Nghiên cứu tính kháng khuẩn của một số loại thảo dược dạng dịch ép đối với vi khuẩn pseudomonas spp gây bệnh lở loét trên cá bống bớp (bostrichthys sinensis) trong điều kiện phòng thí nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGUYỄN TRANG THƯƠNG NGHIÊN CỨU TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC DẠNG DỊCH ÉP ĐỐI VỚI VI KHUẨN Pseudomonas spp GÂY BỆNH LỞ LOÉT TRÊN CÁ BỐNG BỚP (Bostrichthys sinensis) TRONG ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NUÔI TRỒNG THỦY SẢN VINH - 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH NGHIÊN CỨU TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC DẠNG DỊCH ÉP ĐỐI VỚI VI KHUẨN Pseudomonas spp GÂY BỆNH LỞ LOÉT TRÊN CÁ BỐNG BỚP (Bostrichthys sinensis) TRONG ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Người hướng dẫn: :Hoàng Thị Mai 2: Th.s Nguyễn Thị Thanh Người thực hiện: Lớp: Nguyễn Trang Thương 49K2 - NTTS VINH - 2012 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khố luận này, xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới Hồng Thị Mai ThS Nguyễn Thị Thanh - Giảng viên khoa Nông Lâm Ngư, Trường Đại họcVinh, người định hướng hướng dẫn nhiệt tình, chu đáo cho tơi suốt thời gian tơi thực đề tài tốt nghiệp Đồng thời xin chân thành cảm ơn cô giáo Nguyễn Thị Kim Chung giáo phịng thí nghiệm khoa Nơng Lâm Ngư nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện để tơi hồn thành đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo khoa Nông Lâm Ngư, Đại học Vinh giảng dạy truyền đạt cho tảng kiến thức giúp đỡ năm học vừa qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè, tập thể lớp 49K - NTTS quan tâm, động viên suốt trình học tập thời gian tơi thực đề tài Trong q trình thực hiên đề tài tốt nghiệp, có nhiều cố gắng thời gian có hạn kiến thức cịn hạn chế, điều kiện thực thí nghiệm chưa quy chuẩn nên tránh khỏi sai sót Rất mong quan tâm, góp ý thầy để khố luận hồn thành Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn ! Nghi Lộc, tháng năm 2012 Sinh viên Nguyễn Trang Thương i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một vài đặc điểm sinh học đối tượng nghiên cứu .3 1.1.1 Đặc điểm sinh học cá Bống Bớp (Bostrichthys sinesis Lecepede, 1801) 1.1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu tạo 1.1.1.3 Đặc điểm phân bố sinh trưởng .4 1.1.2 Chủng vi khuẩn Pseudomonas spp .4 1.1.3 Một số loài thảo dược 1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh nhiễm khuẩn vi khuẩn Pseudomonas spp gây cá .9 1.2.1 Trên giới .9 1.2.2 Tại Việt Nam 10 1.3 Tình hình nghiên cứu sử dụng thảo dược phòng trị bệnh nhiễm khuẩn động vật thủy sản 11 1.3.1 Tình hình nghiên cứu sử dụng thảo dược giới 11 Chương ĐỐI TUỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16 2.1 Đối tượng nghiên cứu .16 2.2 Vật liệu, dụng cụ hóa chất nghiên cứu 16 ii 2.3 Nội dung nghiên cứu 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 17 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu bệnh vi khuẩn .18 2.4.2.1 Phương pháp thu mẫu .18 2.4.2.2 Phương pháp thu mẫu bệnh phẩm 18 2.4.2.3 Phương pháp nuôi cấy, phân lập định danh vi khuẩn 18 2.4.3 Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn 20 2.4.4 Phương pháp thu dịch ép từ thảo dược .21 2.4.5 Phương pháp thử kháng sinh đồ .21 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 21 2.4.7 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .22 3.1 Kết phân lập định danh vi khuẩn gây bệnh lở loét cá Bống bớp .22 3.2 Kết thử nghiệm khả kháng khuẩn loài thảo dược với chủng vi khuẩn Pseudomonas spp 23 3.3 Khả kháng khuẩn Pseudomonas spp dịch ép thảo dược nồng độ khác 24 3.3.1 Khả kháng khuẩn củ tỏi chủng Pseudomonas spp 24 3.3.2 Khả kháng khuẩn dịch chiết cỏ mực chủng Pseudomonas spp 26 3.3.3 Khả kháng khuẩn dịch chiết củ gừng chủng Pseudomonas spp .28 3.3.4 Khả kháng khuẩn dịch chiết củ nghệ chủng Pseudomonas spp .30 iii 3.3.5 Khả kháng khuẩn dịch chiết cỏ lào chủng Pseudomonas spp 31 3.3.6 Khả kháng khuẩn dịch chiết hỗn hợp củ tỏi củ gừng tỷ lệ phối trộn khác Pseudomonas spp .32 3.4 Kết so sánh khả kháng khuẩn thảo dược với loại kháng sinh phổ biến 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .35 TÀI LIỆU THAM KHẢO .36 iv DANH MỤC VIẾT TẮT Viết tắt TT Viết đầy đủ ctv Cộng tác viên TS Tiến sĩ ThS Thạc sĩ DBSCL Đồng sông Cửu Long DVTS Động vật thủy sản CN Công nghệ KH Khoa học KHCN Khoa học công nghệ KHKT Khoa học Kỹ thuật 10 NA Nutri Aga 11 NTTS Nuôi trồng thủy sản 12 NXB Nhà xuất 13 NCNTTS Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản 14 DKVVK Đường kính vịng vơ khuẩn v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Khả kháng khuẩn dịch chiết thảo dược với vi khuẩn Pseudomonas spp 24 Bảng 3.2 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ củ tỏi Pseudomonas spp 25 Bảng 3.3 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ cỏ mực Pseudomonas spp 27 Bảng 3.4 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ củ gừng Pseudomonas spp 28 Bảng 3.5 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ củ nghệ Pseudomonas spp 30 Bảng 3.6 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ cỏ lào Pseudomonas spp 31 Bảng 3.7 Khả kháng khuẩn hợp chất tỏi - gừng Pseudomonas spp 32 Bảng 3.8 Kết đường kính vịng vơ khuẩn thảo dược loại kháng sinh vi khuẩn Pseudomonas spp 34 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cá Bống Bớp (Bostrichthys sinesis) Hình 1.2 Củ tỏi ta Hình 1.3 Củ nghệ Hình 1.4 Cây cỏ mực Hình 1.5 Củ gừng Hình 1.6 Cây cỏ lào Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 17 Hình 2.2 Đường cấy vi khuẩn đĩa lồng 18 Hình 2.3 Các bước pha loãng nồng độ vi khuẩn 20 Hình 3.1 Dấu hiệu cá bị bệnh 22 Hình 3.2 Khuẩn lạc mọc NA (cấy tăng sinh) 23 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc nhuộm gram 23 Hình 3.4 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch ép củ tỏi nồng độ khác với vi khuẩn Pseudomonas spp 25 Hình 3.5 ĐK vịng vơ khuẩn dịch ép củ tỏi 26 Hình 3.6 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết cỏ mực chủng Pseudomonas spp 27 Hình 3.7 Vịng kháng khuẩn cỏ mực 28 Hình 3.8 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết củ gừng chủng Pseudomonas spp 29 Hình 3.9 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết củ nghệ chủng Pseudomonas spp 30 Hình 3.10 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết cỏ lào chủng Pseudomonas spp 31 Hình 3.11 Vòng kháng khuẩn cỏ lào 32 Hình 3.12 Đường kính vịng vô khuẩn hỗn hợp dịch chiết từ củ tỏi củ gừng Pseudomonas spp 33 vii MỞ ĐẦU Theo Bộ Nông nghệp Phát triển nông thôn, sản lượng khai thác nuôi trồng thủy sản quý I/2012 ước đạt 1.134,4 ngàn tấn, tăng 3% so với kỳ năm 2011; sản lượng khai thác ước đạt 622 ngàn tấn, tăng 1,2%, sản lượng nuôi trồng ước đạt 512 ngàn tấn, tăng 5,2% Trong nghề ni cá biển hướng quan trọng với đối tượng ni có giá trị cá song, cá giò, cá tra, cá bống bớp.[37] Cá Bống Bớp (Bostrichthys sinensis Lacépède, 1801) lồi có giá trị kinh tế cao Giá cá thương phẩm dao động từ 180.000 - 200.000 nghìn đồng/kg, đặc sản vùng ven biển Việt Nam ưa chuộng thị trường nước nước Đây loài cá xuất sống Việt Nam sang số nước Trung Quốc, Hồng Kông.[35] Hiện nay, bệnh vi khuẩn Pseudomonas spp tác nhân gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi cá nước nuôi cá mặn lợ Chủng Pseudomonas spp gây bệnh chủ yếu cá nước nhiên với đặc tính vi khuẩn phát triển nhiều mơi trường thích nghi với khoảng độ muối rộng vi khuẩn nhiễm số loài cá nước mặn lợ cá Bống Bớp, cá song, cá giò gây dịch bệnh diện rộng nhiều vùng nuôi Trong nuôi trồng thủy sản, cá bị bệnh vi khuẩn kháng sinh thường dùng để điều trị Ngoài tác dụng tốt việc trị bệnh thuốc kháng sinh gây ảnh hưởng xấu tới sức khỏe vật nuôi, môi trường nuôi sử dụng không liều lượng, thời gian Nếu lạm dụng thuốc dẫn tới việc tạo dịng vi khuẩn kháng thuốc Ngồi dư lượng thuốc cịn tồn thể vật ni gây ảnh hưởng tới sức khỏe người Việc sử dụng thuốc từ thảo dươc hướng có triển vọng nghề ni trồng thủy sản để dần thay cho thuốc kháng sinh nhằm tạo sản phẩm thủy sản sạch, đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm Bảng 3.2 Khả kháng khuẩn dịch chiết từ củ tỏi Pseudomonas spp Nồng độ Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) 100% 25,15a ± 1,19 75% 19,15b ± 1,07 50% 17,89c ± 1,04 25% 13,43d ± 1,15 (Ghi chú: Các chữ cột khác biểu thị sai khác có ý nghĩa Đường kính vịng vơ khuẩn (mm) thống kê (P0,05) 30 25 20 15 % 10 100% 75% 50% 25% Nồng độ dịch chiết củ tỏi Hình 3.4 Đường kính vịng vơ khuẩn dịch ép củ tỏi nồng độ khác với vi khuẩn Pseudomonas spp Đối với củ tỏi đường kính vịng vơ khuẩn đo nồng độ 100% dịch chiết cao 25,15mm,thấp nồng độ pha loãng 25% 13,43mm Theo phương pháp Bauer - Kirby (1997) vi khuẩn có tính mẫn cảm cao dịch chiết tỏi nồng độ 100% dịch chiết Còn nồng độ lại thử nghiêm 25 vi khuẩn có tính mẫn cảm trung bình đường kính vơ khuẩn khoảng 1120mm Kết phân tích ANOVA kiểm định LSD 0,05 cho thấy sai khác đường kính vịng vơ khuẩn nồng độ thử nghiệm có ý nghĩa thống kê (P