NGHIÊN cứu QUY TRÌNH sản XUẤT mẫu HUYẾT THANH sử DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG xét NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HBV DNA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HBV- DNA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ NỘI TRÚ KHÓA 39 HÀ NỘI – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HBV- DNA Chuyên ngành : Hóa sinh Mã số : NT 62720401 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ NỘI TRÚ KHÓA 39 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS TẠ THÀNH VĂN HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung, người ln tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho tơi suốt q trình học tập Thầy Cô tận tâm hướng dẫn, đóng góp, sửa chữa động viên tơi hồn thành tốt luận văn Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy, Cô cán mơn Hóa sinh, ln tận tình dạy dỗ, truyền đạt cho kiến thức chuyên ngành kinh nghiệm quý giá Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc lãnh đạo Trung tâm kiểm chuẩn Đại học Y Hà Nội, giúp tạo điều kiện thuận lợi cho tham gia đề tài triển khai thực nghiên cứu trung tâm Xin cảm ơn anh chị khoa xét nghiệm - Bệnh viện Đại học Y, Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệmvà Trung tâm nghiên cứu Gen-protein - đại học Y Hà Nội giúp đỡ tơi có điều kiện sở vật chất, kinh nghiệm để thực nghiên cứu Xin bày tỏ lòng kính u sâu sắc đến gia đình, Những người thân, người thương, bạn bè ln bên hỗ trợ, cổ vũ, động viên tơi hồn thành khóa luận Để hồn thành luận văn này, nhận ủng hộ tài từ đề tài cấp sở “Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết sử dụng kiểm tra chất lượng xét nghiệm DNA- HBV” – Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm - đại học Y Hà Nội tài trợ Hà nội, ngày 01 tháng 10 năm 2017 Nguyễn Thị Thùy LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu luận văn tốt nghiệp Bác sĩ Nội trú hồn tồn trung thực thân tơi thu q trình nghiên cứu, khơng chép Tơi xin chịu trách nhiệm hồn tồn với độ xác thực luận văn Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2017 Tác giả Nguyễn Thị Thùy MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Virus viêm gan B 1.1.1 Hình thái virus 1.1.2 Cấu trúc gen virus 1.1.3 Chu kỳ nhân lên virus 1.1.4 Kiểu gen HBV vai trò sinh bệnh học 1.1.5 Dịch tễ học 1.1.6 Diến tiến nhiễm HBV 1.1.7 Phòng ngừa HBV 1.2 Xét nghiệm định lượng HBV-DNA phòng xét nghiệm 10 1.2.1 Ý nghĩa lâm sàng định lượng HBV- DNA 10 1.2.2 Kĩ thuật định lượng HBV- DNA 11 1.2.3 Kỹ thuật Real-time PCR 12 1.3 Đảm bảo chất lượng xét nghiệm 15 1.3.1 Yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng xét nghiệm 16 1.3.2 Các sai số phòng thí nghiệm 17 1.3.3 Nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm .18 1.3.4 Ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm 19 1.3.5 Mẫu kiểm tra chất lượng yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng mẫu 23 1.4 Tiêu chuẩn mẫu chuẩn 24 1.4.1 Tiêu chuẩn quốc tế mẫu chuẩn 24 1.4.2 Tiêu chuẩn sở 26 1.5 Xét nghiệm định lượng HBV-DNA Việt Nam 28 1.5.1 Hệ thống phòng xét nghiệm định lượng HBV-DNA Việt Nam .28 1.6 Quy trình sản xuất mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khô HBV-DNA .28 1.6.1 Về phương pháp điều chế 28 1.6.2 Quy trình chuẩn bị huyết tương đông khô theo hướng dẫn WHO .29 1.7 Phương pháp đánh giá độ ổn định ngắn hạn 30 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Vật liệu nghiên cứu 32 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 32 2.1.2 Tiêu chuẩn chấp nhận 32 2.1.3 Tiêu chuẩn loại bỏ 32 2.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất sử dụng nghiên cứu 32 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 33 2.3.2 Xây dựng mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khô HBV-DNA 33 2.3.3 Xác định đặc tính mẫu kiểm tra chất lượng 34 2.3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở 36 2.4 Sơ đồ nghiên cứu 37 2.5 Quy trình nghiên cứu 38 2.6 Đánh giá chất lượng mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khô HBV-DNA 39 2.6.1 Đánh giá độ đồng 39 2.6.2 Đánh giá độ ổn định 40 2.7 Thử nghiệm đánh giá ngoại kiểm xét nghiệm định lượng HBV-DNA 41 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 43 3.1 Kết xây dựng quy trình sản xuất mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khơ HBV-DNA 43 3.1.1 Phương trình đường chuẩn định lượng HBV-DNA 43 3.1.2 Kết phân tích đặc điểm mẫu kiểm tra chất lượng 45 3.2 Kết đánh giá chất lượng mẫu .46 3.2.1 Chất lượng mẫu huyết tương kiểm tra HBV- DNA dạng đông khô 46 3.3 Độ đồng độ ổn định mẫu huyết tương kiểm tra dạng đông khô HBV- DNA 49 3.3.1 Độ đồng mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khô HBV-DNA 49 3.3.2 Độ ổn định dài hạn mẫu huyết tương kiểm tra chất lượng dạng đông khô HBV-DNA 53 3.3.3 Kết so sánh chất lượng mẫu huyết tương kiểm tra với tiêu chuẩn Iso 13528 56 3.3.4 Độ ổn định ngắn hạn mẫu kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBV- DNA 56 3.4 Kết thử nghiệm ngoại kiểm xét nghiệm định lượng HBV-DNA 57 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 60 4.1 Quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm dạng đông khô 60 4.1.1 Thu thập xử lý mẫu huyết tương 60 4.1.2 Chia đông khô mẫu kiểm tra chất lượng 63 4.1.3 Trọng lượng khô vật liệu nghiên cứu 64 4.1.4 Đánh giá chất lượng thiết bị phân tích mẫu 64 4.1.5 Đánh giá độ đồng mẫu chuẩn HBV-DNA 65 4.1.6 Đánh giá độ ổn định mẫu chuẩn HBV-DNA 66 4.1.7 Độ ổn định ngắn hạn mẫu huyết tương kiểm tra dạng đông khô sử dụng xét nghiệm định lượng HBV- DNA 69 4.2 Đánh giá kết thử nghiệm ngoại kiểm 69 4.3 Tiêu chuẩn sở 70 KẾT LUẬN 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT HBV : Hepatits B Virus DNA : Deoxyribonucleic acid HBsAg : Hepatitis B Surface Antigen HBc : Hepatitis B Core PCR : Polymerase chain reaction EQA : External quality assessment QA : Quality assurance QC : Quality Control IQC : Internal Quality Control ISO : WHO Standardization International Organization : World Health Organization for DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Cấu trúc HBV Hình 1.2: Quá trình nhân lên HBV tế bào gan Hình 1.3: Nguyên lý kỹ thuật Realtime PCR 13 Hình 1.4: Biểu đồ biểu diễn khuếch đại mẫu 14 Hình 1.5: Đường biểu diễn kết nồng độ 15 Hình 1.6: Tính xác thực xét nghiệm 18 Hình 1.7: Vai trò đơn vị tham gia ngoại kiểm 20 Hình 3.1: Đường tín hiệu mẫu chuẩn HBV-DNA 43 Hình 3.2: Bộ mẫu chuẩn sau chia 46 Hình 3.3: Mẫu đông khô bị loại bỏ 47 Hình 3.4: Trước sau hồn ngun mẫu đơng khơ 47 Hình 3.5: Kết đồng mẫu nồng độ thấp nồng độ cao 51 Hình 3.6: Kết chạy độ ổn định tháng 54 Hình 3.7: Thời gian mẫu vận chuyển đến đơn vị quay trở lại Trung tâm kiểm chuẩn Đại Học Y Hà Nội 56 91 mẫu chuẩn cần đánh giá độ ổn định sau thời gian bảo quản thời gian 12 tháng Do thời gian thực đề tài có hạn nên thời gian tới chúng tơi tiếp tục theo dõi độ ổn định mẫu nồng độ thấp Chúng hy vọng mẫu chuẩn đáp ứng yêu cầu độ ổn định triển khai sản xuất tương lai Góp phần vào cơng tác đảm bảo chất lượng xét nghiệm nói chung xét nghiệm định lượng HBV- DNA nói riêng giúp phục vụ cơng tác chăm sóc sức khỏe nhân dân tốt 4.1.7 Độ ổn định ngắn hạn mẫu huyết tương kiểm tra dạng đông khô sử dụng xét nghiệm định lượng HBV- DNA Sau mẫu đạt tiêu chuẩn độ đồng độ ổn định tháng, tiếp tục đánh giá độ ổn định ngắn hạn (độ ổn định mẫu thời gian vận chuyển) Bộ mẫu gửi đến đơn vị chương trình ngoại kiểm hóa sinh, miễn dịch khác Do kinh phí đề tài số bệnh viện thực xét nghiệm định lượng HBV-DNA không nhiều xét nghiệm khác mà chọn đơn vị 15 đơn vị tham gia đánh giá thử nghiệm mẫu ngoại kiểm HBV-DNA: đơn vị Hà Nội vận chuyển mẫu thời gian ngắn (20 phút) đơn vị Thái Bình nhận mẫu thời gian trung bình (2,5 giờ), lại đơn vị Phú Thọ nhận mẫu thời gian dài (4 giờ) Khi mẫu đến đơn vị ghi lại nhận gửi trở lại Trung tâm kiểm chuẩn Đại học Y 92 Hà Nội Khi mẫu tới phòng nghiên cứu chúng tơi tiến hành đánh giá tình trạng mẫu tiến hành phân tích mẫu sau so sánh kết với mẫu lô bảo quản -20 0C trung tâm Kết phân tích cho thấy với T= - 0,665, p=0.575 > 0,05, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Như mẫu đảm bảo trong vận chuyển phân phối điều kiện miền bắc Việt Nam Như tương lai, mẫu sản xuất hồn tồn áp dụng điều kiện nước ta số chương trình ngoại kiểm khác 4.2 Đánh giá kết thử nghiệm ngoại kiểm Do xét nghiệm định lượng HBV-DNA xét nghiệm đắt tiền yêu cầu trang thiết bị trình độ kỹ thuật viên nên số bệnh viện thực xét nghiệm so với xét nghiệm hóa sinh hay miễn dịch khác Chúng tơi liên hệ 10 phòng thí nghiệm chạy hệ thống máy bán tự động sử dụng sử dụng loại hóa chất phòng xét nghiệm sử dụng máy RT-PCR tự động Roche đồng ý tham gia vào chương trình thử nghiệm mẫu kiểm tra chất lượng chương trình ngoại kiểm Trong 10 đơn vị sử dụng hệ thống bán tự động có đơn vị có số Z-score > 3, hệ thống tự động đơn vị ngưỡng đạt Chúng cho thực phương pháp RT-PCR bán tự động, kĩ thuật tách DNA-HBV qua nhiều bước sử dụng micro pipet thể tích hút nhỏ 5-10 μL, nên kết dễ bị ảnh hưởng Do độ thành thạo kĩ thuật viên việc 93 hiệu chuẩn dụng cụ đo đảm bảo kết xét nghiệm định lượng HBV-DNA quan trọng 4.3 Tiêu chuẩn sở Tiêu chuẩn sở xây dựng dựa kết nghiên cứu khoa học công nghệ, tiến kỹ thuật, kinh nghiệm, nhu cầu khả thực tiễn sở Các tiêu chuẩn quốc gia, tiêu chuẩn quốc tế, khu vực nước tương ứng khuyến khích sử dụng để xây dựng chấp nhận thành tiêu chuẩn sở Phương thức xây dựng tiêu chuẩn sở: Có thể chấp nhận tiêu chuẩn quốc gia, tiêu chuẩn quốc tế, tiêu chuẩn khu vực tiêu chuẩn nước tương ứng thành tiêu chuẩn sở Từ kết nghiên cứu trên, đưa tiêu chuẩn sở cho sản xuất mẫu kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBV-DNA sau: - Áp dụng tiêu chuẩn Iso 13528 đánh giá độ đồng độ ổn định mẫu chuẩn tiêu chuẩn đánh giá độ đồng độ ổn định huyết tương kiểm tra dạng đông khô HBV-DNA - Mẫu huyết tương nghiên cứu bảo quản - 20 0C - Mẫu huyết tương nghiên cứu đảm bảo tính đồng ổn định vòng 10 tháng 94 KẾT LUẬN Từ kết thí nghiệm phân tích đây, rút số kết luận sau: Hồn thiện quy trình sản xuất mẫu kiểm tra chất lượng dạng đông khô sử dụng xét nghiệm định lượng HBV- DNA Từ kết nghiên cứu xây dựng quy trình chi tiết sản xuất mẫu chuẩn cho chương trình đánh giá chất lượng xét nghiệm phòng thí nghiệm định lượng HBV-DNA gồm bước Bước 1: Thu thập bảo quản mẫu Bước 2: Bất hoạt vi rút viêm gan B nhiệt Bước 3: Trộn lọc mẫu Bước 4: xác định đặc tính mẫu huyết tương Bước 5: Chia mẫu vào lọ 2ml Bước 6: Đông khô mẫu Bước 7: Kiểm tra độ đồng mẫu Bước 8: Kiểm tra độ ổn định dài hạn Và sản xuất thành công mẫu kiểm tra chất lượng xét nghiệm HBV-DNA dạng đông khô 95 Bộ mẫu chuẩn định lượng HBV-DNA sản xuất điều kiện sản xuất Trung tâm Kiểm chuẩn hoàn toàn đáp ứng tiêu chuẩn theo Iso 13528 Như áp dụng tiêu chuẩn Iso 13528 mẫu chuẩn tiêu chuẩn sở 96 KIẾN NGHỊ Sau thử nghiệm ngoại kiểm xét nghiệm HBV-DNA bệnh viện cho thấy thành thạo kỹ thuật viên chưa đồng đều, việc hiệu chuẩn dụng cụ cần thiết TÀI LIỆU THAM KHẢO Global, regional and national age–sex specific all-cause and causespecific mortality for 240 causes of death 1990–2013 A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013 Lancet (2015) GBD 2013 Mortality and Causes of Death Collaborators 385(9963), 117–171 WHO (2015) Guidelines for the prevention, care and treatment of persons with chronic hepatitis B infection C Wong D.H.K., A.M., et al (1993) Effect of alpha-interferon treatment in patients with hepatitis B e antigen- positive chronic hepatitis B: a meta- analysis Annals of Internal Medicine, 119: 321-323 A J a L Zuckerman, D (1999) Treatment options for chronic hepatitis: antivirals look promising British Medical Journal, 319: 799-800 R F D'Souza, G R., (2004) Diagnosis and treatment of chronic hepatitis B Journal of the Royal Society of Medicine 2004, 97, (7), 318-321 C Brechot, M Hadchouel, J Scotto, (1981) Detection of hepatitis B virus DNA in liver and serum: a direct appraisal of the chronic carrier state Lancet II, 765–768 S J Hadziyannis, H M Lieberman, G G Karvountzis, (1983) Analysis of liver disease, nuclear HBcAg, viral replication, and hepatitis B virus DNA in liver and serum of HBeAg vs anti-HBe positive carriers of hepatitis B virus Hepatology 3, 656–662 R Kinoshita, K Miura, H Uchino, A Konishi, (1981) Chronic hepatitis B: correlation between viral replication and clinical course J Infect Dis, 144, 303–306 10 P Pontisso, F Bortolotti, G Fattovich, (1989) Hepatitis B virus DNA forms in the liver of chronically infected individuals Relation to replication profile J Hepatol, 9, 29–35 11 P Pontisso, D Stenico, G Diodati, (1987) HBV-DNA sequences are rarely detected in the liver of patients with HBsAg-negative chronic active liver disease and with hepatocellular carcinoma in Italy Liver 7, 211–215 12 Pawlotsky J M (2003) Hepatitis B virus (HBV) DNA assays (methods and practical use) and viral kinetics J Hepatol, 39 Suppl 1, S31-35 13 M.-T L Ling-Liang S, Michael J, (2008) Application of Traditional Clinical Pathology Quality Control Techniques to Molecular Pathology J Mol Diag 2008, 2(10), 142-147 14 P D Clark A Rundell (2008) Upgrading quality control in molecular diagnostics IVD Technology 15 H M Elgouhari, et al (2008) Hepatitis B infection: understanding its epidemiology, course and diagnosis Cleve Clin J Med, 75, 881-889 16 C Seeger, et al Hepadnaviruses Field's Virology, Knipe, D.M., Howley, P.M., 5th Edition, 2977-3029 17 D N Cai, H.; Yan, R (2013) A Southern Blot Assay for Detection of Hepatitis B Virus Covalently Closed Circular DNA from Cell Cultures In Antiviral Methods and Protocols, Gong, E Y., Ed Humana Press, 1030, 151-161 18 D S Dane, Cameron, C.H., Briggs, M (1970) Virus-like particles in serum of patients with Australia-antigen-associated hepatitis Lancet, 1, 695-698 19 B S Blumberg, et al (1965) A "new" antigen in leukemia sera JAMA, 191, 541-546 20 James A Perkins (2002) Medical and Scientific illustrations 21 G.-R A Gavilanes F, Peterson D (1982) Structure of hepatitis B surface antigen: characterization of the lipid components and their association with the viral proteins J Biol Chem, 257, 7770–7777 22 X N Ning, D.; Mentzer, L (2011) Secretion of genome-free hepatitis B virus single strand blocking model for virion morphogenesis of pararetrovirus PLoS Pathog, (9), e1002255 23 J L Dienstag (2008) Drug therapy - Hepatitis B virus infection New England Journal of Medicine, 359, (14), 1486-1500 24 Z S Hatton T, Standring DN (1992) RNA- and DNA-binding activities in hepatitis B virus capsid protein: a model for their roles in viral replication J Virol, 66, 5232–5241 25 L T Milich D (2003) Exploring the biological basis of hepatitis B e antigen in hepatitis B virus infection Hepatology, 38, 1075–1086 26 J J L Chang, S R (2007) Immunopathogenesis of hepatitis B virus infection Immunology and Cell Biology, 85 (1), 16-23 27 N V M Bùi Ðại, Nguyễn Hoàng Tuấn, (2005) Bệnh học truyền nhiễm, NXB y học, Hà Nội 28 B m N Trường ĐH Y Dược Tp HCM (2000) Viêm gan siêu vi B-Từ cấu trúc siêu vi đến điều trị, NXB Đà Nẵng, 29 R W Will H, Weimer T, (1987) Replication strategy of human hepatitis B virus J Virol, 61, 904–911 30 P T T H v c s Đông Thị Hoài An (2009) Sự liên quan kiểu gen vi rút viêm gan B với dạng lâm sàng viêm gan B Tạp chí ban mật Việt Nam, 9, 5-15 31 S E S Livingston, J P.; Bulkow, L R (2007) Clearance of hepatitis B e antigen in patients with chronic hepatitis B and genotypes A, B, C, D, and F Gastroenterology, 133 (5), 1452-1457 32 J L Dienstag (2008) Hepatitis B virus infection N Engl J Med, 359, 1486-1500 33 C V Q D Pan, Z P.; Bhamidimarri, K R (2012) An Algorithm for Risk Assessment and Intervention of Mother to Child Transmission of Hepatitis B Virus Clinical Gastroenterology and Hepatology, 10 ((5)), 452-459 34 C R Hwang EW (2011) Global Epidemiology of Hepatitis B virus (HBV) Infection North American Journal of Medicine of Science 35 WHO (2001) Introduction of hepatitis B vaccine into childhood immunization services 36 Tổ chức y tế giới khu vực Tây Thái Bình Dương (2016) Viêm gan B điều cần biết 37 H T N Nguyên, N.T.Vân (1992) Field H.A Tạp chí vệ sinh phòng dịch, II (1), 1-16 38 O L Krugman S, Mushahwar IK (1979) Viral hepatitis, type B Studies on natural history and prevention reexamined N Engl J Med, 300, 101–106 39 G M Liang TJ (2002) Hepatitis B e antigen–the dangerous endgame of hepatitis B N Engl J Med, 347, 208–210 40 Y.-F Liaw (2009) Hepatitis B virus infection Lancet, 1, 695-698 41 Bộ Y Tế (2014) Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh viêm gan vi rút B 42 B J McMahon, Anna S.F.Lok (2009) AASLD PRACTICE GUIDELINES Chronic Hepatitis B: Update 2009, Hepatology 43 Post (2011) A Simulation Shows That Early Treatment Of Chronic Hepatitis B Infection Can Cut Deaths And Be Cost-Effective Health Affairs, 30 (3), 340 44 T V J A Nguyen Tin (2010) Hepatitis B surface antigen levels during the natural history of chronic hepatitis B A perspective in Asia.J.Hepatol, 4, 508-513 45 M d R A Eijk der A.A.van (2006) Hepatitis B virus HBV DNA levels and the management of HBV infected health care workers Journal of viral hepatitis, 13, 2-4 46 D G Pawlotsky JM, Hatzakis A (2008) Virologic monitoring of hepatitis B virus therapy in clinical trials and practice: recommendations for a standardized approach Gastroenterology, 134, 405–415 47 R J Bosch FX, Cléries R, (2005) Epidemiology of hepatocellular carcinoma Clin Liver Dis, 9, 191–211 48 V W S Chan, Wong, H L Y (2009) Severe acute exacerbation of chronic hepatitis B: A unique presentation of a common disease Journal of Gastroenterology and Hepatology, 24 (7), 1179-1186 49 S G M Lim, R.; Yuen, M F (2009) Prevention of hepatocellular carcinoma in hepatitis B virus infection Journal of Gastroenterology and Hepatology, 24 (8), 1352-1357 50 W S K Ayoub, E B (2011) Review article: current antiviral therapy of chronic hepatitis B Alimentary Pharmacology & Therapeutics, 34 (10), 1145-1158 51 Liang T, Loomba R (2007) Treatment of chronic hepatitis B Antivir Ther, 12, H33–H41 52 Nguyễn Thị Hiển Đào Đức Anh (2012) Thực hành quản lý phòng thí nghiệm, Nhà xuất Y học 53 Nguyễn Thị Hiển Đào Đức Anh (2012) Thực hành đảm bảo chất lượng phòng thí nghiệm vi sinh, Nhà xuất Y học 54 Trần Hữu Tâm (2012) Những vấn đề Đảm bảo chất lượng xét nghiệm Y khoa, Nhà xuất Y học, Hồ Chí Minh 55 Trần Diệu Linh, Nguyễn Thanh Thủy, Lê Lan Phương (2013) Tài liệu đào tạo Quản lý chất lượng phòng thí nghiệm, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương 56 A J Nolte FS, Cockerill F (2006) Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases Approved Guideline 2nd ed CLSI guideline MM3- A 57 H J John B (2012) Clinical diagnosis and management by laboratory methods New York: WB Saunders Company 58 B a T I I KH&CN (2011) Đánh giá phù hợp- Yêu cầu chung thử nghiệm thành thạo, Bộ KH&CN 59 Bộ y tế (2014) Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Vi sinh Y học 60 KH&CN, TCVN8245:2009 (2009) Mẫu chuẩn - nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận, Bộ KH&CN 61 TCVN8245:2009 (2009) Mẫu chuẩn: Nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận, TCVN 62 D Howerton, Krolak J.M., Manasterski A., (2010) Proficiency testing performance in US laboratories: results reported to the Centers for Medicare & Medicaid Services, 1994 through 2006 Arch Pathol Lab Med, 134 (5), 751-758 63 WHO/UNAIDS (1996) Guidelines for Organizing National External Quality Assessment Schemes for HIV Serology Testing WHO/UNAIDS, 64 I 13528 (2015) Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparison 65 I G 35 (2006) Reference materials -General and statistical principles for certification 66 Phạm Hồng Thắng, Hoàng Thị Thanh Hà (2014) Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết học HIV, Trường ĐH Quốc Gia Hà Nội 67 P M Henriksen GM, Nørgaard M, (2004) Minimally processed fresh frozen human reference sera: preparation, testing, and application to international external quality assurance Scand J Clin Lab Invest, 64, 293–308 68 Prijavudhi A (2010) Production and acquisition of control sample 69 K l H O ă zbek B (2010) Studies on the stability of various components of control serums prepared in lyophilized form 70 D L Nireesha GR, Sowmya C, (2013) Lyophilization/Freeze DryingAn Review Inter J Novel Trends in Pharm Sci 71 WHO/CLSI/CDC (2011) WHO Laboratory quality management system: handbook WHO Guidelines 72 Thông tư 21/2007/TT-BKHCN ngày 28/9/2007 Bộ trưởng Bộ Khoa học Công nghệ hướng dẫn xây dựng áp dụng tiêu chuẩn 73 S H Ranki M1, Zachoval R, (1995) Quantification of hepatitis B virus DNA over a wide range from serum for studying viral replicative activity in response to treatment and in recurrent infection Hepatology, 21(6), 1492-1499 74 W G J Saldanha, N Lelie, (2001) An international collaborative study to establish a World Health Organization international standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques The WHO Collaborative Study Group 75 Fundamentals for External Quality Assessment (EQA) International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) 76 W G Miller, Jones G.R., Horowitz G.L (2011) Proficiency testing/external quality assessment: current challenges and future directions Clin Chem, 57 (12), 1670-1680 77 CLIA Requirements for Analytical Quality 2014 78 R M Jacqueline F Fryer, Thomas Dougall, (2016) Collaborative Study to Evaluate the Proposed WHO th International Standard for Hepatitis B Virus (HBV) DNA for Nucleic Acid Amplification Technique (NAT) based assays National Institute for Biological Standards and Control 79 Phương pháp thống kê dùng thử nghiệm thành thạo so sánh liên phòng thí nghiệm TCVN 9596: 2013, ISO 13528: 2003 80 WHO/CLSI/CDC (2008) External quality assessment schemes for HIV, HBsAg and HCV serology WHO Guidelines 81 Công ty cổ phần công nghệ Việt Á Hướng dẫn sử dụng KIT Realtime PCR định lượng Hepatitis B virus 82 WHO (2004) World Health Organization Technical Report 924 83 Z S Meng S1, Li J, (2009) Nuclease-resistant double-stranded DNA controls or standards for hepatitis B virus nucleic acid amplification assays Virology Journal 84 Quantitative nucleic acid test for use on the cobas® 6800/8800 Systems 85 T C W Chiu, V P Luu, (2017) Precision of a multi-level, multi-analyte external assayed quality control for molecular diagnostics platforms monitoring viral load of bloodborne pathogens AACC 86 Quantitative Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus DNA PCRFluorescent Probing,QIAGEN 87 The PeliSpy Pro HBV DNA External Quality Control (EQC) 2009 CE-IVD 88 Nguyễn Thị Thế Yến, Nguyễn Thị Lan Phương, (1999) Nghiên cứu sản xuất vacxin mẫu chuẩn quốc gia bạch hầu- uống ván- ho gà, Viện vacxin chế phẩm sinh học 89 D W Wang LN, Shen ZY, (2007) Establishment of the first national standards for nucleic acid amplification technology assay for HBV DNA Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, 15(2), 107-110 90 Trần Hữu Tâm (2011) Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR HBV - HCV ... dựng quy trình sản xuất mẫu huyết dùng kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBVDNA Xây dựng tiêu chuẩn sở cho mẫu huyết đông khô sản xuất sử dụng kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBV -DNA. .. cho bệnh nhân Xuất phát từ vấn đề, xin tiến hành nghiên cứu đề tài: "Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết sử dụng chương trình kiểm tra chất lượng xét nghiệm định lượng HBV- DNA" , với mục... TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÙY NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG HBV- DNA Chuyên ngành : Hóa sinh Mã số :