Đánh giá khả năng kháng khuẩn của dịch ép một số loại thảo dược đối với vi khuẩn streptococcus sp gây bệnh xuất huyết trên cá rô phi vằn ( oreochromis niloticus)

1 MỞ ĐẦU Cá Rô phi đối tƣợng nuôi thủy sản có nguồn gốc từ Châu Phi Nhƣng ngày cá Rô phi đƣợc nuôi Châu Phi mà đƣợc phát tán nuôi nhiều nƣớc giới, đặc biệt nƣớc nhiệt đới cận nhiệt đới Trong vài chục năm trở lại chúng thực trở thành loài cá ni cơng nghiệp, có sản lƣợng lớn giá trị kinh tế cao Trong lồi đƣợc ni phổ biến cá Rơ phi vằn (Oreochromis niloticus), có đặc điểm thịt trắng, chất lƣợng thơm ngon, suất cao, dễ ni, dịch bệnh, ni nhiều điều kiện mơi trƣờng với nhiều hình thức ni khác Ở nƣớc ta nghề nuôi cá Rô phi phát triển mạnh mẽ nhiều địa phƣơng tƣơng lai Việt Nam trở thành quốc gia xuất cá Rô phi chủ lực, hƣớng tới thị trƣờng khó tính nhƣ: Mỹ, Nhật Bản số nƣớc Châu Âu Dự kiến đến năm 2015, sản lƣợng cá rô phi đạt 150.000 tấn, tăng trƣởng trung bình 7,9%/năm [46], [54] Cá rơ phi có sức đề kháng tốt nhƣng ni với hình thức thâm canh bán thâm canh, với mật độ ao ni cao với tình trạng nƣớc ao bị ô nhiễm thiếu ôxi nên cá thƣờng mắc bệnh xuất huyết vi khuẩn Streptococcus sp gây Năm 2009, địa bàn tỉnh Hải Dƣơng, Quảng Ninh, Hải Phòng, Bắc Ninh, Hƣng Yên, Hà Nội xuất hiện tƣợng cá chết hàng loạt Tại tỉnh Hải Dƣơng tiến hành xét nghiệm mẫu bệnh phẩm cá thấy 7/7 mẫu bệnh phẩm nhiễm vi khuẩn Streptococcus sp Tuy loại bệnh thông thƣờng, nhƣng tâm lí chủ quan ngƣời dân nên gây thiệt hại lớn [32], [51] Sử dụng kháng sinh, hoá chất đƣợc xem phƣơng pháp truyền thống để điều trị bệnh xuất huyết vi khuẩn Tuy nhiên phƣơng pháp có nhƣợc điểm ngƣời ni thuỷ sản khơng tính đƣợc lƣợng thuốc hợp lí cần cho cá nên thƣờng cho nhiều quá, dẫn đến vi khuẩn bị nhờn thuốc Mặt khác có nhiều cảnh báo việc sử dụng thuốc kháng sinh để điều trị bệnh thuỷ sản, tác hại lâu dài sức khoẻ ngƣời, vật nuôi môi trƣờng xung quanh Trƣớc tình hình địi hỏi phải có giải pháp phòng trị bệnh động vật thuỷ sản nói chung, cá rơ phi vằn nói riêng nhằm thay loại hố chất, kháng sinh đƣợc sử dụng Trong hƣớng nghiên cứu sử dụng thảo dƣợc đƣợc nhiều ngƣời quan tâm Việc sử dụng thảo dƣợc để phòng trị bệnh cho thuỷ sản có nhiều ƣu điểm nhƣ: giá thành rẻ, dễ sử dụng, an toàn thuỷ sản, ngƣời môi trƣờng xung quanh Trên giới, số nƣớc nhƣ: Trung Quốc, Ấn Độ, Bangladesh, Thái lan, Thổ Nhĩ Kỳ có nghiên cứu thử nghiệm tác dụng số loại thảo dƣợc số tác nhân gây bệnh số loại thủy sản Ở nƣớc ta, năm gần nhà khoa học có số nghiên cứu thử nghiệm mức độ khác tác dụng số loại thảo dƣợc nhƣ: trầu không, hẹ, tỏi, xoan, húng, … phòng trị bệnh cá chép, tôm sú, cá trắm cỏ, cá rô phi vằn,… Tuy nhiên có nhiều loại thảo dƣợc chƣa đƣợc nghiên cứu nhiều tác nhân gây bệnh nhiều đối tƣợng khác Trong có cá rơ phi vằn với loại bệnh thƣờng gặp bệnh xuất huyết vi khuẩn Streptococcus sp gây nên Trên sở đó, chúng tơi tiến hành đề tài “Đánh giá khả kháng khuẩn dịch ép số loại thảo dƣợc vi khuẩn Streptococcus sp gây bệnh xuất huyết cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) ” Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá, so sánh khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp dịch ép số loại thảo dƣợc thông dụng thảo dƣợc với loại thuốc kháng sinh thƣờng dùng Từ góp phần đẩy mạnh việc sử dụng thảo dƣợc hạn chế sử dụng thuốc kháng sinh phòng trị bệnh cho thuỷ sản CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỀ ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.1.1 Chủng vi khuẩn Streptococcus sp Theo hệ thống phân loại Bergey (1974) [3], chủng vi khuẩn Streptococcus sp thuộc nhóm phân loại nhƣ sau: Giới Sinh vật nhân nguyên thủy (Procaryota) Ngành Vi khuẩn (Bacteria) Nhóm Mycoplasma (tế bào khơng có dạng xoắn, khơng có thành tế bào) Lớp Mollieutes Bộ Chlamydiales Họ Streptococcaceae Giống Streptococcus - Đặc điểm sinh học: Streptococcus sp tên gọi chung cho loài vi khuẩn thuộc giống Streptococcus chƣa đƣợc định danh, có dạng hình cầu hình trứng, đƣờng kính khoảng m , tạo thành dạng chuỗi ngắn dạng song cầu khuẩn Là vi khuẩn Gram dƣơng, phần lớn Streptococcus yếm khí khơng bắt buộc Trong thạch sâu vi khuẩn mọc tất chiều cao ống môi trƣờng [4], [38] - Đặc tính gây bệnh: Giống Streptococcus gồm nhiều nhóm khác nhau, có khả gây bệnh ngƣời, động vật số loài cá Ở ngƣời, 90% bệnh nhiễm khuẩn Streptococcus, nhƣ: bệnh tinh hồng nhiệt, viêm họng, viêm thận, bệnh viêm màng não trẻ sơ sinh,…v.v Ở động vật, Streptococcus gây bệnh viêm vú bò, nhiễm liên cầu khuẩn,…v.v [4] Vi khuẩn Streptococcus sp tác nhân chủ yếu gây bệnh xuất huyết cho nhiều loại cá khác (cá Diêu hồng, cá Rơ phi,…) Chúng có khả xâm nhập làm tổn thƣơng não cá, theo máu đến làm tổn thƣơng thận tỳ tạng Khi quan sát tiêu tƣơi mô gan, thận, tỳ tạng cá bệnh thấy chúng nằm rải rác tập trung thành đám vùng mơ phết kính bên cạnh tế bào biến dạng, cấu trúc rời rạc Mô thận tỳ tạng cá bệnh có dấu hiệu xung huyết, xuất huyết hoại tử [27] 1.1.2 Cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus) - Vị trí phân loại nhƣ sau: Lớp cá Xƣơng (Actinopterygii) Bộ cá Vƣợc (Perciformes) Họ cá Rơ phi vằn (Cichlidae) Lồi Rơ phi vằn (Oreochromis niloticus) - Đặc điểm: Cá rô phi vằn đƣợc nuôi nhiều nƣớc giới đặc biệt nƣớc nhiệt đới cận nhiệt đới Chúng sống nhiều môi trƣờng nƣớc khác nhƣ: nƣớc mặn, nƣớc nƣớc lợ; có biên độ nhiệt rộng; sống mơi trƣờng có biên độ pH rộng từ 5-11, nhƣng thích hợp từ 6,5-8,5; sống đƣợc mơi trƣờng thiếu ơxi có hàm lƣợng amoniac cao,… [50], [52] Thức ăn cá rô phi vằn đa dạng phong phú, từ loại thức ăn tự nhiên nhƣ: phù du, mùn bã hữu cơ, tảo, côn trùng,… loại thức ăn công nghiệp chế biến chƣa chế biến nhƣ: loại cám, phụ phẩm công nghiệp,… [39], [51], [35] - Dịch bệnh cá rô phi vằn: Cá rô phi vằn lồi sống khoẻ, bị dịch bệnh Tuy nhiên thực tế nuôi thâm canh với mật độ cao, mơi trƣờng bị nhiễm thiếu ơxi cá rơ phi vằn bị mắc bệnh Bệnh cá rơ phi vằn vi khuẩn, vi rút, nấm kí sinh trùng gây Đặc biệt bệnh vi khuẩn Streptococcus nguyên nhân gây nên thiệt hại lớn cá rô phi vằn nói riêng cá nƣớc nói chung, làm ảnh hƣởng đến hiệu nghành nuôi trồng thuỷ sản giới (Stoffregen et al, 1996; Shoemaker and Klesius, 1997) Ở nƣớc ta số dịch bệnh lớn cá rô phi vằn gây thiệt hại đáng kể cho hộ nuôi thuỷ sản đƣợc ghi nhận Năm 2009 xảy dịch bệnh làm cá chết hàng loạt tỉnh phía bắc Hải Phòng, Hải Dƣơng, Bắc Ninh, Hà Nội, Quảng Ninh Theo kết luận Trung tâm nghiên cứu, quan trắc, cảnh báo mơi trƣờng phịng ngừa dịch bệnh thủy sản khu vực miền bắc 51 mẫu cá rơ phi vằn bị bệnh lấy tỉnh xét nghiệm thấy có mặt tác nhân gây bệnh vi khuẩn Streptococcus sp Đây vi khuẩn đặc trƣng gây bệnh cho cá rơ phi vằn, vi khuẩn có mặt gan, thận chí não cá rơ phi vằn nên chết cá thƣờng có biểu quay mặt nƣớc chìm xuống đáy ao Năm 2010 lại xuất dịch bệnh lan rộng nhiều huyện tỉnh Hải Dƣơng làm cá rô phi vằn chết hàng loạt Theo kết luận Trung tâm nghiên cứu, quan trắc, cảnh báo môi trƣờng phòng ngừa dịch bệnh thủy sản khu vực miền bắc cá chết vi khuẩn Streptococcus agalactae [32], [51] Nhƣ thấy rằng, nghành công nghiệp nuôi cá rô phi vằn giới nói chung nƣớc ta nói riêng đối mặt với loại bệnh nguy hiểm vi khuẩn Streptococcus gây thƣờng đƣợc gọi bệnh xuất huyết Bệnh thƣờng gây chết cá với số lƣợng lớn, cá bị bệnh thƣờng có kích thƣớc lớn, từ 100g trở lên nên thƣờng gây hậu nặng nề cho ngƣời nuôi Triệu chứng bệnh thƣờng gặp cá bị xuất huyết da quanh miệng cá gốc vây; vết áp xe lớn vây ngực đi, có mủ; cá có hành vi bất thƣờng nhƣ bơi vòng quanh, bỏ ăn, giải phẫu thấy có tƣợng tích dịch xoang bụng, số trƣờng hợp cịn có dấu hiệu mắt cá lồi to Ngoài cá bị nhiễm bệnh nặng, cá cịn bị vi khuẩn hội khác cơng nhƣ Aeromonas sp nƣớc hay Vibrio sp nƣớc lợ làm cho dịch bệnh trở nên nghiêm trọng Bệnh chủ yếu lan truyền ngang từ cá bị bệnh sang cá khỏe từ môi trƣờng đến cá Dịch bệnh thƣờng xảy cá nuôi bị căng thẳng (stress) kéo dài, mật độ cao, hàm lƣợng ôxi nƣớc thấp nhiệt độ nƣớc tăng cao [50] 1.2 NHỮNG HẠN CHẾ CỦA VIỆC SỬ DỤNG THUỐC KHÁNG SINH TRONG PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH CHO THỦY SẢN Thuốc kháng sinh tất chất hóa học khơng kể nguồn gốc (chiết xuất từ môi trƣờng nuôi cấy vi sinh vật, bán tổng hợp hay tổng hợp) có khả kìm hãm phát triển vi khuẩn tiêu diệt vi khuẩn cách tác động chuyên biệt giai đoạn chuyển hóa cần thiết vi sinh vật [58] Trong nghề nuôi thuỷ sản, nguy mà ngƣời ni thƣờng xun phải đối mặt gặp phải dịch bệnh vật ni Để giải tình hình biện pháp chủ yếu thƣờng xuyên đƣợc áp dụng sử dụng thuốc kháng sinh Hiện nƣớc ta việc nuôi thuỷ hải sản đa phần mang tính chất nhỏ lẻ, manh mún hộ gia đình tự ni Thuốc kháng sinh hóa chất độc hại xâm nhiễm thơng qua đƣờng nhƣ: môi trƣờng (ao, hồ,…), giống, thức ăn,… Ở vùng có doanh nghiệp kinh doanh chế biến đƣợc công ty, doanh nghiệp thu mua lại, sơ chế chế biến, đóng gói tiêu thụ Ngồi số nơi đƣợc tiểu thƣơng thu mua ngƣời ta sử dụng hóa chất cấm để bảo quản sản phẩm (phân urê) Với quy trình sản xuất bao tiêu sản phẩm nhƣ nên việc sản phẩm thuỷ sản có dƣ lƣợng kháng sinh hố chất độc hại điều khó tránh khỏi Đối với vật ni nói chung thủy sản nói riêng, sử dụng loại kháng sinh lặp lại thời gian dài gây ảnh hƣởng xấu nhƣ: gây tác dụng phụ; giảm sức đề kháng; làm cân hệ vi sinh vật đƣờng ruột, tiêu diệt vi sinh vật có ích tạo điều kiện cho vi sinh vật có hại phát triển gây bệnh khác cho vật nuôi; làm cho vi khuẩn kháng thuốc nhƣ: tƣợng kháng thuốc kháng sinh vi khuẩn E ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra đƣợc cảnh báo nhiều năm qua [32] Việc sử dụng thủy sản có dƣ lƣợng thuốc kháng sinh hóa chất độc hại có nhiều nguy tiềm ẩn Trong có việc ảnh hƣởng đến sức khỏe ngƣời tiêu dùng Qua thực tế ngƣời tiêu dùng bị ngộ độc cấp tính sử dụng sản phẩm với biểu thƣờng thấy ngƣời bị ngộ độc thực phẩm nhƣ: buồn nôn, chóng mặt, nhức đầu, tiêu chảy,… Ngồi ngƣời tiêu dùng cịn bị ngộ độc mãn tính, phải trải qua thời gian tích lũy lâu dài biểu triệu chứng bệnh Cụ thể nhƣ: - Chloramphenicol gây triệu chứng rối loạn đƣờng ruột, làm rối loạn trình giảm phân tế bào máu gây nên bệnh thiếu máu, chất làm suy thoái nghiêm trọng chức tủy xƣơng, làm suy yếu hệ xƣơng trẻ sơ sinh - Oxytetracyline dƣ lƣợng kháng sinh đƣợc phép không 100ppb thực phẩm Nó hình thành hệ vi khuẩn kháng thuốc, ảnh hƣởng đến hệ miễn dịch thể - Dẫn xuất Nitrofuran (Furaltadone, Furanzolidone, Nitrofurazone) gây ung thƣ - Kháng sinh nhóm Quinolon gây ung thƣ da tích lũy lâu dài [6], [33], [35] Mặt khác dƣ lƣợng thuốc kháng sinh hóa chất độc hại sản phẩm thủy sản cịn gây nên hậu nữa, ảnh hƣởng đến uy tín việc xuất sản phẩm sang nƣớc khác Ở nƣớc nhƣ: Mỹ, Nhật Bản, Nga, nƣớc EU có quy định nghiêm ngặt việc nhập sản phẩm thủy sản Ngoài quy định cụ thể dƣ lƣợng chất cho phép sản phẩm, quy định chất cấm sử dụng quy trình kiểm tra lô hàng nhập diễn chặt chẽ Ở thời điểm, lô hàng nhập tiến hành kiểm tra ngẫu nhiên mẫu sản phẩm, phát mẫu sản phẩm kiểm tra có dƣ lƣợng chất độc hại vƣợt mức cho phép họ cảnh báo nâng mức kiểm sốt lên cao dần Nếu lơ hàng tiếp tục vi phạm ngƣng nhập buộc công ty nhập tiến hành hủy tồn lơ hàng Cụ thể: ngày 10/6/2011, Nhật Bản nâng mức cảnh báo mặt hàng tôm xuất Việt Nam lên 100%; tháng 7/2011, ba nhà bán lẻ Anh Tesco, Asda, Morrisson định ngừng bán cá tra Việt Nam phát tạp chất tăng trọng Điều ảnh hƣởng đến uy tín mặt hàng thủy sản xuất nƣớc ta mà gây nhiều thiệt hại kinh tế cho ngành xuất thủy hải sản nhiều hệ lụy kéo theo Và thách thức không nhỏ doanh nghiệp Việt Nam nhà nƣớc chƣa có chế tài đủ mạnh nhƣ biện pháp mạnh tay để kiểm sốt từ đầu Bởi có nghịch lý doanh nghiệp xuất Việt Nam lao đao hàng xuất bị trả khơng đạt chuẩn hóa chất độc hại đƣợc nhập cách tràn lan, khơng đƣợc kiểm sốt ngăn ngừa nhƣ hạn chế Điều dẫn đến hậu doanh nghiệp xuất sau có hàng bị trả khơng đạt chuẩn thay phải hủy, họ lại bán phế phẩm cho ngƣời tiêu dùng nƣớc để hạn chế thiệt hại Việc làm chẳng khác đầu độc ngƣời dân Do để tránh điều nghịch lý nhƣ hoàn cảnh nay, nhà nƣớc nhà khoa học cần phải tìm biện pháp đồng để bƣớc khắc phục Một biện có tính khả thi, mang tính chất bền vững lâu dài nghiên cứu biện pháp phòng trị bệnh sử dụng loại thảo dƣợc [35] 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SỬ DỤNG THẢO DƢỢC 1.3.1 Tình hình nghiên cứu sử dụng thảo dƣợc giới Việc sử dụng thảo dƣợc để phòng trị bệnh cho ngƣời đƣợc nghiên cứu áp dụng từ lâu Trên giới, nƣớc có ngành y học cổ truyền phát triển có truyền thống lâu đời trải qua hàng nghìn năm nhƣ: Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ,… Tại nƣớc ngành y học cổ truyền đƣợc nghiên cứu lâu đời với nguồn kinh nghiệm đƣợc tích lũy, chắt lọc qua nhiều hệ tạo nên vốn kiến thức đồ sộ phong phú Trong có nhiều phƣơng thuốc trị đƣợc nhiều bệnh (từ bệnh đơn giản đến bệnh nan y) ngƣời có sử dụng loại thảo dƣợc Trong đơng y, phƣơng thuốc sử dụng kết hợp nhiều vị thuốc khác Chính kết hợp tài tình tạo nên hiệu lớn việc sử dụng thuốc đông y để phịng trị bệnh cứu ngƣời Vậy ngƣời xem nhƣ lồi động vật tiến hóa cao Nếu thảo dƣợc chữa bệnh cứu ngƣời, lại khơng phịng chữa đƣợc bệnh cho động vật khác? Trong vấn đề dƣ lƣợng thuốc kháng sinh hóa chất độc hại làm ảnh hƣởng lớn đến sức khỏe ngƣời, vật nuôi, môi trƣờng xung quanh, mặt khác cịn làm ảnh hƣởng đến ngành xuất thủy sản nƣớc Hơn việc sử dụng kháng sinh từ thảo dƣợc có lợi ích thiết thực nhƣ: chi phí thấp, dễ kiếm, dễ sử dụng, an tồn với vật ni, khơng gây hại cho ngƣời thân thiện với môi trƣờng Chính lợi ích nhƣ vậy, có nhiều nƣớc giới quan tâm nghiên cứu ứng dụng thảo mộc vào lĩnh vực nuôi trồng thủy sản Trong phải kể đến nƣớc có ngành ni trồng thủy sản tƣơng đối phát triển nhƣ nƣớc thuộc châu Á nhƣ: Ấn Độ, Trung Quốc, Banglades, Thổ Nhĩ Kỳ, Malaysia,… Một số tác giả T Rahman, MMR Akanda, MM Rahman, MBR Chowdhury nghiên cứu đánh giá ảnh hƣởng thuốc kháng sinh loại thảo dƣợc số loại vi khuẩn gây bệnh phổ biến cá Thí nghiệm đƣợc tiến hành với loại thuốc kháng sinh là: CFCIN (Cipro floxacin), Renamycin (Oxytetracycline), Dt – 10 (Doxycycline) Sulfatrim (Sufadiazin + Trimethoprim) với liều lƣợng 100, 75, 50 25 ppm; loại thảo dƣợc là: Tỏi, Nghệ, Akand (C.gigentia) hỗn hợp Akand + Neem (A indica) với nồng độ 2, 4, 6, mg/ml Thí nghiệm tiến hành lần lƣợt cá bị nhiễm chủng vi khuẩn gây bệnh phổ biến là: Aeromonas hydrophyla, Pseudomonas fluorescens Edwardsiella tarda cảm nhiễm cá Thái bạc (Barbonymus gonionotus) Biện pháp chữa trị tắm, kháng sinh tắm 3-4h/lần lần/ngày; thảo dƣợc tắm với nồng độ 8mg/1ml lần/ ngày Kết nhận đƣợc nhƣ sau: kháng sinh hiệu cao (100% khỏi bệnh) CFCIN với liều lƣợng 75ppm Đối 10 với thảo dƣợc hiệu cao (90%  2,89) tỏi với liều lƣợng 8mg/ml Và kết ngang cao với kết loại kháng sinh lại Còn kết thấp sử dụng Akand (50%  2,89) Nhƣ bƣớc đầu thí nghiệm cho kết tốt việc sử dụng thảo dƣợc để chữa bệnh cá [31] Ở Thổ Nhĩ Kỳ, tác giả Hakar Turker, Arzu Birinci Yildirim Fatma Pehlivan Karakas tiến hành thử nghiệm khả kháng khuẩn 22 loại thảo dƣợc có địa phƣơng số chủng vi khuẩn phổ biến gây bệnh cá nhƣ: Aeromonas hydrophyla, Yersinia ruckeri, Lactococcus garvieae, Streptococcus agalactiae Enterococcus faecalis Các loại thảo dƣợc đƣợc chiết xuất với loại dung môi cồn nƣớc Kết dịch chiết loại thảo dƣợc cho khả kháng khuẩn cao bao gồm: Nuphar lutea, Nymphaea alba, Stachys annua, kim tƣớc Lydia, Vinca nhỏ, Fragaria Kết cho thấy tiếp tục nghiên cứu loại thảo dƣợc sản phẩm thay dần thuốc kháng sinh [27] Ở Ấn Độ, số tác giả Subramanian Velmurugan, Thavassimuthu Citarasu nghiên cứu ảnh hƣởng chiết xuất từ số thảo dƣợc Murraya koenigii, Psoralea corylifolia Quercus infectoria số chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus vi khuẩn Vibrio harveyi đƣợc phân lập từ tôm trắng Ấn Độ (Fenneropenaeus indicus) bị bệnh Biện pháp áp dụng nghiên cứu nồng độ ức chế tổi thiểu chiết xuất từ thảo dƣợc đĩa thạch nghiêng có cấy vi khuẩn sau 24h Sau thử nghiệm cách trộn chiết xuất từ thảo dƣợc vào thức ăn cho tôm ăn liên tục 30 ngày 10 ngày lần cho tơm tắm dung dịch có pha vi khuẩn gây bệnh Vibrio harveyi để theo dõi tỉ lệ mắc bệnh tỷ lệ sống sót nhóm kiểm sốt nhóm đối chứng Ngồi thực nghiệm tiến hành kiểm tra hệ vi sinh vật đƣờng ruột tôm sau cho ăn thức ăn có trộn thảo dƣợc so sánh với nhóm đối chứng Bởi vi sinh vật đƣờng ruột tác nhân hội gây bệnh sức đề kháng 76 P = 0, F = 141.116, có tƣơng tác nhiệt độ thời gian (vongdoKK*ND) Pairwise Comparisons Measure:MEASURE_1 95% Confidence Interval for a (I) vong (J) vong Mean Difference Difference dokk dokk (I-J) Std Error Sig.a Lower Bound Upper Bound -9.484* 085 000 -9.670 -9.299 -9.500* 064 000 -9.639 -9.361 -8.719* 075 000 -8.883 -8.554 9.484* 085 000 9.299 9.670 -.016 121 900 -.280 249 766* 094 000 560 971 9.500* 064 000 9.361 9.639 016 121 900 -.249 280 100 000 564 998 * 781 8.719* 075 000 8.554 8.883 -.766* 094 000 -.971 -.560 -.781* 100 000 -.998 -.564 Based on estimated marginal means * The mean difference is significant at the 05 level a Adjustment for multiple comparisons: Least Significant Difference (equivalent to no adjustments) Bảng 8- So sánh theo cặp thời gian So sánh theo cặp thời điểm khác nhau, ta thấy thời điểm khởi đầu thời điểm 6h, 12h, 24h có khác biệt Giữa thời điểm 6h 24 h có khác biệt Giữa thời điểm 12h 24h có khác biệt 77 Descriptive Statistics 10 30 50 70 thoi gian Mean Std Deviation N khoi dau 6.0000 00000 6h 12.0625 23936 12h 13.8750 25000 24h 15.6875 23936 Total 11.9062 3.76704 16 khoi dau 6.0000 00000 6h 18.4375 42696 12h 17.2500 20412 24h 15.5000 20412 Total 14.2969 5.06887 16 khoi dau 6.0000 00000 6h 14.4375 31458 12h 16.0625 31458 24h 14.0000 35355 Total 12.6250 4.03733 16 khoi dau 6.0000 00000 6h 17.0000 35355 12h 14.8125 23936 24h 13.6875 37500 Total 12.8750 4.28758 16 Profile Plots 78 LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành đề tài nghiên cứu này, tác giả nhận đƣợc giúp đỡ tận tình nhiều tập thể, cá nhân Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành thầy giáo, cô giáo ngồi trƣờng tận tình dạy dỗ hƣớng dẫn tác giả trình hoc tập nghiên cứu suốt hai năm qua Xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới giảng viên, cán bộ, nhân viên phòng vi sinh bệnh học thủy sản, trại nuôi trồng thủy sản nƣớc khoa Nông lâm ngƣ – trƣờng Đại học Vinh giúp đỡ bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi cho tác giả trình nghiên cứu Đặc biệt, tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Ngọc Hùng dạy dỗ hƣớng dẫn tận tình trình tác giả lựa chọn đề tài nghiên cứu, tiến hành thí nghiệm hồn thành báo cáo khoa học Xin cảm ơn bạn sinh viên khóa 48, 49 lớp Kỹ sƣ nuôi trồng thủy sản khoa Nông lâm ngƣ – Trƣờng Đại học Vinh giúp đỡ tác giả trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Bố, Mẹ, Anh Chị Chồng bên cạnh động viên, giúp đỡ trình học tập Vinh, ngày tháng năm MỤC LỤC Lời cảm ơn…………………………………………….i Mục lục……………………ii 79 Danh mục hình Danh mục bảng LỜI MỞ ĐẦU……………………………………………………………………1 CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI tƣợng nghiên LIỆU…………………………………… .3 1.1 Vài nét đối cứu………………………………………… 1.1.1 Cá rô phi vằn (Oreochromis niloticus)……………………………………… 1.1.2 Chủng vi khuẩn Streptococcus loại thảo sp…………………………………………7 1.1.3 Các dƣợc…………………………………………………………7 1.3.3.1 Cỏ lào……………………………………………………………………7 1.3.3.2 Cỏ Nhọ nồi …………………………………………………………… 1.1.3.3 Húng quế………………………………………………………………10 1.3.3.4 Ổi ………………………………………………………………………11 1.3.3.5 Tỏi ………………………………………………………………… …12 1.3.3.6 Nghệ……………………………………………………………………14 1.2 Những hạn chế việc sử dụng thuốc kháng sinh phòng trị bệnh cho thủy …………………………………………………………………….15 sản 80 1.3 hình Tình nghiên cứu sử dụng thảo dƣợc………………………….……19 1.3.1 Tình hình nghiên cứu sử dụng thảo dƣợc giới……………….19 1.3.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng thảo dƣợc nƣớc……………… 21 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, ĐỊA ĐIỂM, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………………………… …… ………… 26 2.1 Đối tƣợng vật liệu nghiên cứu……………………………………… …26 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu……………………………………………………26 2.2 dung Nội nghiên cứu…………………………………………………….…27 2.3 pháp Phƣơng nghiên cứu……………………………………………… …27 2.3.1 Phƣơng pháp nghiên cứu lí truyền vi thuyết……………………………………….27 2.3.2 Phƣơng pháp cấy khuẩn……………………………………… 27 2.3.3 Phƣơng pháp xác định mật độ vi khuẩn………………………………….28 2.3.4 Phƣơng pháp chiết xuất thảo kháng sinh dƣợc……………………………………….29 2.3.5 Phƣơng pháp đồ………………………………………….29 thử 81 2.3.6 Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm………………………………… 30 2.3.6.1 Nghiên cứu khả kháng khuẩn dịch chiết loại thảo dƣợc nồng độ khác nhau………………………………………………………….30 2.3.6.2 Thí nghiệm so sánh hiệu kháng khuẩn dịch chiết loại thảo dƣợc nồng độ tối ƣu với loại kháng sinh thƣờng dùng Bt SMX/TMP (sulfamethoxazol/trimethoprim) Ciprofloxacin…………………………… 31 2.3.6.3 Nghiên cứu khả kháng khuẩn hỗn hợp loại thảo dƣợc tỏi húng quế đƣợc trộn với tỷ lệ khác ……………………………….31 2.3.6.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ bảo quản đến hiệu lực kháng khuẩn số loại thảo dƣợc (cỏ lào)……………………………………………31 2.3.7 Phƣơng pháp xử lí số liệu………………………………………………32 2.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu……………………………………… 32 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN……………… 33 3.1 Đánh giá khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp dịch chiết loại thảo dƣợc nồng độ khác nhau…………………………………………33 3.2 So sánh khả kháng khuẩn dịch ép loại thảo dƣợc với loại kháng sinh biến…………………………………………………………….41 phổ 82 3.3 Nghiên cứu khả kháng khuẩn hỗn hợp thảo dƣợc tỏi húng quế với tỷ lệ khác nhau………………………………………………………….43 3.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ bảo quản thời gian bảo quản đến khả kháng khuẩn số thảo dƣợc (cây Cỏ lào)…………………………46 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………………………52 PHỤ LỤC DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 – Cá Rơ phi niloticus)…………………………… vằn vằn (Oreochromis 83 Hình 1.2 – Cá Rô phi vằn bị bệnh xuất huyết vi khuẩn Streptococcus……………5 Hình 1.3 – Cây Cỏ lào…8 Hình 1.4 – Cây Cỏ lào Hƣng Lộc – TP Vinh – Nghệ An……… ……………9 Hình – 1.5 Cây Cỏ mực…………………………………………………………10 Hình – 1.6 Húng quế (Ocimum basilicum L.)………………………………….11 Hình – 1.7 Cây Ổi (Psidium guajava L.) …………………………………….…12 Hình – 1.8 Tỏi (Allium sativum L.)…………………………………………….13 Hình – 1.9 Cây Tỏi…………………………………………………………… 14 Hình – 1.10 Cây Nghệ………………………………………………………… 15 Hình 2.1 – Đƣờng cấy vi khuẩn đĩa lồng……………………………… …28 Hình 2.2 Các bƣớc pha lỗng nồng độ vi khuẩn………………………………28 Hình 3.2 - Đồ thị biểu diễn vòng đo kháng khuẩn loại thảo dƣợc nồng độ khác nhau………………………………………………… 34 Hình 3.3 – Đƣờng kính vịng kháng khuẩn dịch ép củ Tỏi nồng độ 100% 37 Hình3.4 – Đƣờng kính vịng kháng khuẩn dịch chiết Cỏ lào…………38 84 Hình 3.5 – Đƣờng kính vịng kháng khuẩn dịch ép Ổi nồng độ 100% 39 Hình 3.7 - Đồ thị biểu diễn vòng đo kháng khuẩn loại thảo dƣợc thuốc kháng sinh …………………………………………………………………… 42 Hình 3.9 - Đồ thị biểu diễn vịng đo kháng khuẩn tỷ lệ hỗn hợp Tỏi/Húng quế………………………………………………………………… 44 Hình 3.10 – Đƣờng kính vịng vơ khuẩn hỗn hợp dịch chiết Tỏi Húng quế .45 Hình 3.13 - Đồ thị biểu diễn biến đổi vòng đo kháng khuẩn dịch chiết Cỏ lào qua thời điểm……………………………………………………… …48 Hình 3.14 - Đồ thị biểu diễn vòng đo kháng khuẩn dịch chiết Cỏ lào nhiệt độ khác điểm…………………………………………49 qua thời 85 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Vòng đo kháng khuẩn trung bình loại thảo dƣợc nồng độ khác nhau……………………………………………………………………….33 Bảng 3.6 Vòng đo kháng khuẩn loại thảo dƣợc thuốc kháng sinh…41 Bảng 3.8 Vòng đo kháng khuẩn hỗn hợp dịch chiết Tỏi Húng quế…….43 Bảng 3.11 Vòng đo kháng khuẩn dịch chiết Cỏ lào nhiệt độ thời gian khác nhau……………………………………………………………… …46 Bảng 3.12 Vòng đo kháng khuẩn dịch chiết Cỏ lào thời điểm khác nhau………………………………………………………………………… …48 86 * [không rõ tác giả – “bệnh học thủy sản”] http://www.caythuocquy.info.vn/cay-thuoc-vi-thuoc/ http://www.khuyennongvn.gov.vn http://tailieu.vn Tài liệu cá rô phi vằn http://agriviet.com/nd/2737-benh-nguy-hiem-do-vi-khuan-o-ca-rophi/ http://www.xaluan.com/modules.php?name=News&file=article&sid=200554( cá chết hàng loạt Hải Dƣơng: “ thêm điệp khúc buồn”) 5.http://eds.mard.gov.vn/uni/home/envi_index.php?disp_id=4&sub_folder=2 &ma_canhbao=119(báo cáo sơ kết khảo sát tình hình cá rơ phi vằn chết hàng loạt tỉnh phía bắc) http://longdinh.com/default.asp?act=chitiet&ID=3006&catID=1 (Đặc điểm kỹ thuật giá trị thực phẩm cá rô phi vằn- Nguyễn Thị Hƣơng Thảoviện NTTS II) http://www.khoahocchonhanong.com.vn/csdlkhcn/modules.php?name=News &op=viewst&sid=208 87 (Một số đặc điểm lồi cá rơ phi vằn phổ biến nƣớc ta, đặc điểm sinh thái, nguồn gốc, phân bố, tập tính) Nghiên cứu bệnh nguy hiểm thƣờng gặp cá rô phi vằn nuôi thâm canh http://vibo.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=192 Biện pháp phòng trị bệnh nhiễm khuẩn Streptococcus sp cá rô phi vằn điêu hồng Vi sinh vật học, tập 1, Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Dƣơng Đức Tiến – NXB Đại học trung học chuyên nghiệp, Hà Nội – 1979 10 Các phƣơng pháp nghiên cứu vi sinh vật – NZT – 207 F1 – Phân lập xác định số lƣợng vi sinh vật F2 – Kiểm tra số vi sinh vật gây bệnh F3 – Các nhóm vi sinh vật thƣờng gặp 11 http://www.lrc- hueuni.edu.vn/dongy/show_target.plx?url=/thuocdongy/O/Oi.htm&key=&cha r=O Viện thông tin y học trung ƣơng 12 http://www.caythuocquy.info.vn/cay-thuoc-vi-thuoc/co-nho-noi-183.html 13 Bùi Quang Tề - Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản – Một số bệnh thƣờng gặp cá nuôi lồng 14 Bùi Quang Tề (Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản 1)- Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn – TT khuyến nông khuyến ngƣ quốc gia – Nuôi thâm canh tôm đảm bảo an tồn vệ sinh thực phẩm theo mơ hình GaqP 15 An tồn vệ sinh thực phẩm sản xuất nông nghiệp – Lê Quang Biên – Chi cục quản lí chất lƣợng nơng lâm, thủy sản http://sonongnghiepvaptntquangtri.gov.vn/index.php?option=com_content&task=view&id=170&Ite mid=81 16 Dƣ lƣợng kháng sinh: Vấn đề nghiêm trọng – Hồng Lê Thọ http://vietsciences.free.fr http://vietsciences.org 88 17 Dƣ lƣợng kháng sinh thủy sản: Phải giải từ gốc – Hồng Hà – Tạp chí Thủy sản (30/8/2011) 18 Chƣơng – Thuốc kháng khuẩn – Khoa chăn ni thú y http://atcvietnam.com.vn/News.aspx?eid=200 19 Tình hình kháng thuốc vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi thâm canh Đồng Bằng Sơng Cửu Long - Tiến sỹ Đặng Thị Hồng Oanh – Khoa Thủy sản, Đại học Cần Thơ 20 T Rahman, M M R Akanda, M M Rahman and M B R Chowdhury Evaluation of the efficacies of selected antibiotics and medicinal plants on common bacterial fish pathogens www.banglajol.info/index.php/JBAU/article/ 21 Sensitivity of Bacteria Isolated from Fish to Some Medicinal Plants http://www.trjfas.org/pdf/issue_9_2/181_186.pdf 22 Subramanian Velmurugan, Thavassimuthu Citarasu - Effect of Herbal Antibacterial Extracts on the Gut Floral Changes in Indian white Shrimp (Fenneropenaeus indicus) http://www.rombio.eu/rbl6vol15/6%20Citarasu.pdf 23 Đồn Chí Thanh nhóm tác giả, Xác định tác nhân gây bệnh nghiên cứu thử nghiệm số loại thảo dược phòng trị bệnh đốm đỏ cá trắm cỏ giống (Ctenopharyngodon idellus) Báo cáo đề tài khoa học – Trƣờng Đại học Nông Lâm - Kỷ yếu Hội nghị khoa học công nghệ tuổi trẻ trƣờng đại học cao đẳng khối Nơng – lâm – ngƣ – thủy tồn quốc – lần thứ 24 Kỹ sƣ Nguyễn anh Tuấn, Thử nghiệm số loại thảo dược phòng trị bệnh nhiễm khuẩn cá trắm cỏ (Ctenopharyngodon idellus) Báo cáo đề tài khoa học – Trƣờng Đại học Nông Lâm - Kỷ yếu Hội nghị khoa học 89 công nghệ tuổi trẻ trƣờng đại học cao đẳng khối Nơng – lâm – ngƣ – thủy tồn quốc – lần thứ 25 Chuyên mục “ Dịch vụ, sản phẩm” thuộc website: http://www.ria1.org/ viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I 26 Chuyên mục “Kết nghiên cứu” thuộc website: http://www.ria1.org/ viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I 27 Trần Quang Linh, Trần Quang Khánh Vân tác giả, Chế phẩm sinh học Bokashi trầu- Mã sáng chế MS1-2010-02140 (4/1/2011) http://www.huaf.edu.vn/modules.php?name=News&op=viewst&sid=1410 28 Nguyễn Viết Khuê, Trần Thị Kim Chi tác giả, Sử dụng sản phẩm có nguồn gốc thảo dƣợc để phịng trị bệnh đốm đỏ cá trắm cỏ ni - Bản tin khoa học/ khuyến nông, khuyến ngƣ số + 2/ 2010 http://xttm.agroviet.gov.vn/XTTMSites/viVN/76/tapchi/130/136/714/Default.aspx(3/11/2010) 29 http://www.truongsinhgialai.com/index.php?frame=intro 30 Vũ Thị Minh Đức, Thực tập vi sinh vật học – NXB Đại học Quốc gia Hà Nội - 2001 31 B.s Nguyễn Đức Minh, Thuốc chữa bệnh nhiễm khuẩn từ cỏ nƣớc – Nhà xuất y học 32 Thạc sĩ Nguyễn Khánh Toàn, Vị thuốc từ Ổi http://www.ykhoanet.com/yhoccotruyen/baiviet/29_291.htm 33 Cây Ổi, http://www.herbs2000.com/herbs/herbs_guava.htm 34 Lƣơng y Võ Hà, Tỏi, số hiệu kì diệu điều cần lƣu ý http://www.ykhoanet.com/yhoccotruyen/voha/vh062.htm 35 http://www.lrchueuni.edu.vn/dongy/show_target.plx?url=/thuocdongy/O/Oi.htm&key=&cha r=O y h ọc c ổ truy ền Tu ệ T ĩnh- Viện thông tin y học trung ƣơng 90 36 http://www.dongythoxuanduong.com.vn/cac-bai-thuoc-hay/13-loi-ichban-chua-tung-biet-ve-cay-hung-que.html Hoàng Dung (30/6/2011), Yếu tố ảnh hƣởng đến tinh dầu, http://tinhdau.vn/tu-van-tinh-dau.php?id=420 37 38 ... bệnh xuất huyết vi khuẩn Streptococcus sp gây nên Trên sở đó, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Đánh giá khả kháng khuẩn dịch ép số loại thảo dƣợc vi khuẩn Streptococcus sp gây bệnh xuất huyết cá rô. .. Khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp dịch ép loại thảo dƣợc: Cỏ lào, Tỏi, Cỏ mực, Ổi, Húng, củ Nghệ Khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp dịch ép loại thảo dƣợc nồng độ khác Khả kháng vi khuẩn Streptococcus. .. định, vi khuẩn Streptococcus sp Húng quế khơng có khả kháng khuẩn 3.2.2 Khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp loại thảo dƣợc nồng độ dịch ép 3.2.2.1 Khả kháng vi khuẩn Streptococcus sp loại thảo dƣợc