IX. QUY CHẾ THỬ NGHIỆM VÀ KHẢO NGHIỆM VACXIN THÚ Y
2.2.Phương pháp tắnh toán hiệu quả của vacxin
Có 2 phương pháp ựể tắnh toán hiệu quả bảo vệ của vacxin:
Hệ số bảo vệ tương ựối (Relative Percent Survival - RPS)
Phương pháp này phù hợp cho các thực nghiệm trong phòng cũng như ngoài thực tế sản xuất bằng cách gây nhiễm các nhóm cá ựược gây miễn dịch và nhóm cá ựối chứng không ựược gây miễn dịch rồi theo dõi tỷ lệ sống của các nhóm cá này trong một khoảng thời gian ựịnh trước. Phương pháp này có một số tiêu chuẩn cơ bản: mỗi nhóm phải có tối thiểu 25 cá thể với ựộ lặp lại (replicate) là 2; việc gây nhiễm với tác nhân gây bệnh phải ựạt ựược tỷ lệ chết hoặc mắc bệnh trên 60% ựối với nhóm cá ựối chứng trong khoảng thời gian tương tự như ngoài tự nhiên; nguyên nhân tử vong của mọi cá thể trong thắ nghiệm phải ựược xác minh với số cá chết do nguyên nhân khác ngoài tác nhân gây bệnh không ựược vượt quá 10% ựối với tất cả các nhóm, và tỷ lệ chết của cá ựược gây miễn dịch không ựược vượt quá 24%. Nếu thoả mãn các tiêu chắ này, RPS ựược tắnh theo công thức:
Vacxin ựược xem là có hiệu quả bảo vệ cho cá, có thể ựưa vào ứng dụng trong thực tế khi RPS > 60%.
Gia tăng liều gây chết 50% (Lethal Dose 50 per cent - LD50)
Kiểm ựịnh này chỉ ựược thực hiện trong phòng thắ nghiệm và dựa trên cơ sở xác ựịnh số lượng sinh vật gây bệnh cần thiết ựể gây nên tỷ lệ tử vong 50% ở nhóm cá ựược gây miễn dịch và cá ựối chứng. Phương pháp kiểm ựịnh này cho kết quả ựánh giá hiệu quả bảo vệ của vacxin mang tắnh chất ựịnh lượng tốt hơn kiểm ựịnh RPS nhưng việc triển khai thực hiện
RPS = 1 - Tỷ lệ chết của nhóm gây miễn dịch x 100 Tỷ lệ chết của nhóm ựối chứng
phức tạp hơn. Cá thắ nghiệm và cá ựối chứng ựược chia thành nhiều nhóm, mỗi nhóm tối thiểu là 6 cá thể, và ựược gây nhiễm tác nhân gây bệnh với liều lượng theo thang tăng dần. đối với vi khuẩn, như Ạ salmonicida, gây cảm nhiễm bằng cách tiêm với liều lượng từ 10 CFU/con ựến 106CFU/con, tăng dần theo thang nồng ựộ hệ thống 10 lần. Viêc gây cảm nhiễm bằng cách ngâm có thể thực hiện tương tự, với nồng ựộ vi khuẩn trong nước (CFU/ml) tăng dần. Ghi nhận tỷ lệ chết của cá trong các nhóm thắ nghiệm trong một thời gian xác ựịnh tương ứng thời gian thực tế tiến triển của bệnh trong tự nhiên (ựối với bệnh lở loét của cá hồi là 14 ngày). Nguyên nhân gây chết của cá thắ nghiệm phải ựược khẳng ựịnh bằng việc tái phân lập ựược tác nhân gây bệnh từ các cá thể bị chết trong thắ nghiệm. Số lượng tác nhân gây bệnh cần thiết ựể gây tỷ lệ tử vong 50% (LD50) cho cá ựối chứng và cá ựược sử dụng vacxin ựược tắnh theo công thức của Reed & Muench (1938). Theo ựó, LD50 = liều thấp nhất gây chết trên 50% cá thể trừ ựi hệ số hiệu chỉnh (proportionate distance : p.d.). Số hiệu chỉnh p.d. ựược tắnh theo công thức:
Một loại vacxin ựược xem là có khả năng tạo nên ựáp ứng miễn dịch bảo vệ tốt cho ựộng vật thắ nghiệm khi LD50 của nhóm cá thắ nghiệm cao hơn LD50 của nhóm cá ựối chứng trên 100 lần.
IIỊ HIỆN TRẠNG SỬ DỤNG VACXIN PHÒNG BỆNH CHO CÁ
Cùng với sự phát triển mạnh mẽ của nghề nuôi trồng thuỷ sản cả về quy mô lẫn mức ựộ thâm canh, tình hình dịch bệnh trên các ựối tượng nuôi thuỷ sản ngày càng nghiêm trọng, ựòi hỏi phải có các biện pháp phòng bệnh hữu hiệu nhằm giảm bớt thiệt hại cho các nhà sản xuất. Việc sử dụng vacxin cho các ựối tượng nuôi thuỷ sản, ựặc biệt là các loài cá xương ựược nghiên cứu từ những năm 1960 và bắt ựầu ựưa ra thị trường từ ựầu những năm 1980. Tại Na Uy, nhờ việc sử dụng vacxin ựể phòng các bệnh do vi khuẩn gây ra mà lượng kháng sinh dùng phòng trị bệnh giảm thiểu ngày càng rõ rệt, ựồng thời tạo nên sự phát triển ổn ựịnh của nghề nuôi cá hồi, Na Uy trở thành nước phát triển hàng ựầu trên thế giới trong lĩnh vực này
Hiện nay, nhiều loại vacxin phòng bệnh cho cá nuôi, chủ yếu là các loài cá biển, ựược sử dụng rộng rãi tại các nước tiên tiến.
Các loại vacxin phục vụ NTTS hiện ựang ựược sử dụng hoặc ựang trong giai ựoạn nghiên cứu thử nghiệm (theo Hastein, 2002)
Vacxin ựang ựược sử dụng Vacxin ựang nghiên cứu
Phòng bệnh do vi khuẩn
Yersinia ruckeri (ERM) 1976 Flexibacteria maritimus Vibrio anguillarum serotype O1 Flavobacterium psychophylum Vibrio anguillarum serotype O2 Flavobacterium columnaris
Vibrio ordalii Vibrio sp.
Aeromonas salmonicida Renibacterium salmoninarum
Vibrio salmonicida Pasterella piscicida Vibrio viscosus Aerococcus garvieae Lactococcus garvieae Streptococosis Piscirickettsiosis Edwardsiellosis F. maritimus P.D= Tỷ lệ chết trên 50% thấp nhất Ờ
F. columnare
Phòng bệnh do virus
Infectious Pancreatic Necrosis Infectious Hematopoietic Necrosis
Iridovirus Viral Nervous Necrosis
Infectious Salmonid Anemia Viral Hemorrhagic Septicemia
Grass carp hemorrhagic Disease (GCHD)
Phòng bệnh ký sinh trùng Không có