4.1.Quy trình sản xuất kháng huyết thanh dại
( Viện các chế phẩm sinh học Trường xuân, Trung Quốc)
Kháng huyết thanh dại ựược sản xuất từ huyết thanh của ngựa ựã ựược gây tối miễn dịch bằng virus dại cố ựịnh.
Kháng huyết dại là globulin miễn dịch dạng dung dịch hoặc dạng ựông khô.
Sơ ựồ tóm tắt sản xuất kháng huyết thanh dại gồm các bước sau: Bước 1: Gây miễn dịch cho ngựa
- Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus dại vô hoạt - Gây tăng miễn dịch: dùng vacxin nhắc lạị
Bước 2: Lấy máu ựể thu huyết tương
Khi huyết thanh ngựa có nồng ựộ kháng thể dại ựạt 100UI/ml, lấy máu (cho chất chống ựông và kháng sinh) rồi loại bỏ hồng cầu ựể thu huyết tương.
Bước 3: Tiêu hoá huyết tương
Pha loãng huyết tương 2 - 3 lần. để ở nhiệt ựộ 300C, ựiều chỉnh pH, thêm pepsin.
Bước 4: Quá trình tinh chế
+ Làm biến tắnh bằng nhiệt ựể loại bỏ Fibrin, Albumin, mảnh Fc - đun nóng 57 - 590C, thêm Amonium sulfat (NH4)2SO4 15% - Lọc loại bỏ chất tủa, giữ lại phần nước nổi
+ Tạo tủa
- Cho thêm Amonium sulfat (NH4)2SO4 20% ựể gây tủa - Giữ lại tủa, loại bỏ phần nước nổi
Bước 5: Cô ựặc, gạn lọc, vô trùng F(ab)2
+ Thêm nhôm 5% ựể hấp phụ chất gây sốt và protein tạp. + Cô ựặc F(ab)2 bằng phương pháp siêu lọc
+ Cho thêm chất dinh dưỡng vào rồi lọc vô trùng
Bước 6: Kiểm ựịnh sản phẩm + Hoá lý + Vô khuẩn + An toàn + Công hiệu + Hàm lượng F(ab)2
Bảng 7.2: Tiêu chuẩn kỹ thuật của kháng huyết thanh dại
Thử nghiệm Tiêu chuẩn kỹ thuật
Trạng thái khi lắc Nhận dạng Hàm lượng Protein Trong, màu trắng đạt < 170 g/ l
pH Muối (NH4)2SO4 Chloroform Albumin F(ab)2 Vô khuẩn An toàn Chắ nhiệt tố
Nguyên liệu tương tự nhóm máu A Công hiệu Kết luận 6 - 7 7,5 - 9,5 g/ l < 0,1 g/l < 0,5 % (ml/ml) Không có > 60% đạt đạt Nhiệt ựộ tăng < 1,30C < 4g/ml >200 UI/ml đạt
4.2. Quy trình chế tạo IgG thỏ ựặc hiệu
Thỏ là ựộng vật hay ựược sử dụng ựể sản xuất kháng thể dịch thể ựặc hiệu dùng trong chẩn ựoán bệnh truyền nhiễm. Vắ dụ: Bệnh dại, bệnh dịch tả lợn, bệnh tụ huyết trùng
Qui trình sản xuất IgG thỏ ựặc hiệu gồm các bước sau: Bước 1: Gây miễn dịch cho thỏ
- Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus hoặc vi khuẩn vô hoạt. - Gây tối miễn dịch: dùng vacxin nhắc lại và kiểm tra hàm lượng kháng thể
Bước 2: Thu hoạch huyết thanh
- Khi huyết thanh thỏ có nồng ựộ kháng thể caọ Vắ dụ: Trong sản xuất kháng huyết thanh tụ huyết trùng, kiểm tra máu thấy hiệu giá phản ứng IHA ựạt >1/160, tiến hành lấy máu thỏ vô trùng bằng cách bộc lộ ựộng mạch cổ lấy máu ựể 370C/1 giờ, sau ựó cho vào tủ lạnh ựể 40C qua ựêm, chắt lấy huyết thanh.
Bước 3: Chiết tách IgG: Phương pháp Caprylic axit - Amonium sulphat (NH4)2S04
- Cho 1 thể tắch huyết thanh + 4 thể tắch dung dịch ựệm (60mM Axetat buffer pH=4) - Nhỏ từng giọt Caprylic axit vào, tỷ lệ 25ộl/1ml huyết thanh pha loãng, ựể ở nhiệt ựộ phòng 30 phút; ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút, ở nhiệt ựộ40C.
Loại bỏ cặn (Albumin). Thu lại dịch nổị Thêm vào dịch nổi Amonium sulphat cho ựến khi bão hoà. Khuấy ựều, ựể yên ở nhiệt ựộ phòng 30 phút. Ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút ở nhiệt ựộ 40C. Thu lấy cặn (IgG kết tủa). Thêm vào IgG ựã kết tủa1 lượng nhỏ dung dịch ựệm PBS.
Bước 4: Kiểm tra ựộ tinh khiết, hiệu giá, tắnh ựặc hiệu
- Kiểm tra ựộ tinh khiết của IgG bằng phương pháp ựiện dị
- Kiểm tra hiệu giá, tắnh ựặc hiệu bằng phương pháp huyết thanh học