EDS 76 ựạt 4 ựơn vị HẠ - Huyết thanh bắt ựầu với ựộ pha loãng 1 : 4
- Hồng cầu gà 0,8%.
Chủng virus EDS 76 có khả năng ngưng kết hồng cầu gà, gà tây, ngan và vịt không ngưng kết hồng cầu của ựộng vật có vú.
Vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu:
Hiệu giá HI lớn hơn hoặc bằng 8log2 và gà ựối chứng phải có phản ứng âm tắnh.
3.2.7. Quy trình kiểm nghiệm vacxin Viêm gan siêu vi trùng vịt
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế từ chủng virus viêm gan vịt nhược ựộc, phòng bệnh viêm gan vịt và ngan dưới 6 tuần tuổị
Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm".
Kiểm tra thuần khiết:theo 10 TCN 161 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình kiểm tra thuần khiết".
Kiểm tra an toàn:
Tiêm dưới da hoặc bắp thịt cho 20 vịt con 1 - 3 ngày tuổi, mỗi con ựược tiêm 10 liều vacxin quy ựịnh. Theo dõi 14 ngày, tất cả vịt phải sống khỏẹ
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Tiêm miễn dịch cho 20 vịt con 1 - 3 ngày tuổi (tiêm dưới da). Sau 72 giờ, các vịt miễn dịch cùng với 20 vịt ựối chứng ựược thử thách với virus viêm gan vịt cường ựộc liều 103,0LD50 (tiêm dưới da). Theo dõi 10 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu ắt nhất 70% vịt ựược tiêm vacxin sống và ắt nhất 70% vịt ựối chứng chết.
Phương pháp thay thế:
Chuẩn ựộ hàm lượng virus vacxin bằng phương pháp tiêm túi niệu phôi gà 8 - 10 ngàỵ Tiêm túi niệu nang. Mỗi liều vacxin phải chứa ắt nhất 103,3ELD50.(3)
3.2.8. Quy trình kiểm nghiệm vacxin dịch tả vịt nhược ựộc
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế từ chủng virus dịch tả vịt nhược ựộc qua phôi vịt, dạng ựông khô.
Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
Kiểm tra thuần khiết:
- theo 10 TCN 161 - 92
- Kiểm tra tạp nhiễm virus viêm gan vịt
Tiêm vào dưới da cho 5 vịt mới nở, mỗi con 10 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 14 ngày, tất cả vịt phải sống khoẻ mạnh.
. Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài:
Tiêm dưới da cho 3 vịt mẫn cảm (0,7 - 1 kg) mỗi con 50 liều vacxin sử dụng. Theo dõi 14 ngày, tất cả vịt ựều phải sống khoẻ mạnh.
Phương pháp thay thế: như phần 3.2.7.
. Kiểm tra hiệu lực:
Tiêm miễn dịch cho 3 vịt (0,7 - 1 kg), mỗi con một liều vacxin sử dụng. Sau 14 ngày, các vịt miễn dịch cùng với 3 vịt ựối chứng ựược thử thách với virus dịch tả vịt cường ựộc với liều 103 EID50 (tương ựương 1ml giống nguyên pha loãng 10 - 2). Theo dõi 14 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: Vịt ựối chứng chết hết, vịt miễn dịch sống toàn bộ.
3.2.9. Quy trình kiểm nghiệm vacxin dại cố ựịnh
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ não bê ựã ựược gây nhiễm virus dại cố ựịnh và vô hoạt bằng phương pháp thắch hợp. Vacxin có dạng lỏng hoặc ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
.Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92 . Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài:
Tiêm cho 2 chó mẫn cảm (3 tháng tuổi) mỗi con 2 liều vacxin sử dụng theo phương pháp qui ựịnh. Theo dõi trong 10 ngày, cả hai chó phải sống khoẻ.
Phương pháp thay thế:
Tiêm vào dưới da hay xoang bụng cho 3 chuột nhắt trắng (18 - 20g) mỗi con 1/10 liều vacxin sử dụng và 2 chuột lang (250 - 350g) mỗi con 1 liều sử dụng. Theo dõi trong 10 ngày tất cả ựộng vật phải sống khoẻ.
(3)
ELD50: Embryo Lethal Dose 50% - Liều gây chết 50 % phôi thắ nghiệm
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
Gây miễn dịch cho 60 chuột nhắt trắng (15 - 16g) bằng cách tiêm xoang bụng, trong 2 tuần liền, mỗi tuần 3 lần, mỗi lần 0,25 ml vacxin cho một chuột (tổng số 6 lần). 30 chuột cùng nguồn gốc và lứa tuổi ựược giữ làm ựối chứng, không tiêm vacxin.
Sau 14 ngày kể từ lần tiêm thứ nhất, chuột miễn dịch ựược thử thách với virus dại cường ựộc CVS (Challenge virus Standara) theo 5 nhóm, mỗi nhóm 10 con với liều 10 - 1, 10 - 2,Ầ và 10 - 5 . đồng thời ựối chứng cũng ựược tiêm cường ựộc theo 3 nhóm mỗi nhóm 10 con, liều 10 - 5, 10 - 6 và 10 - 7, ựường tiêm não (intracerebrally), lượng tiêm 0,03ml. Theo dõi trong 14 ngày, chỉ tắnh những chuột chết và bại liệt từ ngày thứ 5 trở ựi, LD50 của 2 lô chuột ựối chứng và miễn dịch phải khác nhau ắt nhất 3 log thì vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn hiệu lực.
Phương pháp thay thế:
Dùng 8 chuột lang (250 - 300g) chia làm 4 nhóm mỗi nhóm 2 con. Chuột ựược tiêm vacxin vào não theo sơ ựồ sau:
Nhóm 1: Liều tiêm bằng 1/150 liều sử dụng, vacxin pha 1/50 Nhóm 2: Liều tiêm bằng 1/1500 liều sử dụng, vacxin pha 1/500 Nhóm 3: Liều tiêm bằng 1/15000 liều sử dụng, vacxin pha 1/5000 Nhóm 4: Liều tiêm bằng 1/150.000 liều sử dụng, vacxin pha 1/50.000 Theo dõi trong 14 ngày, vacxin ựạt tiêu chuẩn hiệu lực nếu:
Nhóm 1: Chuột chết hết.
Nhóm 2 hoặc 3: Chuột có thể sống hoặc chết. Nhóm 4: Chuột sống cả 2 con
3.2.10. Quy trình kiểm nghiệm vacxin dại Flury - Lep
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế từ virus dại nhược ựộc Flury - Lep qua phôi gà. Vacxin có dạng lỏng hoặc ựông khô.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92 . Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài:
Tiêm cho 3 chó mẫn cảm (3 - 4 tháng tuổi) mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 21 ngày, cả hai chó phải sống khoẻ.
Phương pháp thay thế:
Tiêm vào dưới da hay xoang bụng cho 8 chuột nhắt trắng (16 - 18g) mỗi con 1/4 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 7 ngày ắt nhất phải có 7 chuột sống khoẻ.
. Kiểm tra hiệu lực: Dùng 1 trong 2 phương pháp sau:
Kiểm tra hiệu lực bằng chuột lang:
Tiêm bắp cho 10 chuột lang (300 - 350g), mỗi con 1/80 liều sử dụng (vacxin ựã ựược pha loãng thành huyễn dịch 5% với nước sinh lý và có 2% huyết thanh ngựa).
Sau 21 ngày các chuột ựã gây miễn dịch cùng với 5 chuột ựối chứng ựược thử thách với virus dại cường ựộc, chủng CVS, mỗi con 1/2 liều gây chết 100% chuột lang.
Theo dõi trong 14 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: Chuột miễn dịch sống 70%, chuột ựối chứng chết 80% vì bệnh dạị
Chuẩn ựộ hàm lượng virus: Vacxin phải ựạt hiệu giá 103,8 LD50/0,03ml.