V. YÊU CẦU CỦA MỘT VACXIN
2.3. Các kiểm tra khác
kiểm tra này có thể bao gồm:
độ ẩm trong vacxin ựông khô.
Mức ựộ chất không hoạt ựộng còn lại trong sản phẩm vô hoạt. độ pH.
Mức ựộ chất bảo quản và lượng kháng sinh tối ựa cho phép. độ ổn ựịnh về tắnh chất vật lý của chất bổ trợ.
Mức chân không trong vacxin ựông khô.
Thành phẩm vacxin trước khi xuất xưởng phải ựược bao gói hoặc ựóng trong hộp carton ựể tránh sự va ựập trong quá trình vận chuyển phân phốị
Các loại vacxin ựều ựược dán nhãn rõ ràng. Tuy nhiên, tất cả chỉ dẫn và khẳng ựịnh trên nhãn phải ựược xác nhận của cơ quan quốc gia có thẩm quyền.
Tất cả các nhãn vacxin thú y phải không thấm nước và phải chứa ựựng ựầy ựủ các thông tin cần thiết, dù cho vacxin ựược chứa trong các ampoul nhỏ.
Trên hộp carton hoặc bao gói bên ngoài sản phẩm vacxin cũng phải có nhãn ghi vắn tắt các thông tin nổi bật. Yêu cầu nhãn vacxin phải có:
1. Tên chắnh xác của vacxin, các chữ cái nổi bật nhấn mạnh giống nhau của một từ. 2. Tên và ựịa chỉ của nhà sản xuất (ghi cả nhà nhập khẩu cho những vacxin nhập khẩu). 3. Nhiệt ựộ bảo quản.
4. Dòng khuyến cáo Ộchỉ dùng cho thú y (hoặc ựộng vật)Ợ.
5. Hướng dẫn cách sử dụng ựầy ựủ bao gồm tất cả các cảnh báo cần thiết.
6. Với những ựộng vật cung cấp thực phẩm, cần có cảnh báo thời gian không dùng vacxin trước khi giết mổ trong một khoảng thời gian nhất ựịnh, ựiều này tùy thuộc vào loại vacxin chứ không là ựiều kiện bắt buộc với tất cả.
7. Thời hạn sử dụng. 8. Số lô sản xuất.
9. Số chứng nhận (cấp phép) của sản phẩm, một số quốc gia thay vào ựó là số giấy phép hay số ựăng ký của nhà sản xuất.
10. Số liềụ
11.Khuyến cáo nên dùng toàn bộ sau khi ựã mở lọ vacxin hoặc thời gian bảo quản vacxin sau khi mở thắch ứng với từng loại, phương pháp xử lý thắch hợp với phần vacxin thừạ
12.Cảnh báo an toàn phù hợp cho người sử dụng. Vắ dụ: Vô tình tiêm vào tay thì phải làm gì?
13. Khi bổ sung kháng sinh trong quá trình sản xuất, cần khuyến cáo Ộcó sử dụng kháng sinh (tên cụ thể) ựể bảo quảnỢ.
14. Nhãn sản phẩm cũng phải bao gồm các khuyến cáo chắnh xác khác. Nhất là những lưu ý ựặc biệt (nếu có) trong việc sử dụng và bảo quản vacxin.
15.Những thông tin tương tự cũng nên ghi vào tờ rơi giới thiệu, sản phẩm ựược gửi kèm theo gói sản phẩm. Tờ giới thiệu này có thể ghi chi tiết hơn về cách sử dụng và các phản ứng phụ gây hại của vacxin.
IIỊ MỘT SỐ QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VACXIN TẠI VIỆT NAM 3.1. Quy trình kiểm nghiệm một số vacxin vi khuẩn
3.1.1. Quy trình kiểm nghiệm vacxin tụ huyết trùng lợn vô hoạt
Qui trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt ựược chế tạo từ các chủng vi khuẩn Pasteurella multocida suisepticạ Vacxin có chất bổ trợ, dạng lỏng.
. Mẫu: Theo 10 TCN 160 - 92 ỘVacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệmỢ.
. Kiểm tra vô trùng: Theo 10 TCN 161 - 92 ỘVacxin thú y - Quy trình kiểm tra thuần khiếtỢ.
. Kiểm tra an toàn:
ạ Phương pháp trọng tài:
Tiêm dưới da cho 2 lợn khoẻ, thể trọng 20 - 30kg, mỗi con 2 liều vacxin ghi trên nhãn. Sau 10 ngày theo dõi, toàn bộ ựộng vật phải sống khoẻ.
b. Phương pháp thay thế:
Tiêm vacxin vào dưới da cho ựộng vật thắ nghiệm như sau:
2 thỏ, thể trọng 1,5 - 2kg/con, mỗi con 1 liều vacxin
2 chuột lang, thể trọng 300 - 400g/con, mỗi con 1 liều vacxin
5 chuột nhắt trắng, thể trọng 18 - 20g/con, mỗi con 0,5ml vacxin. Toàn bộ ựộng vật phải phải sống khoẻ sau 10 ngày theo dõị
. Kiểm tra hiệu lực:
ạ Phương pháp trọng tài (dùng lợn):
Tiêm miễn dịch cho 5 lợn khoẻ mạnh (20 - 30kg/con), mỗi con một liều vacxin ghi trên nhãn (1 liều chứa ắt nhất 7 x 109CFU). Sau 14 - 21 ngày, các lợn ựã ựược gây miễn dịch cùng với 3 lợn ựối chứng ựược thử thách với một chủng cường ựộc P.multocida tương ứng mỗi con 1 MLD của lợn vào dưới dạ Theo dõi 7 ngày, lô vacxin ựược coi là ựạt tiêu chuẩn nếu:
Lợn ựối chứng chết hết, lợn miễn dịch sống ắt nhất 3 con hoặc
Lợn ựối chứng chết 2 con, lợn miễn dịch sống cả 5 con.
b. Phương pháp thay thế:
Dùng một trong các phương pháp sau:
Chọn 4 thỏ khoẻ, thể trọng 1,5 - 2kg/con, mỗi con ựược tiêm 1/2 liều vacxin vào dưới dạ Mũi thứ hai ựược tiêm sau mũi một 7 ngày với cùng 1 liều lượng và ựường tiêm. Sau lần miễn dịch thứ hai 14 ngày, 4 thỏ miễn dịch cùng 2 thỏ ựối chứng cùng trọng lượng ựược thử thách với một chủng cường ựộc P.multocida tương ứng liều 10 - 20LD50 của chuột nhắt trắng. Liều LD50 phải ựược xác ựịnh trong từng lô kiểm nghiệm. động vật ựược theo dõi 7 ngàỵ Lô vacxin ựược coi là ựạt nếu thỏ miễn dịch sống ắt nhất 50% và thỏ ựối chứng chết 100%.
Chọn 100 chuột nhắt trắng thể trọng 18 - 20g/con, ựược chia làm 2 lô, mỗi lô 50 con: - Tiêm miễn dịch cho 50 chuột vào dưới da, mỗi con 1/5 liều vacxin ghi trên
nhãn. Mũi thứ hai ựược tiêm sau mũi một 7 ngày với cùng 1 liều lượng và ựường tiêm.
- Mười bốn ngày sau khi tiêm lần hai, 50 chuột ựã ựược miễn dịch cùng với 50 chuột ựối chứng ựược thử thách với 0,1ml canh trùng cường ựộc P.multocida
tương ứng pha loãng từ 10 - 1 ựến 10 - 10.
- Theo dõi trong 7 ngày, ghi chép số ựộng vật chết.
- Tắnh giá trị LD50 của từng lô theo phương pháp Reed - Muench. Lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu giá trị LD50 của hai lô khác nhau 4lg. Phương pháp tắnh toán như sau:
độ pha loãng
canh trùng Chuột miễn dịch Chuột ựối chứng
10 - 1 5 5 10 - 2 5 5 10 - 3 5 5 10 - 4 5 5 10 - 5 5 5 10 - 6 5 5 10 - 7 5 5 10 - 8 5 5 10 - 9 5 5 10 - 10 5 5
Chỉ số LD50 ựược tắnh theo công thức của Reed - Muench: Lg LD50 = lgA + X lgf
X= Trong ựó:
X: khoảng cách cân ựối
A: ựộ pha loãng virus gây chết cận trên 50% AỖ: tỷ lệ % chuột chết cận trên 50%
BỖ: tỷ lệ chuột chết cận dưới 50% f: bậc pha loãng của virus 1/10 (10 - 1) đánh giá hiệu lực bằng chỉ số
lgLD50 miễn dịch
lgPD50 = ≥ 4
lgLD50 ựối chứng
Lô vacxin mẫu và lô vacxin chuẩn ựược pha loãng theo cấp số 5 (1/5; 1/25; 1/125). Miễn dịch cho 3 nhóm chuột nhắt trắng (18 - 20g/con), mỗi nhóm ắt nhất 10 chuột, mỗi con 1/5 liều ghi trên nhãn ở mỗi ựộ pha loãng vào dưới dạ
Miễn dịch lần hai sau 7 ngày, tiến hành làm giống lần một. 21 ngày sau lần tiêm ựầu, toàn bộ chuột ựược thử thách với một chủng cường ựộc P.multocida tương ứng liều 10 - 20 LD50.
Theo dõi ựộng vật trong 7 - 10 ngàỵ Vacxin ựạt tiêu chuẩn hiệu lực nếu có chỉ số hiệu lực quan hệ lớn hơn hoặc bằng 0,5.
* Phương pháp chuẩn bị lô vacxin và tắnh toán như sau:
Chuẩn bị lô vacxin chuẩn:
Vacxin chuẩn có ựộ pha loãng thấp nhất bảo hộ lớn hơn hoặc bằng 50% số ựộng vật thắ nghiệm và ựộ pha loãng cao nhất bảo hộ dưới 50% ựộng vật thắ nghiệm trong ựiều kiện ựã ựược kiểm chứng trên ựộng vật ựắch.
Phương pháp tắnh liều bảo hộ: lgPD50 = L - d (s - 0,5) Trong ựó:
L: logarit của ựộ pha loãng ựậm nhất ựã thử d: hệ số pha loãng
s: tổng các tỉ lệ sống (thập phân)
AỖ-50 AỖ-BỖ
Chỉ số bảo hộ:
1/PD50 mẫu Rp =
1/PD50 chuẩn
- CFU: Colony Form Unit - đơn vị khuẩn lạc - lg: logarit cơ số 10
- LD50: Lethal Dose 50% - Liều gây chết 50% ựộng vật thắ nghiệm
- MLD: Minimum Lethal Dose - Liều nhỏ nhất gây chết hết ựộng vật thắ nghiệm. - PD50: Protective dose 50%: Liểu bảo hộ 50% ựộng vật thắ nghiệm.
3.1.2 Quy trình kiểm nghiệm vacxin ựóng dấu lợn nhược ựộc chủng VR2
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin chế tạo từ chủng ựóng dấu lợn nhược ựộc VR2 có chất bổ trợ là thạch, dạng lỏng.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92 . Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài: Tiêm dưới da cho hai lợn mẫn cảm (20 - 30 kg), mỗi con 20 liều vacxin sử dụng. Sau khi tiêm lợn có thể có phản ứng toàn thân ( thân nhiệt tăng 1 - 20C, kém ăn 1 ựến 2 ngày rồi trở lại bình thường). Cả hai lợn phải sống khoẻ trong 10 ngày theo dõị
Phương pháp thay thế: Tiêm dưới da cho 5 chuột nhắt trắng (16 - 20g), mỗi con 1/4 liều sử dụng. Tất cả chuột phải sống khoẻ trong thời gian 14 ngày theo dõị
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài: Tiêm cho 5 lợn (20 - 30kg) mỗi con một liều sử dụng. Sau 10 - 20 ngày các lợn ựã gây miễn dịch cùng với 5 lợn ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn ựóng dấu lợn cường ựộc mỗi con 1MLD vào tĩnh mạch. Theo dõi trong 10 ngày, lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu: lợn ựối chứng có 4 con mắc bệnh ựóng dấu (ủ rũ, bỏ ăn, sốt 41 - 420C, viêm khớp, nổi dấu) trong ựó ắt nhất 2 con chết, lợn miễn dịch ựược phép có 1 con phát bệnh và cả 5 lợn ựều phải sống.
Phương pháp thay thế: Tiêm dưới da cho một số chuột nhắt trắng, mỗi con 1/10 liều vacxin sử dụng. Sau 10 - 20 ngày, 12 chuột miễn dịch cùng với 6 chuột ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn ựóng dấu lợn cường ựộc vào dưới dạ Liều 1000 MLD cho mỗi chuột miễn dịch, liều 10 MLD cho mỗi chuột ựối chứng. Lô vacxin ựạt tiêu chuẩn nếu chuột ựối chứng chết hết, chuột miễn dịch sống ắt nhất 9 con trong thời gian 10 ngày theo dõị
3.1.3. Quy trình kiểm nghiệm vacxin kép tụ huyết trùng và ựóng dấu lợn nhược ựộc
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin kép nhược ựộc chế tạo từ chủng vi khuẩn tụ huyết trùng AvPs 3 và chủng ựóng dấu lợn VR2, vacxin có chất phụ gia là thạch, dạng lỏng.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92 . Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài: Tiêm dưới da cho hai lợn mẫn cảm (20 - 30 kg), mỗi con 10 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 10 ngày, lợn có thể có phản ứng nhẹ (thân nhiệt tăng 1 - 20C, kém ăn 1 - 2 ngày rồi trở lại bình thường). Cả hai lợn phải sống khoẻ.
dụng và 5 chuột nhắt trắng (18 - 20g) mỗi con 1/5 liều sử dụng. Theo dõi trong 10 ngày ựối với thỏ và 4 ngày ựối với chuột. Tất cả ựộng vật phải sống khoẻ.
. Kiểm tra hiệu lực:
Phương pháp trọng tài:
. đối với thành phần tụ huyết trùng:
- Gây miễn dịch bằng cách tiêm vacxin cho 5 lợn (20 - 30kg) mỗi con một liều quy ựịnh. Sau 10 - 20 ngày, lợn miễn dịch ựối với 3 lợn ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn Tụ huyết trùng lợn cường ựộc, 1 MLD vào dưới dạ Theo dõi trong 10 ngày, vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn với thành phần tụ huyết trùng nếu:
- Lợn ựối chứng chết hết, lợn miễn dịch sống ắt nhất 3 con hoặc lợn ựối chứng chết 2, lợn miễn dịch sống cả 5 con.
. đối với thành phần ựóng dấu:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm vacxin cho 5 lợn (20 - 30kg) mỗi con một liều quy ựịnh. Sau 10 - 20 ngày, lợn miễn dịch cùng với 5 lợn ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn ựóng dấu lợn cường ựộc, liều 1MLD vào tĩnh mạch. Theo dõi trong 10 ngàỵ Vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn ựối với thành phần ựóng dấu lợn nếu lợn miễn dịch sống cả (cho phép có 1 lợn phát bệnh nhưng vẫn sống). Lợn ựối chứng phát bệnh ắt nhất 4 con trong ựó có 2 con chết vì ựóng dấu lợn.
Phương pháp thay thế:
. đối với thành phần tụ huyết trùng:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm dưới da cho một số chuột nhắt trắng (16 - 18g) mỗi con 1/10 liều vacxin quy ựịnh. Sau 10 - 20 ngày, 10 chuột miễn dịch cùng với 5 chuột ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn tụ huyết trùng lợn cường ựộc, liều 1MLD vào dưới dạ Theo dõi trong 10 ngày, vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn ựối với thành phần Tụ huyết trùng nếu:
- Chuột ựối chứng chết hết, chuột miễn dịch sống không ắt hơn 5 con. - Hoặc chuột ựối chứng chết 4, chuột miễn dịch sống không ắt hơn 7 con.
. đối với thành phần ựóng dấu:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm dưới da cho một số chuột nhắt trắng (16 - 18g) mỗi con 1/10 liều vacxin qui ựịnh. Sau 10 - 20 ngày, 12 chuột miễn dịch cùng với 6 chuột ựối chứng ựược thử thách với vi khuẩn ựóng dấu lợn cường ựộc, liều 1000 MLD cho chuột miễn dịch và 10 MLD cho chuột ựối chứng vào dưới dạ Theo dõi trong 10 ngày, vacxin ựược xem là ựạt tiêu chuẩn ựối với thành phần ựóng dấu nếu chuột ựối chứng chết hết, chuột miễn dịch sống ắt nhất 9 con
3.1.4.Quy trình kiểm nghiệm vacxin phó thương hàn lợn vô hoạt.
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt chế từ các chủng vi khuẩn Salmonella cholera suis, có hoặc không có chất bổ trợ, dạng lỏng.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92
. Kiểm tra thuần khiết: theo 10 TCN 161 - 92 . Kiểm tra an toàn:
Phương pháp trọng tài: Tiêm dưới da cho 3 lợn mới cai sữa, mỗi con 1 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 21 ngày, lợn có thể có phản ứng nhẹ (kém ăn, nơi tiêm hơi sưng) nhưng sau 2 - 3 ngày phải trở lại bình thường. Không ựược có các triệu chứng nặng khác (ỉa chảy, sốt, kéo dài, gầy yếu).
Phương pháp thay thế:
Tiêm dưới da cho 3 chuột lang (250 - 400g) mỗi con 3/5 liều vacxin sử dụng. Theo dõi trong 10 ngày, ựộng vật phải sống khoẻ.
. Kiểm tra hiệu lực:
Dùng 1 trong 2 phương pháp sau:
Phương pháp dùng chuột lang:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm dưới da cho 5 chuột lang (250 - 400g) mỗi con 1/5 liều vacxin sử dụng. Sau 7 ngày chuột ựược miễn dịch lần thứ 2 với liều vacxin như lần 1. Sau 14 ngày kể từ lần tiêm thứ 2, chuột miễn dịch cùng với 2 chuột ựối chứng ựược thử thách với chủng vi khuẩn cường ựộc phó thương hàn lợn tương ứng, liều 1 MLD vào dưới dạ Theo dõi trong 3 tuần chuột ựối chứng phải chết hết trong khi chuột miễn dịch sống ắt nhất 3 con.
Phương pháp dùng bồ câu:
Gây miễn dịch bằng cách tiêm bắp thịt cho 5 bồ câu (250 - 350g) mỗi con 1/5 liều vacxin sử dụng. Sau 14 - 21 ngày, bồ câu ựược miễn dịch cùng với 2 bồ câu ựối chứng ựược thử thách với chủng vi khuẩn cường ựộc phó thương hàn lợn tương ứng, liều 1 MLD vào bắp thịt. Theo dõi trong 21 ngày, bồ câu ựối chứng chết hết trong khi miễn dịch sống ắt nhất 3 con.
3.1.5. Quy trình kiểm nghiệm vacxin phòng bệnh Ẹcoli ở lợn
Phạm vi áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin vô hoạt ựược chế tạo từ các chủng Escherichia coli. Vacxin có chất bổ trợ, dạng lỏng.
. Mẫu: theo 10 TCN 160 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm".
. Kiểm tra vô trùng: theo 10 TCN 161 - 92 "Vacxin thú y - Quy trình kiểm tra vô trùng". . Kiểm tra an toàn:
Vacxin phải ựược kiểm tra an toàn trên ựộng vật chủ:
Ít nhất 2 lợn khỏe mạnh trọng lượng 25 - 30kg/con ựược tiêm 2 liều vacxin theo