Thăm dò khả năng khai thác beta glucan từ nấm vân chi (trametes versicolor) và nấm hương (lentinula edodes) ở điều kiện phòng thí nghiệm

NGUYỄN ĐỨC THẮNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN ĐỨC THẮNG CÔNG NGHỆ SINH HỌC THĂM DÒ KHẢ NĂNG KHAI THÁC BETA-GLUCAN TỪ NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) VÀ NẤM HƯƠNG (LENTINULA EDODES ) Ở ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC 2012B Hà Nội – Năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC THẮNG THĂM DÒ KHẢ NĂNG KHAI THÁC BETA-GLUCAN TỪ NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) VÀ NẤM HƯƠNG (LENTINULA EDODES ) Ở ĐIỀU KIỆN PHỊNG THÍ NGHIỆM Chun ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : GS.TS HỒNG ĐÌNH HỊA Hà Nội – Năm 2014 MỤC LỤC Lời cảm ơn i Lời cam đoan ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC BẢNG iv MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ HOẠT CHẤT β-GLUCAN 1.1.1 Nghiên cứu polysaccharide từ nấm lớn 1.1.2 Lịch sử nghiên cứu Beta -glucan Error! Bookmark not defined 1.1.3 Định nghĩa 1.1.4 Cấu trúc β-glucan 1.1.5 Tính chất hóa học Beta-glucan [4] 10 1.1.6 Hoạt tính sinh học β-glucan 11 1.1.6.1 Hoạt tính chống ung thư 11 1.1.6.2 Hoạt tính chống virus, vi khuẩn 12 1.1.6.3 Hoạt tính kháng sinh 12 1.1.6.4.Hoạt tính kích thích tăng cường miễn dịch β-glucan 13 1.1.6.5 Ứng dụng β-glucan 14 1.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ NẤM HƯƠNG VÀ HỆ SỢI NẤM HƯƠNG 16 1.2.1 Đặc điểm hình thái đặc tính sinh học nấm Hương 16 1.2.1.1 Đặc điểm hình thái 16 1.2.1.2 Đặc tính sinh học nấm Hương 17 1.2.1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển cảu nấm Hương 17 1.2.1.4 Giá trị dinh dưỡng nấm Hương 18 1.2.1.5 β-glucan nấm Hương 19 1.2.2 Nấm Vân Chi Trametes versicolor 20 1.2.2.1 Đặc điểm sinh học đặc điểm hình thái nấm Vân Chi Trametes versicolor 20 1.2.2.2 Đặc điểm sinh học 21 1.2.2.3 Giá trị dược tính nấm Vân Chi [3, 19, 25] 21 1.2.2.4 β-glucan nấm Vân Chi 22 1.3 Các phương pháp tách Chiết β-glucan 24 1.4.Quy trình cơng nghệ tách chiết β-glucan trọng lượng phân tử thấp Error! Bookmark not defined VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 26 2.1 Vật liệu 26 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.2.1 Phương pháp nuôi cấy 27 2.2.1.1 Phương pháp đặt thạch 27 2.2.1.2 Phương pháp nhân nuôi chủng nấm Hương môi trường lỏng 27 2.2.2 Nghiên cứu so sánh khả phát triển chủng nấm khác môi trường thạch PDA 27 2.2.3 Nghiên cứu so sánh khả phát triển sinh khối chủng nấm Hương nấm Vân Chi môi trường lỏng PDR 28 2.2.4 Phương pháp xác định lượng sinh khối khô 28 2.2.5 Phân tích hàm lượng beta-glucan sinh khối chủng nấm 28 2.2.6 Phương pháp phân tích hàm lượng beta-glucan 29 2.2.6.1 Chiết xuất polysaccharide từ sinh khối sợi nấm khô 29 2.2.6.2 Phương pháp xác định hàm lượng polysaccharide 29 2.4 Phương pháp sắc ký trao đổi ion 31 2.5 Sắc ký lọc gel Sapharose CL6B 32 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Đánh giá phát triển sinh khối chủng nấm Hương nấm Vân Chi môi trường môi trường thạch PDA 33 3.1.1 Đánh giá phát triển sinh khối chủng nấm Hương môi trường môi trường thạch PDA 33 3.1.2 Đánh giá phát triển sinh khối chủng nấm Vân Chi môi trường môi trường thạch PDA 35 3.2 Đánh giá phát triển chủng nấm Hương nấm Vân Chi môi trường lỏng PDR 36 3.2.1 Đánh giá phát triển chủng nấm Hương môi trường lỏng PDR 36 3.2.2 Đánh giá phát triển chủng nấm Vân Chi môi trường lỏng PDR 37 3.3 Đánh giá hàm lượng β-glucan sinh khối sợi nấm phát triển môi trường nuôi cấy lỏng 38 3.3.1 Xác định hàm lượng Glucan tổng số 39 3.3.2 Kết xác định hàm lượng glucan tổng số 40 3.3.3 Khảo sát Beta - glucan từ nấm Vân Chi nấm Hương 41 KẾT LUẬN 47 KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 Lời cảm ơn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Hồng Đình Hịa người thầy hướng cho tơi ý tưởng khoa học, tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn tất thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm - Trường Đại học Bách khoa Hà Nội chia sẻ, động viên, giúp vượt qua khó khăn để hồn thành tốt cơng việc nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng biết ơn đến gia đình bè bạn, người ln bên tơi, động viên, góp ý tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Tác giả Nguyễn Đức Thắng i Lời cam đoan Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu số kết cộng tác với đồng khác Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Tác giả Nguyễn Đức Thắng ii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đơn vị cấu trúc hóa học PSP gồm chuỗi β-1,3 glucan liên kết nhánh β-1,6/1,4 (Cheng et al 2008) Hình 1.2 Đơn vị cấu trúc polysaccharides có hoạt tính kháng u (Ren R 2012) Hình 1.3 Liên kết β- 1,3 glicozit β- 1,6 glicozit Hình 1.4 liên kết β- 1,3glicozit; β- 1,6 glicozit β- 1,3: β- 1,6 glicozit phân tử β-glucan Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo Lentinan Hình 1.6 Hình thái nấm Vân Chi Trametes versicolor Hình2.1 Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang nồng độ D-glucose Hình 2.2 đường chuẩn Glucose cho xác định glucan Hình 3.1 Sự phát triển chủng nấm Hương sau ngày nuôi cấy môi trường thạch PDA (Từ trái qua phải chủng Ld, Lg, Lc) Hình 3.2 Sự phát triển nấm Vân Chi mơi trường PDA Hình 3.4 Đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang nồng độ Dglucose Hình 3.5 sắc ký đồ qua cột DEAE polysaccharides Hình 3.6 đường chuẩn Glucose cho xác định glucan Hình 3.6 Kết tinh qua cột Sapharose CL6B loại nấm iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số polysaccharide có hoạt tính kháng ung thư từ nấm điển hình Bảng 1.2 Một số loại β-glucan Bảng 3.1 Đường kính (mm) hệ sợi chủng nấm Hương môi trường PDA Bảng 3.2 Đường kính (mm) hệ sợi chủng nấm Vân Chi môi trường PDA Bảng 3.4 Khối lượng sinh khối sợi nấm khô chủng nấm Vân Chi nuôi cấy môi trường lỏng PDR sau 22 ngày Bảng 3.5 Hàm lượng glucan có sợi nấm khô chủng nấm Hương nấm Vân Chi Bảng 3.6 Hàm lượng polysaccharide chủng nấm VC2 phân đoạn khác sau qua cột DEAE Bảng 3.7 Hàm lượng polysaccharide chủng nấm Ld phân đoạn khác sau qua cột DEAE Bảng 3.8 Hàm lượng β-glucan phân đoạn sau qua cột DEAE nấm Vân Chi VC2 Bảng 3.9 Hàm lượng β - glucan phân đoạn sau qua cột DEAE nấm Hương Ld iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DEAE: demethylaminoethyl PDA: potatoes dextrose agar PDR: potatoes dextrose rice PSK: polysaccharide -K PSP: polysaccharopheptid v β-glucan hoạt chất sinh học quan trọng nấm Hương, nấm Vân Chi loại nấm dược liệu khác β-glucan tạo nên tính chất dược lý nấm Các nhà nghiên cứu ghi nhận β-glucan có khả tăng cường phản ứng miễn dịch, có tính chất chống ung thư mạnh, có tác dụng chống virus, tính kháng sinh Do chủng giống cho khối lượng sinh khối sợi nấm khô lớn hàm lượng β-glucan thấp khơng đạt yêu cầu Vậy định chọn chủng giống nấm, tiêu khối lượng sinh khối sợi nấm khô lớn tiêu hàm lượng β-glucan sinh khối sợi nấm tiêu quan trọng Để đánh giá hàm lượng β-glucan chủng giống nấm Hương chủng nấm Vân Chi nuôi cấy môi trường lỏng, tiến hành tách chiết β-glucan theo phương pháp nêu mục 2.2.6.1 phần vật liệu phương pháp Sau tiến hành xác định hàm lượng β-glucan dựa vào xác định hàm lượng glucan tổng số α - Glucan Từ chủng nấm tiến hành xác định hàm lượng polysaccharide để chọn chủng có hàm lượng polysaccharide lớn phục vụ q trình khảo sát hàm lượng β-glucan sinh khối sợi nấm khô 3.3.1 Xác định hàm lượng polysaccharide Hàm lượng polysaccharide nấm tiêu chuẩn để lựa chọn chủng nấm có khả sinh hàm lượng β-glucan Vì sau xác định phát triển chủng nấm tiến hành xác định hàm lượng polysaccharide sợi nấm thu sau trình sinh trưởng theo phương pháp Dubois et al., 1956 Để xác định hàm lượng polysaccharide tiến hành xác định lượng đường khử được tạo thành theo phương pháp Dubois et al., 1956 Song song với mẫu thí nghiệm đường chuẩn Glucose để xác định giá trị glucan tổng số 39 xác định qua phản ứng màu cường độ màu bước sóng 492 nm Kết thu sau: Hình 3.4 Xác định hàm lượng polysaccharide từ chủng nấm 3.3.2 Kết xác định hàm lượng polysaccharide Dựa vào đường chuẩn, phương trình đường chuẩn y = 1.0245x - 0.0188 trình bày mục 2.2.6 phần vật liệu phương pháp kết đo quang phổ hấp thụ bước song OD492 nm mẫu phân tích Hàm lượng glucan xác định qua bảng 3.5 sau: Bảng 3.5 Hàm lượng polysaccharide có sợi nấm khô chủng nấm Hương nấm Vân Chi Hàm lượng Sai số polysaccharide (mg/ml) mg/g Lc 0.23 2.5 ± 0,01 Ld 0.38 3.9 7.8 ±0 Lg 0.37 3.8 7.6 ±0 VC1 0.257 2.7 5.4 ±0.001 VC2 0.41 4.2 8.4 ±0.001 Từ kết cho thấy, hàm lượng polysaccharide hệ sợi chủng Chủng nấm OD492 nm nấm Hương Ld lớn Đồng thời chủng nấm Hương Ld cho kết hàm lượng sinh khối sợi khô lớn chủng nấm Hương nghiên cứu điều hoàn toàn hợp lý 40 Đồng thời chủng nấm Vân Chi VC1 VC2 chủng VC2 có hàm lượng polysaccharide lớn điều tỷ lệ thuận với hàm lượng sinh khối tạo trình sinh trường chủng nấm Từ kết chủng tiến hành lựa chọn chủng nấm Vân Chi VC2 nấm Hương Ld để nuôi môi trường lỏng thu lượng lớn sinh khối nhằm mục đích tách chiết tinh xác định hàm lượng β-glucan 3.3.3 Khảo sát Beta - glucan từ nấm Vân Chi nấm Hương Polycaccharides tách từ sinh khối chủng nấm Vân Chi VC2 chủng nấm Hương Ld thu nhận theo phương pháp trình bày mục 2.2.6 phần vật liệu phương pháp sau tinh sử dụng phương pháp sắc ký qua bước: */ Tinh bước 1, qua cột DEAE cellulose Dịch polysaccharide chiết chủng nấm Vân Chi VC2 dịch Chiết chủng nấm Hương Ld với nồng độ polysaccharide mg/ml, đưa lên cột DEAE cellulose Dịch polysaccharide cân với thể tích tương đương đệm A (H2O) sau cho qua cột DEAE-cellulose hệ sắc ký FPLC AKTA Thể tích mẫu bơm lên cột ml, tốc độ dòng chảy ml/phút polysaccharide bám cột đẩy gradient NaCl từ – M A 41 B Hình 3.5 sắc ký đồ qua cột DEAE polysaccharides B: Nấm Hương Ld Ghi chú: A: Nấm Vân Chi VC2 Phần không bám cột đẩy H2O (10 lần thể tích cột) Lực đẩy (NaCl 0−1M) áp dụng từ phân đoạn 23 đến 32 nấm Vân Chi từ 12 đến 26 nấm Hương Để xác nhận phân đoạn có mang polysaccharide hay không, tất phân đoạn thu được kiểm tra hàm lượng polysaccharide theo phương pháp Dubois năm 1956 thực phần trước Bảng 3.6 Hàm lượng polysaccharide chủng nấm VC2 phân đoạn khác sau qua cột DEAE Phân đoạn 24 Hàm lượng 0.44 polysaccharide (mg/ml) 25 26 27 28 29 30 31 0.49 0.45 0.51 0.59 0.64 0.75 0.22 42 Bảng 3.7 Hàm lượng polysaccharide chủng nấm Ld phân đoạn khác sau qua cột DEAE Phân đoạn 13 Hàm lượng polysaccharide (mg/ml) 14 0.37 0.35 15 0.75 16 0.82 17 0.62 18 19 0.46 0.25 Kết cho thấy: Với dịch chiết từ chủng nấm VC2 phân đoạn 24-31 xuất hàm lượng polysaccharide, Đồng thời không thấy có xuất polysaccharide phân đoạn rửa phân đoạn đầu Tương tự, với dịch chiết chủng nấm Ld hàm lượng polysaccharide xác định có nhiều từ phân đoạn 13 – 19 không thấy xuất phân đoạn khác Điều chứng tỏ polysaccharide hầu hết bám vào cột DEAE - cellulose nhả hấp phụ NaCl Các phân đoạn kiểm tra có mặt β - glucan theo phương pháp enzyme trình bày mục 2.2.6.3 phần vật liệu phương pháp Để khảo sát có mặt β - glucan cần xác định thông qua hàm lượng glucan tổng số hàm lượng α - glucan Từ phương trình đường chuẩn tuyến tính phản ứng màu Glucose bước sóng OD 510: y= 1.0891x + 0.0181, xác định hàm lượng glucan tổng số α glucan phân đoạn thu nhận sau qua cột Từ đó, xác định hàm lượng β - glucan có phân đoạn polysaccharide thu Kết trình bày bảng sau: 43 Bảng 3.8 Hàm lượng β-glucan phân đoạn sau qua cột DEAE nấm Vân Chi VC2 (mg/ml) Phân đoạn 24 25 26 27 28 29 30 31 Glucan (mg/ml) 0.145 0.393 0.357 0.210 0.090 0.044 0.054 0.026 α - Glucan (mg/ml) 0.026 0.228 0.063 0.118 0.008 0.026 0.054 0.026 β - Glucan (mg/ml) 0.119 0.165 0.293 0.091 0.082 0.018 0 Bảng 3.9 Hàm lượng β - glucan phân đoạn sau qua cột DEAE nấm Hương Ld (mg/ml) Phân đoạn Glucan α-Glucan β-Glucan (mg/ml) (mg/ml) (mg/ml) 13 0.173 0.081 0.091 14 0.155 0.054 0.101 15 0.228 0.026 0.202 16 0.357 0.145 0.211 17 0.090 0.026 0.064 18 0.063 0.044 0.018 19 0.008 0.008 Qua bảng 3.8 3.9 cho ta thấy, với nấm Vân Chi hàm lượng β glucan có phân đoạn 24−29 nấm Hương phân đoạn 13 - 18 Các ống gộp lại, làm giảm thể tích xuống cịn ml quay chân khơng tiếp tục tinh bước */ Tinh bước 2: Qua cột Sapharose CL6B mL mẫu từ bước tinh loại nấm VC2 Ld, đưa lên cột lọc gel Sapharose kết thu sau: 44 0.8 OD492nm 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 A 25 23 21 19 17 15 13 11 Phân đoạn (5m l) 0.8 0.7 OD492nm 0.6 B 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 -0.1 10 15 20 25 Phân đoạn (5ml) Hình 3.6 Kết tinh qua cột Sapharose CL6B loại nấm Ghi chú: A: Nấm Vân Chi VC2 B: Nấm Hương Ld Từ Kết tinh cho thấy, với nấm Vân Chi VC2 thu phân đoạn 11 đến 16 chứa polysaccharide Trong polysaccharide xuất phân đoạn – 16 nấm Hương Ld Các ống gộp lại, bổ sung 3V EtOH ủ 4°C qua đêm Tiếp theo, mẫu ly tâm 10.000 vòng/phút Cặn hòa tan 2ml nước 100oC sau để nguội xác định hàm lượng β - glucan thu Kết trình tinh hàm lượng β - glucan nấm Vân Chi VC2 ~ 0.7mg/ml nấm Hương Ld ~0.6 mg/ml tương đương với hàm lượng β glucan trọng lượng khô 1,4 mg/g 1,2 mg/g sinh khối khô 45 Theo nghiên cứu Mỹ hàm lượng β-glucan tách Chiết từ thành tế bào nấm men bánh mỳ lớn Hàm lượng glucan tổng số thu 80%, βglucan 50% [6] Theo nghiên cứu Shih (2008) hàm lượng glucan tổng số nấm Grifola frondosa khoảng 0,72% [10] Theo nghiên cứu Manzi pizzoferrato [19] hàm lượng β-glucan nấm Hương khoảng 0,22g/100g chất khô, hàm lượng β-glucan nấm Sị khoảng 0,32 – 0,53g/ 100g chất khơ Sự dao động hàm lượng β-glucan giải thích sau: loại nấm khác hàm lượng β-glucan khác nhau, chất giống định đến hàm lượng β-glucan giống, phương pháp tách Chiết glucan khác dẫn đến hiệu suất thu hồi glucan khác Hơn mặt lý thuyết xác định hàm lượng β-glucan sinh khối khô coi với độ khô tuyệt đối thực tế sinh khối sợi nấm khô nghiên cứu đạt độ khô từ 5% Điều giải thích chủng Ld VC2 nghiên cứu có hàm lượng β - glucan thấp so với hàm lượng β - glucan theo nghiên cứu cơng bố trước 46 KẾT LUẬN Đã xác định tốc độ sinh trưởng chủng nấm Hương Lc, Ld, Lg chủng nấm Vân Chi VC1 VC2 môi trường rắn PDA ngày nuôi cấy lỏng PDR sau 22 ni cấy điều kiện 25 0C, 120 vịng/phút (lắc 8h/ngày chia làm lần) Đã xác định chủng nấm Hương Ld chủng nấm Vân Chi VC2 có khả sinh tổng hợp sinh khối nhiều 5,36 mg/ml 4,84 mg/ml Đã xác định hàm lượng polysacharide hệ sợi chủng nấm Hương Lc, Ld, Lg chủng nấm Vân Chi VC1 VC2 từ đó, xác định hàm lượng polysacharide chủng nấm Hương Ld nấm Vân Chi VC2 nhiều nhất, 7,8 mg/ml 8,4 mg/ml Đã khảo sát β glucan chủng nấm Vân Chi VC2 nấm Hương 1,4 mg/g 1,2 mg/g sinh khối khô 47 KIẾN NGHỊ Với kết thu sau trình nghiên cứu, nhận thấy hàm lượng β - glucan sinh tổng hợp từ hai chủng nấm Ld VC2 tương đối cao cần tạo điều kiện để thực nghiên cứu nhằm mục đích phục vụ y dược lĩnh vực khác sống 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Nguyễn Lân Dũng (2003).Công nghệ nuôi trồng nấm.NXB Nông nghiệp Hà Nội, 244 tr Lê Duy Thắng (2001), kỹ thuật trồng nấm, NXB Nông nghiệp Hà Nội Lê Xuân Thám, Vũ Thị PHương Khanh, Nguyễn Anh Dũng, 2000 “Bổ sung vào nhóm nấm chống ung thư Việt Nam ; Nấm Hương (Nấm Donko, nấm shiitake)” Tạp chí dược học , số 1/2000 Bùi Thị Thu Trang (2009, nghiên cứu phát triển hệ sợi nấm Hương (Lentinula edodes) mơi trường ni cấy lỏng Khóa luận tốt nghiệp, trường Đại học Mở, Hà Nội Trường ĐH khoa học tự nhiên (2005) Phát triển công nghệ sản xuất nấm dược liệu phục vụ tăng cường sức khỏe Hà Nội Viện công nghệ thực phẩm (2005) Nghiên cứu xây dựng công nghệ sản xuất loại đường chức dùng công nghiệp thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm_ Nghiên cứu xây dựng công nghệ sản xuất beta glucan từ thành tế bào nấm men dùng công nghiệp thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm Hà Nội Tài liệu tiếng Anh Boonraeng S, Foo-Trakul P, Kanlayakrit W, Chetanachitra C, Efects of chemical, Biochemical and physical treatments on the kinetics anmd on the role of some endogenous enzymes actin of baker’s yeast lysis for food – gade yeast extract production Kasetsart J (natural science) 2000; 34:270-8 Chihara G (1990) Lentinan and it’s raleted polysaccharides as host defence potentiator: their application to infectiuos diseases In:Immunotherapeutic Prospects of infectious Diseases, 9-18 49 and cancer Czop J.K (1986), The role of β-glucan receptor on blood and tissue leukocytes in phagocytosis and metabolic activation, Pathol Immunopathol Res, 5:pp 286-296 10.Dalia Akramiene, Anatalijus Kondrotas, Janina Didziapetriene, Egidijus Kevelatis, Effects of beta-glucan on the immune system, Medicina (Kaunas) 2007; 43 (8): 597-607 11.M DuBois , K A Gilles , J K Hamilton , P A Rebers , Fred Smith Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances Analytical chemistry., 1956, 28 (3), pp 350–356 12.Ferrer P revisiting the cellulosimicrobium cellulans yeast – lytic β - 1,3glucanases toolbox: A review Microbial cell factories 2006; 5:10 13.Gerado M., Philippe D., Jean M S (2001) Selection of trains of Lentinula edodes and Lentinula boryana adaptes for efficient mycelial growth on wheat straw Rev Lberoam Micok 18, 118-112 14.Godfrey Chi-Fung Chan, Wing keung Chan and Daniel Man-Yuen Sze, The effects of beta-glucan on hunman immune and cancer cell, Journal of Hematology & Oncology 2009; 2:25 doi: 10.1186/1756-8722-2-25 15.Hassegawa R.H., Kasuya M.C.M (2005) “ growth and antibacterial activity of Lentinula edodes in liquid media supplemented with agricultural wastes” Electronic Journal of Biotechnology, 8(2), 213-216 16.Hojjotollah Shokri, Farad Asadi, Ali Reza Khosravi, Isoloation of betaglucan from the cell wall of Saccharomyces cerevisiae Nat Prod Res 2008 Mar20; 22(5): 414-21 17.Hunter Jr KW, RA Gault, MD Berner, Preparation of microparticulate betaglucan from S.cerevisiae for use in immune potentiation Lett appl microbial 2002; 35:267-271 50 18.Ing-Lung Shih, Bi-Wen Chou, Chien-Cheng Chen, Jane-Yii Wu, Chienyan Hsieh (2008) Study of mycelial growth and bioactive polysaccharide production in batch and fed-batch cuture of Grifola Frondosa”, Bioresource Technology, 99,pp.785-793 19.Ishikawa N.K., Kasuy M.C.M.,Vanetti M.c.(2001).” Antibacterial activity of lentinula edodes grown in liquid medium” Brazilian Journal of Microbiology, 32,206-201 20.John Wiley & Sons, Inc (2001) “Colorimetric Quantification of Cacbohydrates” Current Protocols in food Anlaytical Chemistry, E1.1.1E1.1.8 21.Lavigne LM, AlbinaJE, Reichner JS, Beta-glucan is a fungal determinant for adhesion-dependent human neutrophil functions J Immunol 2006; 177:8667-867 22.Mantovani et al (2008) “B-Glucans in promotin again salth: Prevention and cancer” Mutation Research, 658, pp.154-161 23.Maria Peres de Carvabo (2007) “Investigation of the antibacterial activity of basidiomycetes Lentinuala boryana and lentinula edodes” Porto Alegre, 15(2), 173-179 24.Megazyme Internation Ireland Ltd (2008) Mushroom and Yeast betaglucan 25.Mizuno T.(1993) “Food function and medicinal effect of mushroom fungi” Food & Food Ingredients, 158 26.Nagaoka,Hitoshi (2000) Method for extracting a basidiomyceliumContaining culture medium using β-1,3-Glucanase.US Patent 6090615 51 27.Ohno N, Miura T, Miura N.n, adachi Y, Yadomae T Structure and biological activities of hypochlorire oxidize dzymosan Carbohydrate polymers, 2001; 44: 339-349 28.Pamela Manzi, Laura Pizzoferrato (1999) “Beta-glucans in edible mushrooms” Food chemistry, 68,pp.315-318 29.Pelizon AC, Keneno R, Soares AMVC, Meira DA, Sartori A Immunomodulatory activities asso ciated with β - glucan gerived from Saccharomyces cerevisiae Physiol research 2005; 54: 57 – 64 30.Peter N., Lipke and Rafael Ovalle, Cell wall Architecture in Yeast, New structure and New Chaallenges, Journal of Bacteriology 1998; 40; pp 37353740 31.Rossi I H., Monteiro A C., Machado J O., Barbosa J C (2003) “Supplementation of sugarcane bagasse with rice bran and sugarcane molasses for shiitale (Lentinula edodes) spawn production”, Brazilian Journal of Microbiology, 34,61-65 32.S0kri H, Asadi F, Khosravi AR Isolation of β - glucan from the cell wall of saccharomyces cerevisiae Nat prod research 2008; 22:414 – 21 33.Smith, Rowan and Sullivan (2002) Medicinal Mushrooms: Their therapeutic properties and cureent medical usage wint special emphansis on cancer treaments.UK,80-142 34.Solomon P W.(1999) Shiitake (lentinula edodes),Marcel Dekker,INC., New york, 6565-660 35.United States Pantent 4874419.Substrate for growing shiitake mushrooms 36.United States Pantent 5934012 Process for production of mushroom inoculum, 52 37.United States Patent 7138519 Process for extracting of glucan from cereals and products abtained thereform 38.University of Utah Research Park, Salt Lake City (1990) “Mannitol Metabolism in lentinus edodes, the Shiitake Mushroom”, Applied and Enviromental Microbiology, 35, 250-253 39 Vosti DC, Joslyn MA Autolysis of baker’s yeast Appl environ microbial 1954; 2:79-84 53 ... ? ?Thăm dò khả khai thác beta- glucan từ nấm vân chi (trametes versicolor) nấm hương (lentinula edodes) điệu kiện phịng thí nghiệm? ?? */ Mục tiêu đề tài: Thăm dò khả khai thác beta glucan từ nấm Vân. .. VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC THẮNG THĂM DÒ KHẢ NĂNG KHAI THÁC BETA- GLUCAN TỪ NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) VÀ NẤM HƯƠNG (LENTINULA EDODES ) Ở ĐIỀU... thông số tách chi? ??t polysaccharide, beta - glucan sở sản xuất đưa bước đầu đánh giá khả khai thác beta glucan từ loại nấm dược liệu nấm ăn Việt Nam điều kiện nuối cấy phịng thí nghiệm, lựa chọn