Đánh giá khả năng kháng khuẩn của dịch ép một số loại thảo dược đối với vi khuẩn pseudomonas spp gây bệnh lở loét trên cá bông bớp (bostrichthys sinensis)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH ÉP MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC ĐỐI VỚI VI KHUẨN Pseudomonas spp GÂY BỆNH LỞ LOÉT TRÊN CÁ BỐNG BỚP (Bostrichthys sinensis) LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: SINH HỌC THỰC NGHIỆM MÃ SỐ: 60.42.30 Người thực hiện : Đinh Thị Vân Chung Người hướng dẫn khoa học: TS. Trần Ngọc Hùng Vinh - 2012 LỜI CẢM ƠN! Để hoàn thành tốt khóa luận này, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS. Trần Ngọc Hùng – giảng viên khoa Nông Lâm Ngư, trường Đại học Vinh, là người đã định hướng và hướng dẫn nhiệt tình, chu đáo trong suốt thời gian tôi thực hiện đề tài tốt nghiệp. Đồng thời tôi xin chân thành cảm ơn ThS. Trương Thị Thành Vinh, ThS. Nguyễn Thị Kim Chung và các cán bộ phòng thí nghiệm khoa Nông Lâm Ngư, đã nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi hoàn thành đề tài này. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ban chủ nhiệm khoa và thầy, cô giáo Phòng Đào tạo Sau đại học - Đại học Vinh đã trang bị nền tảng kiến thức và giúp đỡ tôi trong những năm học qua.n Cuối cùng, tôi xin cảm ơn tới khoa Sinh học, các phòng ban của trường Đại Học Vinh và gia đình, bạn bè đồng nghiệp, tập thể lớp CH18- SHTN đã quan tâm, động viên trong suốt quá trình học tập và trong thời gian thực hiện đề tài. Vinh, tháng 9 năm 2012 Tác giả Đinh Thị Vân Chung MỤC LỤC Trang - Tác dụng 10 Tinh dầu và một số thành hóa học của nghệ có tác dụng ức chế nhiều loài vi khuẩn và nấm gây bệnh trong đó có trực khuẩn lao, các trực khuẩn lỵ, phế cầu khuẩn, trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn coli, nấm candida albicans. Cao chiết từ Nghệ có tác dụng ức chế lỵ amip. Dịch chiết từ lá nghệ diệt ấu trùng muỗi [14]. 10 DANH MỤC VIẾT TẮT TT Viết tắt Viết đầy đủ 1 CN Công nghệ 2 CTV Cộng tác viên 3 KH Thạc sĩ 4 KHCN Khoa học công nghệ 5 NA Nutrien Aga 6 NCNTTS Công nghệ nuôi trồng thủy sản 7 NN&PTNT Nông nghiệp và phát triển nông thôn 8 NXB Nhà xuất bản 9 NTTS Nuôi trồng thủy sản 10 ThS Thạc sĩ 11 TS Tiến Sĩ 12 TW Trung ương DANH MỤC CÁC BẢNG Trang - Tác dụng 10 Tinh dầu và một số thành hóa học của nghệ có tác dụng ức chế nhiều loài vi khuẩn và nấm gây bệnh trong đó có trực khuẩn lao, các trực khuẩn lỵ, phế cầu khuẩn, trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn coli, nấm candida albicans. Cao chiết từ Nghệ có tác dụng ức chế lỵ amip. Dịch chiết từ lá nghệ diệt ấu trùng muỗi [14]. 10 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang - Tác dụng 10 Tinh dầu và một số thành hóa học của nghệ có tác dụng ức chế nhiều loài vi khuẩn và nấm gây bệnh trong đó có trực khuẩn lao, các trực khuẩn lỵ, phế cầu khuẩn, trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn coli, nấm candida albicans. Cao chiết từ Nghệ có tác dụng ức chế lỵ amip. Dịch chiết từ lá nghệ diệt ấu trùng muỗi [14]. 10 MỞ ĐẦU Cá Bống bớp (Bostrichthys sinensis) sống chủ yếu ở dải nước lợ ven bờ biển Việt Nam, chúng thường phân bố tập trung nhiều ở các vùng cửa sông, rừng ngập mặn nơi có đáy là đất phù sa, bùn pha cát, có nhiều sinh vật đáy và động vật giáp xác sinh sống. Là một trong những loài cá có giá trị kinh tế cao do thịt thơm ngon, bổ dưỡng, giá cả hấp dẫn nên được tiêu thụ rộng rãi trên thị trường trong và ngoài nước. Bởi vậy mà cá Bống bớp đã và đang bị khai thác quá mức, cùng với sự tàn phá môi trường sinh thái và môi trường sống từ việc chuyển đổi rừng ngập mặn sang nuôi trồng thủy sản và các hoạt động kinh tế khác của con người đã làm cho sản lượng cá Bống bớp ở nước ta bị giảm sút nghiêm trọng và có nguy cơ bị tiêu diệt. Chính vì thế, nuôi cá Bống bớp hiện nay đang là một phong trào mạnh mẽ ở một số tỉnh ven biển có điều kiện phù hợp như Hải Phòng, Thanh Hóa, Nghệ An .Trong đó Nghệ An đã và đang phát triển nuôi cá Bống bớp trong ao. Tuy nhiên nuôi cá Bống bớp ở Nghệ An hiện nay đang gặp rất nhiều khó khăn ảnh hưởng đến năng suất và sản lượng của nghề nuôi như nguồn cung cấp giống, thức ăn, dịch bệnh .Đặc biệt cá Bống bớp ở đây đã xuất hiện bệnh lở loét do vi khuẩn Pseudomonas spp. Trong nuôi trồng thủy sản, với nhóm bệnh do vi khuẩn, thông thường chúng ta sử dụng kháng sinh tổng hợp và sẽ đem lại hiệu quả cao nếu dùng đúng thuốc, đúng liều, đúng thời điểm. Tuy vậy, kháng sinh tổng hợp cũng là con dao hai lưỡi, có thể ảnh hưởng xấu tới sức khỏe động vật sử dụng nó và có những tác động không nhỏ tới môi trường sinh thái, nếu dùng kháng sinh tổng hợp tùy tiện và thiếu hiểu biết có khả năng tạo ra các dòng vi khuẩn kháng thuốc. Mặt khác, dư lượng kháng sinh trong sản phẩm nuôi cũng ảnh hưởng tới sức khỏe người tiêu dùng và tác động xấu tới việc tiêu thụ sản phẩm, đặc biệt là đối với những mặt hàng xuất khẩu. 1 Trước tình hình đó việc nghiên cứu sử dụng các loại thảo dược trong phòng và điều trị bệnh nhiễm khuẩn cho các đối tượng ĐVTS được coi là một hướng đi mới, vừa đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm, vừa thân thiện với môi trường sinh thái. Trên thế giới, một số nước như: Trung Quốc, Ấn Độ, Bangladesh, Thái lan, Thổ Nhĩ Kỳ cũng đã có những nghiên cứu thử nghiệm tác dụng của thảo dược đối với một số tác nhân gây bệnh trên động vật thủy sản. Ở nước ta, trong những năm gần đây các nhà khoa học cũng đã có các nghiên cứu về tác dụng của thảo dược như: lá Trầu không, Hẹ, Tỏi, lá Xoan, lá Húng… trong phòng và trị bệnh trên cá Chép, tôm Sú, cá Trắm cỏ, cá Rô phi vằn, cá Bống bớp…Trong khi đó trên thế giới cũng như ở Việt Nam chưa có một công bố cụ thể nào đánh giá khả năng kháng khuẩn của dịch ép một số loại thảo dược đối với bệnh lở loét trên cá Bống bớp do vi khuẩn Pseudomonas spp. Bởi vậy người nuôi chỉ biết dựa vào kinh nghiệm để chữa trị, có lúc hiệu quả nên thiệt hại kinh tế không nhiều, nhưng cũng có lúc không hiệu quả nên thiệt hại kinh tế rất lớn cho người nuôi. Từ những yêu cầu thực tế đặt ra, chúng tôi tiến hành đề tài “Đánh giá khả năng kháng khuẩn của dịch ép một số loại thảo dược đối với vi khuẩn Pseudomonas spp gây bệnh lở loét trên cá Bống bớp (Bostrichthys sinensis) ” Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá khả năng kháng vi khuẩn Pseudomonas spp của dịch ép các loại thảo dược (Tỏi, Cỏ mực, Gừng, Nghệ, Cỏ lào) trong điều kiện nồng độ, nhiệt độ sử dụng và bảo quản, thời gian bảo quản và công thức kết hợp khác nhau. 2 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một vài đặc điểm sinh học của đối tượng nghiên cứu 1.1.1. Đặc điểm sinh học cá Bống bớp (Bostrichthys sinesis. Lecepede, 1801) 1.1.1.1. Vị trí phân loại Cá Bống bớp có vị trí phân loại như sau [33]. Bộ cá vược: Perciformes Bộ phụ cá bống: Gobioidei Họ cá bống đen: Eleotidae Giống cá bớp: Bostrichthys Loài cá bớp: B. sinenesis (Lacépède, 1801). Tên thường gọi: Cá Bống bớp 1.1.1.2. Đặc điểm hình thái, cấu tạo Cá Bống bớp có thân hình trụ tròn, hai vây lưng tách biệt nhau, hai vây bụng gần nhau và dính nhau ở gốc vây. Đầu ngắn, mõm tầy và mắt nhỏ, toàn thân phủ vẩy nhỏ, hàng vảy dọc giữa thân có hơn 100 cái. Phần trên gốc vây đuôi có một chấm đen to hình tròn hoặc hình trứng xung quanh viền trắng. Chiều dài thân gấp 5 lần chiều cao. Hình 1.1 : Cá Bống bớp (Bostrichthys sinesis) 3 1.1.1.3. Đặc điểm phân bố và sinh trưởng Trong tự nhiên, cá Bống bớp thường sống ở đáy thành từng cặp trong hang với tỷ lệ đực/cái là 1/1, cũng không ít những hang có đến vài cặp cùng chung sống. Cá sống chủ yếu ở các bãi triều cửa sông và đầm nước lợ, độ sâu trên dưới 1,5 m, nhiệt độ 17 – 35 0 C, độ muối 0, 1 - 11%. Cá trưởng thành luôn sống trong hang lỗ ở các bãi triều, bờ đê ngập nước, chỉ ra ngoài khi sinh sản hoặc kiếm ăn cá Bống bớp thuộc loài cá dữ, khi còn nhỏ chúng ăn động vật phù du, ấu trùng động vật. Cá trưởng thành ăn giáp xác và nhuyễn thể. Chúng thường bắt mồi sống, cũng có khả năng ăn con mồi chết nhưng thịt còn tươi [15]. 1.1.1.4. Tình hình nghiên cứu bệnh của cá Bống bớp và một số biện pháp phòng trị - Tình hình nghiên cứu bệnh của cá Bống bớp Hà Kí và Bùi Quang Tề (2007) phát hiện trên cá Bống bớp có rất nhiều tác nhân là kí sinh trùng thuộc nghành, lớp, khác nhau. Đến năm 2004 thì Trần Văn Đan trong quá trình thực hiện đề tài sinh sản nhân tạo cá Bống bớp, ông đã thu mẫu định kỳ từ các bể ấp trứng, ươm nuôi ấu trùng và các lồng nuôi thương phẩm. Các kết quả phân tích mẫu bệnh bước đầu đã xác định bệnh ở các giai đoạn và đã cho một số kết quả [12]. Bệnh nấm Tác nhân gây bệnh nấm đã xác định là loài Saprolegnia parasitica. Khi kí sinh vào trứng hoặc ấu trùng, các sợi nấm phát triển nhanh và phân nhánh tạo thành đám dày. Năm 1999 bể ấp bị nhiễm bệnh chỉ nở 22% trong khi bể không bị nhiễm tỉ lệ nở trung bình 76% [17]. 4 Bệnh rận cá Tác nhân là Caligus gây ra cho cá Bống bớp nuôi lồng trong ao nuôi tại trạm nghiên cứu nuôi trồng thủy sản nước lợ. Cá bị rận cá kí sinh với mức độ cảm nhiễm cao có dấu hiệu bệnh lí đặc trưng. Giai đoạn đầu cá có trạng thái bất an, bơi lội lung tung, khả năng bắt mồi giảm. Nếu cá ở trong lồng thì có hiện tượng cọ xát vào thành lồng, cá bị xây xát, chảy máu. Toàn thân cá xuất hiện đốm xuất huyết đỏ. Cá bị mất nhiều máu nên gầy yếu, cá bắt đầu chết rải rác [6]. Khi Caligus kí sinh trên cá nuôi lồng, chúng bám vào bề mặt cơ thể ký chủ, dùng anten nhọn để làm rách màng tế bào biểu mô và lớp màng dưới da của cá, sau đó tấn công trực tiếp vào mô dưới da của cá gây hỏng da, làm vết thương mở rộng gây mất cân bằng thẩm thấu và tạo điều kiện cho nấm, vi khuẩn gây bệnh xâm nhập [19]. Bệnh do vi khuẩn Cá bố mẹ, ấu trùng cá con ở trạng thái không bình thường, khi nhiễm bệnh cá nổi lên bề mặt ao, bể, bơi lờ đờ, phản ứng với tiếng động kém, cá bỏ ăn, khi bị nặng cá có thể chết. Bệnh do vi khuẩn Pseudomonas spp ở cá Bống bớp, tác nhân là: P. fluorescens, P. anguilliseptica, P. dermoalba, P. putida. Đây là những loài phát triển trong môi trường đơn giản và hiếu khí, đa số chúng có thể oxi hóa hoặc một số ít không oxy hóa và không lên men trong môi trường O/F glucose. Khi xuất hiện chúng gây bệnh xuất huyết trên da cá, vẩy bụng rõ nhất hai bên thân và phía bụng, gốc vây lưng đều xuất huyết, các tia vây rách nát cụt dần [26]. - Một số biện pháp phòng trị Theo Trần Văn Đan và ctv (2006) đối với bệnh do vibrio spp và Pseudomonas spp. Để phòng trong trường hợp này phải tiến hành lọc nước qua tầng Formaline với nồng độ 20 – 25 ppm trong 15 – 20 phút. Thức ăn tươi sống cũng phải xử lý trước khi cho ăn bằng Formalin với nồng độ 20 – 5