Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyêt thanh có chứa kháng thể kháng toxocara để sử dụng ngoại kiểm

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYÊT THANH CÓ CHỨA KHÁNG THỂ KHÁNG TOXOCARA ĐỂ SỬ DỤNG NGOẠI KIỂM Cơ quan chủ trì nhiệm vụ : TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Y HỌC Chủ trì nhiệm vụ: PGS TS VŨ QUANG HUY Thành phố Hồ Chí Minh - 20… Mẫu Báo cáo thống kê (trang Báo cáo tổng hợp kết nhiệm vụ) _ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYÊT THANH CÓ CHỨA KHÁNG THỂ KHÁNG TOXOCARA ĐỂ SỬ DỤNG NGOẠI KIỂM (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 22/04/2019) Cơ quan chủ quản (ký tên đóng dấu) Chủ trì nhiệm vụ (ký tên) PGS.TS VŨ QUANG HUY Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) Hồ Chí Minh- 2019 CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP, Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng 04 năm 2019 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể kháng Toxocara để sử dụng ngoại kiểm Thuộc lĩnh vực (tên lĩnh vực): Ngoại kiểm xét nghiệm Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Vũ Quang Huy Ngày, tháng, năm sinh: 07/11/1961 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Phó Giáo Sư Chức danh khoa học: Tiến Sĩ Chức vụ: Giám Đốc Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng y học Điện thoại: Tổ chức: 028 38530158 Nhà riêng: Mobile: 0913586389 Fax: 028 38552304; Email: drvuquanghuy@gmail.com Tên tổ chức công tác: Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm y học Địa tổ chức: 131 Nguyễn Chí Thanh, Phường 9, Quận 5, Thành Phố Hồ Chí Minh Địa nhà riêng: AA 54, Cảnh viên 1, khu đô thị Phú Mỹ Hưng, quận 7, Thành phố Hồ Chí Minh Tổ chức chủ trì nhiệm vụ(1): Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm y học Điện thoại: 028 38530158 Fax: 028 38552304 E-mail: trungtamkiemchuan@gmail.com Website: https://qccump.com Địa chỉ: 131 Nguyễn Chí Thanh, Phường 9, Quận 5, Thành Phố Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Tên Khoa Trung tâm, đơn vị - nơi quản lý trực tiếp cá nhân làm chủ nhiệm đề tài Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 04 năm 2018 đến tháng 04 năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng 04 năm 2018 đến tháng 04 năm 2019 - Được gia hạn (nếu có): Từ tháng… năm… đến tháng… năm… Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 30tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học nhà trường: 5tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: 19tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) Ghi (Số đề nghị toán) … c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Theo kế hoạch Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Tổng NSKH 10 Thực tế đạt Nguồn khác 10 Tổng NSKH 10 8 8 4.5 4.5 4.5 4.5 0.5 30 0.5 25 0.5 30 0.5 25 5 Nguồn khác 10 - Lý thay đổi (nếu có): Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng q 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh PGS.TS Vũ Quang Huy Tên cá nhân tham gia thực PGS.TS Vũ Quang Huy Ths Nguyễn Nhật Giang Ths Nguyễn Nhật Giang Cn Lâm Quốc Cường Ths Lê Ngọc Minh Trân Số TT Nội dung tham gia Theo dõi, thực toàn đề tài Thu thập tài liệu, nguyên liệu, sản xuất mẫu, đánh giá chất lượng mẫu Thu thập tài liệu, nguyên liệu, đánh giá chất lượng mẫu,viết, chỉnh sửa hoàn thiện đề tài Sản xuất mẫu, chỉnh sửa hoàn thiện đề tài CN Đặng Hùng Linh Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi ( có): Thay đổi nhân Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số Theo kế hoạch TT (Nội dung, thời gian, kinh phí, Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, Ghi chú* địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 16 đề cương, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngồi) Số TT Các nội dung, cơng việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Nghiên cứu tài liệu Thu thập nguyên liệu sản xuất Đánh giá nguyên liệu sản xuất Sản xuất mẫu Đánh giá chất lượng mẫu sản xuất Chỉnh sửa hoàn thiện đề tài Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế đạt hoạch 01/05/2018- 01/05/201801/07/2018 01/07/2018 02/07/2018- 02/07/201801/09/2018 01/09/2018 02/09/2018- 02/09/201801/11/2018 01/11/2018 02/11/2018- 02/11/201801/01/2019 01/01/2019 02/01//2019 02/01//201901/04/2019 01/04/2019 01/04/2019- 01/04/201918/04/2019 18/04/2019 Người, quan thực - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đề Cương Nghiên cứu Nguyên liệu Nguyên liệu chuẩn Mẫu ngoại kiểm giả định Nhóm mẫu ngoại kiểm - Lý thay đổi (nếu có): Đơn vị đo Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt 1 Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng Kết sơ dụng) 2 Đánh giá hiệu đề tài mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm ký sinh trùng, đặc biệt huyết chẩn đoán ký trùng đó có huyết chẩn đốn Toxocara canis cịn nhiều hạn chế: nay, chưa có bất kỳ công trình cơng bố mẫu ngoại kiểm ký sinh trùng nước Trong tình hình đó, việc sản xuất mẫu huyết sử dụng ngoại kiểm ký sinh trùng rất cần thiết Đề tài cở sở khoa họccho cơng trình nghiên cứu khoa học Ký sinh trùng khác có liên quan b) Hiệu kinh tế xã hội: Hiện tại đứng trước nhu cầu phát triển, nâng cao hệ thống quản lý chất lượng xét nghiệm, Bộ Y tế ban hành thơng tư hướng dẫn bắt buộc phịng xét nghiệm phải thực ngoại kiểm Bên cạnh đó việc sản xuất mẫu ngoại kiểm yêu cầu bắt buộc trung tâm kiểm chuẩn theo đề án 316 Thủ tướng phủ Các sản phẩm ngoại kiểm sử dụng nước lại nhập từ nước nên giá thành rất cao nên việc sản xuất mẫu đáp ứng nhu cầu rất lớn Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra đề tài: Số TT I II Nội dung Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Lần … Báo cáo giám định kỳ Lần … Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) Phụ lục Biểu D2_HDBCTH MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Toxocara sp 1.2 Kỹ thuật chẩn đoán huyết miễn dịch học bệnh ký sinh trùng 11 1.3 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm EQA 12 1.4 Sản xuất đánh giá mẫu huyết ngoại kiểm 19 1.5 Phương pháp đông khô 21 1.6 Phương pháp đông lạnh 26 1.7 Tình hình ngoại kiểm ngồi nước 28 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Thiết kế nghiên cứu 30 2.2 Đối tượng nghiên cứu 30 2.3 Cỡ mẫu 30 2.4 Tiêu chuẩn chọn mẫu 31 2.5 Phương pháp thu thập số liệu xử lý số liệu 31 2.6 Thiết bị, dụng cụ hoá chất 31 2.7 Phương pháp tiến hành 33 2.8 Kiểm soát sai lệch 47 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 48 3.1 Sản xuất mẫu huyết đặc hiệu Toxocara canis theo phương pháp đông khô đông lạnh 48 3.2 Kết đánh giá tính đồng nhất 51 3.3 Kết đánh giá độ ổn định 56 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 67 4.1 Sản xuất thử nghiệm mẫu huyết đặc hiệu Toxocara canis theo phương pháp đông khô đông lạnh 67 4.2 Tính đồng nhất mẫu sản xuất phương pháp đông khô đông lạnh 69 4.3 Độ ổn định mẫu sản xuất phương pháp đông khô đông lạnh theo thời gian nhiệt độ 70 KẾT LUẬN 74 KIẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 62 gấp, axit amin khơng phân cực đặt phía lõi bên phân tử dư lượng với chuỗi bên cực chủ yếu nằm bề mặt Các liên kết hydro nước với nhóm cực có thể tiếp cận bề mặt góp phần đáng kể vào ổn định cấu trúc protein Trong trường hợp này, phương pháp đông khô, với loại trừ nước thường gây bất ổn định mặt vật lý protein Hơn nữa, sau đông khô thành công, cấu trúc protein có thể trải qua loạt bất ổn định bao gồm: tổng hợp, oxy hóa, phản ứng Maillard thủy phân; đó, độ ổn định dài hạn phương pháp đông khơ có thể cịn hạn chế, đặc biệt nhiệt độ lưu trữ cao Những vấn đề bất ổn q trình đơng khơ lưu trữ có thể giảm thiểu cách lựa chọn pH, hàm lượng ẩm lại, quan trọng chất ổn định giúp ngăn chặn đóng băng mô phá huỷ tế bào trình làm lạnh [43] Trong nghiên cứu chúng tôi, điều kiện đông khô mẫu -40°C, áp suất 0,129mBar 18 Mẫu đông khô chúng tơi thực đơn vị bên ngồi, đó chúng tơi khơng thể kiểm sốt q trình đơng khơ mẫu có đạt điều kiện nhiệt độ, áp suất thời gian hay không Những yếu tố nhiệt độ, áp suất thời gian ảnh hưởng đáng kể đến chất lượng mẫu huyết đông khơ Ngồi ra, nghiên cứu chúng tơi, mẫu trước đông khô không thêm chất bảo quản Sau đông khô, mẫu chưa đánh giá chất lượng: hàm lượng ẩm lại mẫu Vì vậy, mặt lý thuyết, mẫu đơng khơ đạt độ ổn định thời gian dài bảo quản nhiệt độ phòng, trong nghiên cứu này, mẫu đông khô bảo quản nhiệt -80°C đạt độ ổn định tháng, sau tháng mẫu khơng cịn ổn định; bảo quản nhiệt độ – 8°C, mẫu không ổn định thời gian tháng Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 63 KẾT LUẬN Đã sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể đặc hiệu kháng Toxocara canis xác định kỹ thuật Western blot theo phương pháp đông khô đông lạnh để sử dụng ngoại kiểm: - Lô thứ nhất: mẫu sản xuất theo phương pháp đông khô; lô mẫu có 100 mẫu, mẫu có thể tích trước đơng khơ 100µl huyết thanh, nồng độ ban đầu 31,012 ± 2,280 NTU - Lô thứ hai: mẫu sản xuất theo phương pháp đông lạnh; lô mẫu có 100 mẫu, mẫu có thể tích trước đơng lạnh 100µl, nồng độ ban đầu 27,184 ± 1,988 NTU Mẫu sản xuất theo phương pháp đơng khơ đơng lạnh đạt tính đồng nhất độ ổn định: mẫu sản xuất phương pháp đơng lạnh có tính đồng nhất độ ổn định cao mẫu sản xuất phương pháp đông khô Các mẫu sản xuất bảo quản nhiệt độ -80°C có độ ổn định cao mẫu bảo quản nhiệt độ – 8°C - Độ ổn định dài hạn: bảo quản nhiệt độ -80°C, mẫu sản xuất phương pháp đông lạnh ổn định vòng ba tháng, mẫu sản xuất phương pháp đông khô ổn định tháng - Độ ổn định ngắn hạn: với giả định nhiệt độ trình vận chuyển 30°C, mẫu sản xuất phương pháp đông khô đông lạnh ổn định vòng ngày Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 64 KIẾN NGHỊ Từ kết đề tài nghiên cứu, đề xuất số kiến nghị sau: Nghiên cứu thêm chất bảo quản vào nguyên liệu sản xuất để tăng thời gian ổn định mẫu dài Nghiên cứu điều kiện sản xuất bảo quản mẫu đông khô, điều chỉnh quy trình sản x́t mẫu phương pháp đơng khơ để tăng chất lượng mẫu sản xuất Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế (2007), Quyết định 43/2007/QĐ-BYT: Quyết định việc ban hành quản lý chất thải Y tế, tr 3-13 Bộ Y Tế (2011), Thông tư 43/2011/TT-BYT: Quy định chế độ quản lý mẫu bệnh phẩm bệnh truyền nhiễm, tr.1-3 Bộ Y Tế (2013), Thông tư 01 Hướng dấn thực quản lý chất lượng sở khám chữa bệnh, tr 1-2 Trần Thị Kim Dung, Trần Phủ Mạnh Siêu (2009), Bệnh giun lươn giun đũa chó mèo, Nhà xuất Y học, TPHCM, tr.82-151 Đỗ Văn Dũng (2001), Căn thống kê y học, Nhà xuất TPHCM, tr 32-40 Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2009), Miễn dịch học ứng dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 132-153 Trần Vinh Hiển, Trần Thị Kim Dung (2008), Ký sinh trùng liên quan thú người, Nhà xuất Y học, TPHCM, tr 73-80 Vũ Quang Huy, Nguyễn Văn Hoàng Sơn (2017), "Quy trình sản xuất thử nghiệm mẫu ngoại kiểm định lượng HBV - DNA" Tạp chí Y học TPHCM, 21(5), tr.216-220 Vũ Quang Huy, Nguyễn Thị Quỳnh Nga (2017), "Xây dựng quy trình thử nghiệm sản xuất mẫu huyết ứng dụng ngoại kiểm hố sinh" Tạp chí Y học TPHCM, 21(5), tr.210-214 10 Lê Hữu Khương (2012), Ký sinh trùng thú y, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 94, tr 130-135 11 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 7366:2011 - ISO Guide 34:2009 (2011), Yêu cầu chung lực nhà sản xuất mẫu chuẩn, Hà Nội, tr 3-15 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 12 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 7777-1:2008 - ISO/IEC Guide 43-1:1997 (1997), Thử nghiệm thành thạo so sánh liên phịng thí nghiệm lần 1: Xây dựng triển khai chương trình thử nghiệm thành thạo, Hà Nội, tr 4-10 13 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 8245 (2009), Mẫu chuẩn - Nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận, Hà Nội, tr 3-10, tr 2023 14 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN ISO 15189:2014 (2014), Phịng thí nghiệm Y tế - Yêu cầu chung lực chất lượng, Hà Nội, tr 32-33 15 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN ISO/IEC 17043:2011 - ISO/IEC 17043:2010 (2011), Đánh giá phù hợp - Yêu cầu chung thử nghiệm thành thạo, Hà Nội, tr 9-11 16 Khuất Hữu Thanh (2006), Kỹ thuật gen Nguyên lý ứng dụng, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 183 17 Thủ Tướng Chính Phủ (2016), Quyết định phê duyệt đề án tăng cường lực quản lý hệ thống quản lý chất lượng xét nghiệm y học giai đoạn 2016 - 2015, tr 18 Mai Thị Trong (2013), "Tình hình nhiễm ký sinh trùng cán chiến sĩ đến khám điều trị tại bệnh viện 30-4 năm 2011-2012", Tạp chí Y học TPHCM, 17(1), tr 157-159 19 Lê Thị Xuân (2008) Ký sinh trùng thực hành, Nhà xuất Giáo dục, TPHCM, tr 82-88 20 ISO 13528:2015 (2015), Statistical Methods For Use In Proficiency Testing By Interlaboratory Comparison, 44-51 21 Zhang X J., Lv Q., Min L H., Cao X H., Li X J (2017), "Effect of developmental stage of embryos at freezing on live birth outcomes after frozen embryo transfer" Cryo Letters, 38 (5), 399-406 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 22 Ariyaratne A., Szabo E K., Bowron J., Finney C A M (2018), "Increases in helminth-induced IL-21 protein levels disappear upon sample freezing" Cytokine, 108, 179-181 23 Ahn S J., Ryoo N K., Woo S J (2014), "Ocular toxocariasis: clinical features, diagnosis, treatment, and prevention", Asia Pac Allergy, (3), 134-141 24 Cdc (2013) Toxocariasis, https://www.cdc.gov/parasites/toxocariasis/index.html, truy cập ngày 28/6/2018 25 Collier S., Manser M., Chiodini P L (2010), "External quality assessment scheme for parasite serology; a review of the scheme design and performance" J Clin Pathol, 63 (5), 441-444 26 Choobineh M., Mikaeili F., Sadjjadi S M., Ebrahimi S., Iranmanesh S (2018), "Molecular characterization of Toxocara spp eggs isolated from public parks and playgrounds in Shiraz, Iran" J Helminthol, 1-7 27 Despommier D (2003), "Toxocariasis: clinical aspects, epidemiology, medical ecology, and molecular aspects" Clin Microbiol Rev, 16 (2), 265-272 28 Fillaux J., Magnaval J F (2013), "Laboratory diagnosis of human toxocariasis" Veterinary Parasitology, 193 (4), 327-336 29 Gavignet Bộatrice, Piarroux Renaud, Aubin Franỗois, Millon Laurence, Humbert Philippe (2008), "Cutaneous manifestations of human toxocariasis" Journal of the American Academy of Dermatology, 59 (6), 1031-1042 30 Iddawela D., Ehambaram K., Atapattu D., Pethiyagoda K., Bandara L (2017), "Frequency of Toxocariasis among Patients Clinically Suspected Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh to Have Visceral Toxocariasis: A Retrospective Descriptive Study in Sri Lanka", J Parasitol Res, 2017, 1-6 31 Iddawela D., Ehambaram K., Bandara P (2017), "Prevalence of Toxocara antibodies among patients clinically suspected to have ocular toxocariasis: A retrospective descriptive study in Sri Lanka", BMC Ophthalmol, 17 (1), 50 32 IFFC - Fundamentals for External Quality Assessment (EQA), Guidelines for Improving Analytical Quality by Establishing and Managing EQA schemes, 2-7 33 Institute for International Cooperation in Animal Biologics (2018) Toxocariasis, http://www.cfsph.iastate.edu/DiseaseInfo/disease.php?name=toxocariasi s&lang=en, truy cập ngày 29/6/2018 34 Lunan Wang Kuo Zhang, Guigao Lin, Yu Sun, Rui Zhang, Jiehong Xie, Jinming Li (2015), "Results of the National External Quality Assessment for Toxoplasmosis Serological Testing in China", PLOS one, 10(6), 16 35 Khademvatan Shahram, Abdizadeh Rahman, Tavalla Mahdi (2014), "Molecular characterization of Toxocara spp from soil of public areas in Ahvaz southwestern Iran", Acta Tropica, 135, 50-54 36 Liu E W., Chastain H M., Shin S H., Wiegand R E., Kruszon-Moran D., Handali S., et al (2018), "Seroprevalence of Antibodies to Toxocara Species in the United States and Associated Risk Factors, 2011-2014" Clin Infect Dis, 66 (2), 206-212 37 Lötsc Felix, Vingerling Rieke, Spijker Rene, Grobusch Martin Peter (2017), "Toxocariasis in humans in Africa – A systematic review", Travel Medicine and Infectious Disease, 20, 15-25 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 38 Ma Y., Wu X., Zhang Q., Giovanni V., Meng X (2018), "Key composition optimization of meat processed protein source by vacuum freeze-drying technology", Saudi J Biol Sci, 25 (4), 724-732 39 Maleki Bahman, Khorshidi Ali, Gorgipour Mohammad, Mirzapour Aliyar, Majidiani Hamidreza, Foroutan Masoud (2017), "Prevalence of Toxocara spp eggs in soil of public areas in Iran: A systematic review and meta-analysis" Alexandria Journal of Medicine, 54(2), 97-101 40 Nguyen H H., Vo D T., Thai T T., Le T T., Le T D., Hoang N S (2017), "The 33.1 kDa Excretory/secretory Protein Produced by Toxocara canis Larvae Serves as a Potential Common Biomarker for Serodiagnosis of Toxocariasis in Paratenic Animals and Human", Iran J Parasitol, 12 (1), 69-82 41 Otero David, Alho Ana M., Nijsse Rolf, Roelfsemajeroen, Overgaauw Paul, Madeira De Carvalho Luís (2018), Environmental contamination with Toxocara spp eggs in public parks and playground sandpits of Greater Lisbon, Portugal, Journal of Infection and Public Health, 11 (1), 94-98 42 Roldan W H., Espinoza Y A (2009), "Evaluation of an enzyme-linked immunoelectrotransfer blot test for the confirmatory serodiagnosis of human toxocariasis", Mem Inst Oswaldo Cruz, 104 (3), 411-418 43 Song J G., Lee S H., Han H K (2016), "Biophysical evaluation of aminoclay as an effective protectant for protein stabilization during freeze-drying and storage", Int J Nanomedicine, 11, 6609-6619 44 Sowemimo O A., Lee Y L., Asaolu S O., Chuang T W., Akinwale O P., Badejoko B O., et al (2017), "Seroepidemiological study and associated risk factors of Toxocara canis infection among preschool children in Osun State, Nigeria", Acta Trop, 173, 85-89 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 Sudhakar N R., Samanta S., Sahu S., Raina O K., Gupta S C., Goswami T K., et al (2014), "Characterization of excretory-secretory antigens of adult Toxocara canis by western blotting", J Parasit Dis, 38 (2), 166169 46 Overview of External Quality Assessment (EQA), http://www.who.int/ihr/training/laboratory_quality/10_b_eqa_contents.p df, truy cập ngày 29/6/2018 47 World Health Organization (2011), Laboratory quality management system: handbook, Geneva: World Health Organization, 111-123 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Phụ lục 01: Biểu mẫu theo dõi nhiệt độ thiết bị TRUNG TÂM KIỂM CHUẨN CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Y HỌC Địa chỉ: 131 Nguyễn Chí Thanh, Phường 9, Quận 5, TP Hồ Chí Minh Điệnthoại: (08) 38531058 * Fax: (08) 38531049 Email: trungtamkiemchuan@gmail.com * Web:http://qccump.com BẢNG THEO DÕI NHIỆT ĐỘ Tháng… năm …… Tên thiết bị: Phòng: Khoảng nhiệt độ chấp nhận : Ngày Nhiệt độ 9h 15h Người tổng hợp Ký tên Người thực Ghi Người giám sát Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 02: Kết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh đông khô đánh giá đồng Descriptives GTĐL N ĐL1 ĐL2 ĐL3 ĐL4 ĐL5 ĐL6 ĐL7 ĐL8 ĐL9 ĐL10 Total Mean 2 2 2 2 2 20 Std Deviation 27,59000 26,20000 27,49150 27,74600 27,43050 27,13200 26,23350 26,70550 27,46650 27,84650 27,18420 1,407142 ,353553 1,911310 1,252993 ,870448 ,345068 ,212839 ,474469 1,689278 ,965201 ,994108 Std Error 95% Confidence Interval for Minimum Maximum Mean Lower Bound Upper Bound 14,94733 40,23267 26,595 28,585 23,02345 29,37655 25,950 26,450 10,31906 44,66394 26,140 28,843 16,48830 39,00370 26,860 28,632 19,60983 35,25117 26,815 28,046 24,03169 30,23231 26,888 27,376 24,32122 28,14578 26,083 26,384 22,44257 30,96843 26,370 27,041 12,28894 42,64406 26,272 28,661 19,17452 36,51848 27,164 28,529 26,71894 27,64946 25,950 28,843 ,995000 ,250000 1,351500 ,886000 ,615500 ,244000 ,150500 ,335500 1,194500 ,682500 ,222289 ANOVA GTĐL Sum of Squares Df Mean Square Between Groups Within Groups 6,516 12,261 10 Total 18,777 19 Descriptives GTĐK N DK1 DK2 DK3 DK4 DK5 DK6 DK7 DK8 DK9 DK10 Total Mean 2 2 2 2 2 20 Std Deviation 30,72900 31,27800 31,95000 30,68700 31,36250 31,88350 32,57850 29,69450 29,64700 30,31200 31,01220 ,189505 ,196576 ,213546 ,318198 ,130815 2,126270 ,437699 ,058690 1,605132 ,165463 1,139752 Std Error F ,724 1,226 Sig ,591 ,779 95% Confidence Interval for Minimum Maximum Mean Lower Bound Upper Bound 29,02637 32,43163 30,595 30,863 29,51184 33,04416 31,139 31,417 30,03136 33,86864 31,799 32,101 27,82810 33,54590 30,462 30,912 30,18718 32,53782 31,270 31,455 12,77972 50,98728 30,380 33,387 28,64593 36,51107 32,269 32,888 29,16719 30,22181 29,653 29,736 15,22546 44,06854 28,512 30,782 28,82537 31,79863 30,195 30,429 30,47878 31,54562 28,512 33,387 ,134000 ,139000 ,151000 ,225000 ,092500 1,503500 ,309500 ,041500 1,135000 ,117000 ,254856 ANOVA GTĐK Between Groups Within Groups Sum of Squares Df 17,123 7,558 Total Mean Square 10 24,682 F 1,903 ,756 Sig 2,517 ,083 19 Phụ lục 03: Kết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông khô bảo quản -80°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng Group Statistics TS BANDAU SSDK SAU N Mean 20 Std Deviation 31,01220 31,86533 Std Error Mean 1,139752 1,410578 ,254856 ,575866 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed Group Statistics TS BANDAU SSDK SAU ,543 t-test for Equality of Means t df Sig (2- Mean tailed) Difference Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper ,468 -1,526 24 ,140 -,853133 ,559137 -2,007136 ,300870 -1,355 7,079 ,217 -,853133 ,629741 -2,338873 ,632606 N Mean Std Deviation 20 31,01220 28,47883 Std Error Mean 1,139752 1,136339 ,254856 ,463908 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed ,006 t-test for Equality of Means t df ,939 4,778 Sig (2tailed) Mean Std Error 95% Confidence Difference Difference Interval of the Difference Lower Upper 24 ,000 2,533367 ,530195 1,439098 3,627635 4,786 8,275 ,001 2,533367 ,529304 1,319817 3,746916 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 04: Kết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông khô bảo quản 2-8°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng Group Statistics TS BANDAU SSDK SAU Independent Samples Test N Mean Std Deviation 20 31,01220 28,85300 Levene's Test for t-test for Equality of Means Equality of Variances F Sig t df Sig Mean (2Difference tailed) Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed ,017 Group Statistics TS BANDAU SSDK SAU Independent Samples Test ,896 Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed ,000 2,159200 ,533786 1,057520 3,260880 3,980 8,063 ,004 2,159200 ,542467 ,909976 3,408424 Mean ,356 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 24 Std Deviation 20 ,887 Std Error Difference ,254856 ,478872 4,045 N Levene's Test for Equality of Variances F Sig Std Error Mean 1,139752 1,172992 31,01220 25,42967 Std Error Mean 1,139752 ,711749 ,254856 ,290570 t-test for Equality of Means t df Sig (2tailed) Mean Difference Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 11,263 24 ,000 5,582533 ,495668 4,559524 6,605543 14,444 13,543 ,000 5,582533 ,386501 4,750938 6,414128 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 10 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 05: Kết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh bảo quản -80°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng Group Statistics TS BANDAU SSDL SAU Independent Samples Test N Mean 20 Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Group Statistics TS BANDAU SSDL SAU Independent Samples Test 8,044 t df ,280 ,454 N Sig (2- Mean tailed) Difference Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper ,782 -,116967 ,417304 -,978240 ,744307 23,659 ,654 -,116967 ,257893 -,649638 ,415704 Mean ,010 ,222289 ,130753 24 20 7,862 Std Error Mean ,994108 ,320278 t-test for Equality of Means ,009 Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Std Deviation 27,18420 27,30117 Std Deviation 27,18420 26,79450 Std Error Mean ,994108 ,314117 ,222289 ,128238 t-test for Equality of Means t df Sig (2tailed) Mean Difference Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper ,934 24 ,359 ,389700 ,417093 -,471137 1,250537 1,519 23,753 ,142 ,389700 ,256627 -,140243 ,919643 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 11 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 6: Kết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh bảo quản 2-8°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng Group Statistics TS BANDAU SSDL SAU Independent Samples Test N Mean Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Group Statistics TS BANDAU SSDL SAU Independent Samples Test ,469 t df Sig (2- Mean tailed) Difference ,222289 ,367615 Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 24 ,023 1,106200 ,453997 ,169197 2,043203 2,575 9,008 ,030 1,106200 ,429597 ,134515 2,077885 Mean Std Deviation 20 ,871 ,994108 ,900469 2,437 N ,027 Std Error Mean 27,18420 26,07800 t-test for Equality of Means ,500 Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Std Deviation 20 27,18420 24,55633 ,994108 1,096784 Std Error Mean ,222289 ,447760 t-test for Equality of Means t df Sig (2tailed) Mean Difference Std Error Difference 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 5,555 24 ,000 2,627867 ,473087 1,651463 3,604271 5,257 7,646 ,001 2,627867 ,499902 1,465738 3,789996 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 12 ... TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYÊT THANH CÓ CHỨA KHÁNG THỂ KHÁNG TOXOCARA ĐỂ SỬ DỤNG... đoán Toxocara canis, tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể kháng Toxocara để sử dụng ngoại kiểm” với mục tiêu sau: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Sản. .. KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể kháng Toxocara để sử dụng ngoại kiểm Thuộc lĩnh