Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết thanh có chứa kháng thể kháng toxocara để sử dụng ngoại kiểm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NHẬT GIANG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH C CHỨA HÁNG THỂ ĐỂ S HÁNG TOXOCARA DỤNG NGOẠI IỂM LUẬN VĂN THẠC SĨ Ỹ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NHẬT GIANG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH C CHỨA HÁNG THỂ ĐỂ S HÁNG TOXOCARA DỤNG NGOẠI IỂM Ngành: ỹ thuật xét nghiệm y học Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ Ỹ THUẬT Y HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN HOA HỌC: PGS TS BS VŨ QUANG HUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu chúng tơi Cơng trình nghiên cứu thực Trung tâm kiểm chuẩn chất lƣợng xét nghiệm, Đại học Y Dƣợc TPHCM Các số liệu hoàn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn NGUYỄN NHẬT GIANG MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Toxocara sp 1.2 Kỹ thuật chẩn đoán huyết miễn dịch học bệnh ký sinh trùng 12 1.3 Ngoại kiểm tra chất lƣợng xét nghiệm EQA 15 1.4 Sản xuất đánh giá mẫu huyết ngoại kiểm 19 1.5 Phƣơng pháp đông khô 21 1.6 Phƣơng pháp đông lạnh .26 1.7 Tình hình ngoại kiểm ngồi nƣớc 28 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Thiết kế nghiên cứu .30 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.3 Cỡ mẫu .30 2.4 Tiêu chuẩn chọn mẫu 31 2.5 Phƣơng pháp thu thập số liệu xử lý số liệu .31 2.6 Thiết bị, dụng cụ hoá chất 31 2.7 Phƣơng pháp tiến hành 33 2.8 Kiểm soát sai lệch 47 CHƢƠNG 3: ẾT QUẢ 48 3.1 Sản xuất mẫu huyết đặc hiệu Toxocara canis theo phƣơng pháp đông khô đông lạnh 48 3.2 Kết đánh giá tính đồng 51 3.3 Kết đánh giá độ ổn định 56 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 67 4.1 Sản xuất thử nghiệm mẫu huyết đặc hiệu Toxocara canis theo phƣơng pháp đông khô đông lạnh .67 4.2 Tính đồng mẫu sản xuất phƣơng pháp đông khô đông lạnh 69 4.3 Độ ổn định mẫu sản xuất phƣơng pháp đông khô đông lạnh theo thời gian nhiệt độ 70 ẾT LUẬN 74 IẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt BV : Bệnh viện BYT : Bộ Y tế ĐHYD : Đại Học Y Dƣợc TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TP HCM : Thành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh CDC : Centers for Disease Control and Prevention CLSI : Clinical & Laboratory Standards Institute CRM : Certified Reference Material ELISA : Enzyme-linked immunosorbent assay EQA : External Quality Assessment ISO : International Standard Organization QA : Quality Assurance QC : Quality Control RM : Reference Material TES : Toxocara excretory-secretory antigen VLM : visceral larva migrans OML : ocular larva migrans WB : Western blot WHO : World Health Organization DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Một đoạn ruột non chó với T canis trƣởng thành Hình 1.2 Chu kỳ phát triển Toxocara Hình 2.1 Thu thập sàng lọc mẫu 34 Hình 2.2 Dƣơng tính âm tính Toxocara canis với kỹ thuật WB 42 Hình 2.3 Q trình đơng lạnh đơng khơ mẫu huyết 43 Hình 2.4 Sơ đồ phƣơng pháp tiến hành 46 Hình 3.1 Kết xét nghiệm Western blot Toxocara canis .50 Hình 3.2 Nồng độ mẫu đơng khơ điều kiện bảo quản dài hạn .63 Hình 3.3 Nồng độ mẫu đông lạnh điều kiện bảo quản dài hạn 64 Hình 3.4 Nồng độ mẫu đông khô điều kiện vận chuyển .65 Hình 3.5 Nồng độ mẫu đơng lạnh điều kiện vận chuyển 66 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Nhiệt độ áp suất trình đơng khơ .27 Bảng 2.1 Máy móc thiết bị sử dụng .31 Bảng 2.2 Dụng cụ vật tƣ tiêu hao 32 Bảng 2.3 Hóa chất thuốc thử 33 Bảng 2.4 Hoá chất thuốc thử Toxocara IgG WB 39 Bảng 3.1 Kết đánh giá độ đặc hiệu kháng thể kháng Toxocara canis 49 Bảng 3.2 Kết đánh giá tính đồng mẫu đơng khơ 52 Bảng 3.3 Kết phân tích thống kê đánh giá tính đồng mẫu đơng khơ 53 Bảng 3.4 Kết đánh giá tính đồng mẫu đông lạnh 54 Bảng 3.5 Kết phân tích thống kê đánh giá tính đồng mẫu đông lạnh 55 Bảng 3.6 Kết so sánh tính đồng mẫu sản xuất 56 Bảng 3.7 Kết độ ổn định mẫu đông khô bảo quản -80°C 57 Bảng 3.8 Kết độ ổn định mẫu đông khô bảo quản – 8°C 58 Bảng 3.9 Kết độ ổn định mẫu đông lạnh bảo quản -80°C 59 Bảng 3.10 Kết độ ổn định mẫu đông lạnh bảo quản – 8°C 60 Bảng 3.11 Kết độ ổn định mẫu đông khô nhiệt độ 30°C 61 Bảng 3.12 Kết độ ổn định mẫu đông lạnh nhiệt độ 30°C 62 ĐẶT VẤN ĐỀ Phòng xét nghiệm hệ thống phức tạp liên quan đến nhiều ngƣời bao gồm nhiều hoạt động sản phẩm kết xét nghiệm Kết xét nghiệm đƣợc sử dụng rộng rãi lâm sàng hệ thống sức khoẻ cộng đồng nên địi hỏi phải xác Nếu kết xét nghiệm khơng xác, hậu là: điều trị khơng cần thiết, biến chứng điều trị, cung cấp điều trị khơng thích hợp, chẩn đoán xác định bị chậm trễ… Những hậu làm tăng thời gian chi phí điều trị Vì vậy, đảm bảo chất lƣợng kết xét nghiệm cần thiết vấn đề đáng quan tâm phòng xét nghiệm Theo khuyến cáo CLSI, CDC, WHO [46], [47] thông tƣ hƣớng dẫn thực quản lý chất lƣợng xét nghiệm sở khám bệnh, chữa bệnh Bộ Y tế [3] cần có hệ thống quản lý chất lƣợng, tiến hành nội kiểm tra đặc biệt ngoại kiểm tra chất lƣợng xét nghiệm Ngoại kiểm công cụ giúp phịng xét nghiệm kiểm sốt chất lƣợng xét nghiệm cách có hệ thống; cơng cụ minh chứng cho hồn thiện hệ thống chất lƣợng phịng xét nghiệm, góp phần khơng nhỏ việc chẩn đoán điều trị cho bệnh nhân [47] Ngoài ra, ngoại kiểm tra chất lƣợng tạo mạng lƣới giao tiếp để tăng cƣờng mạng lƣới phòng xét nghiệm quốc gia, bƣớc thực lộ trình liên thơng kết xét nghiệm phạm vi toàn quốc theo định số 316/QĐ-TTg Thủ tƣớng Chính Phủ [17] phê duyệt Đề án tăng cƣờng lực hệ thống quản lý chất lƣợng xét nghiệm y học giai đoạn 2016 – 2025 Ký sinh trùng giun đũa chó mèo, tên khoa học Toxocara sp loại ký sinh trùng ký sinh động vật, lây truyền sang ngƣời [23], [24] Việc tiếp xúc thƣờng xuyên với chó, mèo dẫn đến nguy nhiễm bệnh cao [26], [37], [41] Bệnh giun đũa chó, mèo ngƣời có triệu chứng lâm sàng khơng đặc hiệu; khó tìm thấy ký sinh trùng cách trực tiếp nên áp dụng chẩn đoán miễn dịch phù hợp cần thiết Kỹ thuật miễn dịch đƣợc ứng dụng nhiều chẩn đoán Toxocara canis kỹ thuật ELISA [27] Ngoại kiểm tra chất lƣợng xét nghiệm đƣợc triển khai rộng rãi lĩnh vực xét nghiệm: hoá sinh, huyết học, vi sinh… Tuy nhiên, ngoại kiểm tra chất lƣợng xét nghiệm ký sinh trùng, đặc biệt huyết chẩn đoán ký trùng có huyết chẩn đốn Toxocara canis cịn nhiều hạn chế: nay, chƣa có cơng trình đƣợc cơng bố mẫu ngoại kiểm ký sinh trùng nƣớc Trong tình hình đó, việc sản xuất mẫu huyết sử dụng ngoại kiểm ký sinh trùng cần thiết Các mẫu sử dụng ngoại kiểm thƣờng đƣợc sản xuất nhiều phƣơng pháp, phƣơng pháp đông khô đông lạnh hai phƣơng pháp thƣờng đƣợc sử dụng Với lý trên, nhằm nâng cao hệ thống quản lý chất lƣợng; đảm bảo chất lƣợng xét nghiệm huyết chẩn đốn Toxocara canis, chúng tơi tiến hành thực đề tài Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể kháng Toxocara để sử dụng ngoại kiểm với mục tiêu sau: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Sản xuất thử nghiệm mẫu huyết đặc hiệu Toxocara canis theo phƣơng pháp đông khô đơng lạnh Đánh giá tính đồng độ ổn định mẫu huyết sản xuất theo phƣơng pháp đông khô đông lạnh 73 mẫu đông khô đạt độ ổn định thời gian dài bảo quản nhiệt độ phòng, trong nghiên cứu này, mẫu đông khô bảo quản nhiệt -80°C đạt độ ổn định tháng, sau tháng mẫu khơng cịn ổn định; bảo quản nhiệt độ – 8°C, mẫu không ổn định thời gian tháng Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 74 ẾT LUẬN Đã sản xuất đƣợc mẫu huyết có chứa kháng thể đặc hiệu kháng Toxocara canis xác định kỹ thuật Western blot theo phƣơng pháp đông khô đông lạnh để sử dụng ngoại kiểm: - Lô thứ nhất: mẫu sản xuất theo phƣơng pháp đơng khơ; lơ mẫu có 100 mẫu, mẫu tích trƣớc đơng khơ 100µl huyết thanh, nồng độ ban đầu 31,012 ± 2,280 NTU - Lô thứ hai: mẫu sản xuất theo phƣơng pháp đơng lạnh; lơ mẫu có 100 mẫu, mẫu tích trƣớc đơng lạnh 100µl, nồng độ ban đầu 27,184 ± 1,988 NTU Mẫu sản xuất theo phƣơng pháp đơng khơ đơng lạnh đạt tính đồng độ ổn định: mẫu sản xuất phƣơng pháp đơng lạnh có tính đồng độ ổn định cao mẫu sản xuất phƣơng pháp đông khô Các mẫu sản xuất đƣợc bảo quản nhiệt độ -80°C có độ ổn định cao mẫu bảo quản nhiệt độ – 8°C - Độ ổn định dài hạn: bảo quản nhiệt độ -80°C, mẫu sản xuất phƣơng pháp đông lạnh ổn định vòng ba tháng, mẫu sản xuất phƣơng pháp đông khô ổn định tháng - Độ ổn định ngắn hạn: với giả định nhiệt độ trình vận chuyển 30°C, mẫu sản xuất phƣơng pháp đông khô đông lạnh ổn định vịng ngày Tn thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 75 IẾN NGHỊ Từ kết đề tài nghiên cứu, đề xuất số kiến nghị nhƣ sau: Nghiên cứu thêm chất bảo quản vào nguyên liệu sản xuất để tăng thời gian ổn định mẫu dài Nghiên cứu điều kiện sản xuất bảo quản mẫu đơng khơ, điều chỉnh quy trình sản xuất mẫu phƣơng pháp đông khô để tăng chất lƣợng mẫu sản xuất Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn TÀI LIỆU THAM HẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế (2007), Quyết định 43/2007/QĐ-BYT: Quyết định việc ban hành quản lý chất thải Y tế, tr 3-13 Bộ Y Tế (2011), Thông tư 43/2011/TT-BYT: Quy định chế độ quản lý mẫu bệnh phẩm bệnh truyền nhiễm, tr.1-3 Bộ Y Tế (2013), Thông tư 01 Hướng dấn thực quản lý chất lượng sở khám chữa bệnh, tr 1-2 Trần Thị Kim Dung, Trần Phủ Mạnh Siêu (2009), Bệnh giun lươn giun đũa chó mèo, Nhà xuất Y học, TPHCM, tr.82-151 Đỗ Văn Dũng (2001), Căn thống kê y học, Nhà xuất TPHCM, tr 32-40 Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hƣơng (2009), Miễn dịch học ứng dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 132-153 Trần Vinh Hiển, Trần Thị Kim Dung (2008), Ký sinh trùng liên quan thú người, Nhà xuất Y học, TPHCM, tr 73-80 Vũ Quang Huy, Nguyễn Văn Hồng Sơn (2017), "Quy trình sản xuất thử nghiệm mẫu ngoại kiểm định lƣợng HBV - DNA" Tạp chí Y học TPHCM, 21(5), tr.216-220 Vũ Quang Huy, Nguyễn Thị Quỳnh Nga (2017), "Xây dựng quy trình thử nghiệm sản xuất mẫu huyết ứng dụng ngoại kiểm hố sinh" Tạp chí Y học TPHCM, 21(5), tr.210-214 10 Lê Hữu Khƣơng (2012), Ký sinh trùng thú y, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 94, tr 130-135 11 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 7366:2011 - ISO Guide 34:2009 (2011), Yêu cầu chung lực nhà sản xuất mẫu chuẩn, Hà Nội, tr 3-15 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 12 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 7777-1:2008 - ISO/IEC Guide 43-1:1997 (1997), Thử nghiệm thành thạo so sánh liên phịng thí nghiệm lần 1: Xây dựng triển khai chương trình thử nghiệm thành thạo, Hà Nội, tr 4-10 13 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 8245 (2009), Mẫu chuẩn - Nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận, Hà Nội, tr 3-10, tr 2023 14 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN ISO 15189:2014 (2014), Phịng thí nghiệm Y tế - u cầu chung lực chất lượng, Hà Nội, tr 32-33 15 Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN ISO/IEC 17043:2011 - ISO/IEC 17043:2010 (2011), Đánh giá phù hợp - Yêu cầu chung thử nghiệm thành thạo, Hà Nội, tr 9-11 16 Khuất Hữu Thanh (2006), Kỹ thuật gen Nguyên lý ứng dụng, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 183 17 Thủ Tƣớng Chính Phủ (2016), Quyết định phê duyệt đề án tăng cường lực quản lý hệ thống quản lý chất lượng xét nghiệm y học giai đoạn 2016 - 2015, tr 18 Mai Thị Trong (2013), "Tình hình nhiễm ký sinh trùng cán chiến sĩ đến khám điều trị bệnh viện 30-4 năm 2011-2012", Tạp chí Y học TPHCM, 17(1), tr 157-159 19 Lê Thị Xuân (2008) Ký sinh trùng thực hành, Nhà xuất Giáo dục, TPHCM, tr 82-88 20 ISO 13528:2015 (2015), Statistical Methods For Use In Proficiency Testing By Interlaboratory Comparison, 44-51 21 Zhang X J., Lv Q., Min L H., Cao X H., Li X J (2017), "Effect of developmental stage of embryos at freezing on live birth outcomes after frozen embryo transfer" Cryo Letters, 38 (5), 399-406 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 22 Ariyaratne A., Szabo E K., Bowron J., Finney C A M (2018), "Increases in helminth-induced IL-21 protein levels disappear upon sample freezing" Cytokine, 108, 179-181 23 Ahn S J., Ryoo N K., Woo S J (2014), "Ocular toxocariasis: clinical features, diagnosis, treatment, and prevention", Asia Pac Allergy, (3), 134-141 24 Cdc (2013) Toxocariasis, https://www.cdc.gov/parasites/toxocariasis/index.html, truy cập ngày 28/6/2018 25 Collier S., Manser M., Chiodini P L (2010), "External quality assessment scheme for parasite serology; a review of the scheme design and performance" J Clin Pathol, 63 (5), 441-444 26 Choobineh M., Mikaeili F., Sadjjadi S M., Ebrahimi S., Iranmanesh S (2018), "Molecular characterization of Toxocara spp eggs isolated from public parks and playgrounds in Shiraz, Iran" J Helminthol, 1-7 27 Despommier D (2003), "Toxocariasis: clinical aspects, epidemiology, medical ecology, and molecular aspects" Clin Microbiol Rev, 16 (2), 265-272 28 Fillaux J., Magnaval J F (2013), "Laboratory diagnosis of human toxocariasis" Veterinary Parasitology, 193 (4), 327-336 29 Gavignet Bộatrice, Piarroux Renaud, Aubin Franỗois, Millon Laurence, Humbert Philippe (2008), "Cutaneous manifestations of human toxocariasis" Journal of the American Academy of Dermatology, 59 (6), 1031-1042 30 Iddawela D., Ehambaram K., Atapattu D., Pethiyagoda K., Bandara L (2017), "Frequency of Toxocariasis among Patients Clinically Suspected Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn to Have Visceral Toxocariasis: A Retrospective Descriptive Study in Sri Lanka", J Parasitol Res, 2017, 1-6 31 Iddawela D., Ehambaram K., Bandara P (2017), "Prevalence of Toxocara antibodies among patients clinically suspected to have ocular toxocariasis: A retrospective descriptive study in Sri Lanka", BMC Ophthalmol, 17 (1), 50 32 IFFC - Fundamentals for External Quality Assessment (EQA), Guidelines for Improving Analytical Quality by Establishing and Managing EQA schemes, 2-7 33 Institute for International Cooperation in Animal Biologics (2018) Toxocariasis, http://www.cfsph.iastate.edu/DiseaseInfo/disease.php?name=toxocariasi s&lang=en, truy cập ngày 29/6/2018 34 Lunan Wang Kuo Zhang, Guigao Lin, Yu Sun, Rui Zhang, Jiehong Xie, Jinming Li (2015), "Results of the National External Quality Assessment for Toxoplasmosis Serological Testing in China", PLOS one, 10(6), 16 35 Khademvatan Shahram, Abdizadeh Rahman, Tavalla Mahdi (2014), "Molecular characterization of Toxocara spp from soil of public areas in Ahvaz southwestern Iran", Acta Tropica, 135, 50-54 36 Liu E W., Chastain H M., Shin S H., Wiegand R E., Kruszon-Moran D., Handali S., et al (2018), "Seroprevalence of Antibodies to Toxocara Species in the United States and Associated Risk Factors, 2011-2014" Clin Infect Dis, 66 (2), 206-212 37 Lötsc Felix, Vingerling Rieke, Spijker Rene, Grobusch Martin Peter (2017), "Toxocariasis in humans in Africa – A systematic review", Travel Medicine and Infectious Disease, 20, 15-25 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 38 Ma Y., Wu X., Zhang Q., Giovanni V., Meng X (2018), "Key composition optimization of meat processed protein source by vacuum freeze-drying technology", Saudi J Biol Sci, 25 (4), 724-732 39 Maleki Bahman, Khorshidi Ali, Gorgipour Mohammad, Mirzapour Aliyar, Majidiani Hamidreza, Foroutan Masoud (2017), "Prevalence of Toxocara spp eggs in soil of public areas in Iran: A systematic review and meta-analysis" Alexandria Journal of Medicine, 54(2), 97-101 40 Nguyen H H., Vo D T., Thai T T., Le T T., Le T D., Hoang N S (2017), "The 33.1 kDa Excretory/secretory Protein Produced by Toxocara canis Larvae Serves as a Potential Common Biomarker for Serodiagnosis of Toxocariasis in Paratenic Animals and Human", Iran J Parasitol, 12 (1), 69-82 41 Otero David, Alho Ana M., Nijsse Rolf, Roelfsemajeroen, Overgaauw Paul, Madeira De Carvalho Luís (2018), Environmental contamination with Toxocara spp eggs in public parks and playground sandpits of Greater Lisbon, Portugal, Journal of Infection and Public Health, 11 (1), 94-98 42 Roldan W H., Espinoza Y A (2009), "Evaluation of an enzyme-linked immunoelectrotransfer blot test for the confirmatory serodiagnosis of human toxocariasis", Mem Inst Oswaldo Cruz, 104 (3), 411-418 43 Song J G., Lee S H., Han H K (2016), "Biophysical evaluation of aminoclay as an effective protectant for protein stabilization during freeze-drying and storage", Int J Nanomedicine, 11, 6609-6619 44 Sowemimo O A., Lee Y L., Asaolu S O., Chuang T W., Akinwale O P., Badejoko B O., et al (2017), "Seroepidemiological study and associated risk factors of Toxocara canis infection among preschool children in Osun State, Nigeria", Acta Trop, 173, 85-89 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 45 Sudhakar N R., Samanta S., Sahu S., Raina O K., Gupta S C., Goswami T K., et al (2014), "Characterization of excretory-secretory antigens of adult Toxocara canis by western blotting", J Parasit Dis, 38 (2), 166169 46 Overview of External Quality Assessment (EQA), http://www.who.int/ihr/training/laboratory_quality/10_b_eqa_contents.p df, truy cập ngày 29/6/2018 47 World Health Organization (2011), Laboratory quality management system: handbook, Geneva: World Health Organization, 111-123 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC Phụ lục 01: Biểu mẫu theo dõi nhiệt độ thiết bị TRUNG TÂM IỂM CHUẨN CHẤT LƢỢNG XÉT NGHIỆM Y HỌC Địa chỉ: 131 Nguyễn Chí Thanh, Phƣờng 9, Quận 5, TP Hồ Chí Minh Điệnthoại: (08) 38531058 Email: trungtamkiemchuan@gmail.com * Fax: (08) 38531049 * Web:http://qccump.com BẢNG THEO DÕI NHIỆT ĐỘ Tháng… năm …… T n thiết bị: Phòng: hoảng nhiệt độ chấp nhận : Ngày Nhiệt độ 9h 15h Ký tên Ngƣời thực Ngƣời tổng hợp Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Ghi Ngƣời giám sát Phụ lục 02: ết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh đông khô đánh giá đồng Descriptives GTĐL N ĐL1 ĐL2 ĐL3 ĐL4 ĐL5 ĐL6 ĐL7 ĐL8 ĐL9 ĐL10 Total Mean 2 2 2 2 2 20 Std Deviation 27,59000 26,20000 27,49150 27,74600 27,43050 27,13200 26,23350 26,70550 27,46650 27,84650 27,18420 Std Error 1,407142 ,995000 ,353553 ,250000 1,911310 1,351500 1,252993 ,886000 ,870448 ,615500 ,345068 ,244000 ,212839 ,150500 ,474469 ,335500 1,689278 1,194500 ,965201 ,682500 ,994108 ,222289 95% Confidence Interval for Minimum Maximum Mean Lower Bound Upper Bound 14,94733 40,23267 26,595 28,585 23,02345 29,37655 25,950 26,450 10,31906 44,66394 26,140 28,843 16,48830 39,00370 26,860 28,632 19,60983 35,25117 26,815 28,046 24,03169 30,23231 26,888 27,376 24,32122 28,14578 26,083 26,384 22,44257 30,96843 26,370 27,041 12,28894 42,64406 26,272 28,661 19,17452 36,51848 27,164 28,529 26,71894 27,64946 25,950 28,843 ANOVA GTĐL Between Groups Within Groups Sum of Squares 6,516 12,261 Total 10 18,777 Mean Square ,724 1,226 F ,591 Sig ,779 19 Descriptives GTĐK N DK1 DK2 DK3 DK4 DK5 DK6 DK7 DK8 DK9 DK10 Total Df Mean 2 2 2 2 2 20 30,72900 31,27800 31,95000 30,68700 31,36250 31,88350 32,57850 29,69450 29,64700 30,31200 31,01220 Std Deviation Std Error ,189505 ,134000 ,196576 ,139000 ,213546 ,151000 ,318198 ,225000 ,130815 ,092500 2,126270 1,503500 ,437699 ,309500 ,058690 ,041500 1,605132 1,135000 ,165463 ,117000 1,139752 ,254856 95% Confidence Interval for Minimum Maximum Mean Lower Bound Upper Bound 29,02637 32,43163 30,595 30,863 29,51184 33,04416 31,139 31,417 30,03136 33,86864 31,799 32,101 27,82810 33,54590 30,462 30,912 30,18718 32,53782 31,270 31,455 12,77972 50,98728 30,380 33,387 28,64593 36,51107 32,269 32,888 29,16719 30,22181 29,653 29,736 15,22546 44,06854 28,512 30,782 28,82537 31,79863 30,195 30,429 30,47878 31,54562 28,512 33,387 ANOVA GTĐK Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 17,123 7,558 24,682 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Df 10 19 Mean Square 1,903 ,756 F 2,517 Sig ,083 Phụ lục 03: ết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông khô bảo quản -80°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng SSDK TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed SSDK Group Statistics Mean Std Deviation Std Error Mean 20 31,01220 1,139752 ,254856 31,86533 1,410578 ,575866 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper N ,543 TS BANDAU SAU ,006 - ,300870 2,007136 24 ,140 -,853133 ,559137 1,355 7,079 ,217 -,853133 ,629741 2,338873 ,632606 Group Statistics Mean 20 31,01220 28,47883 N Levene's Test for Equality of Variances F Sig Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed 1,526 ,468 Std Deviation 1,139752 1,136339 Std Error Mean ,254856 ,463908 Independent Samples Test t-test for Equality of Means t ,939 4,778 df Sig Mean Std Error (2Difference Difference tailed) 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 24 ,000 2,533367 ,530195 1,439098 3,627635 4,786 8,275 ,001 2,533367 ,529304 1,319817 3,746916 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục 04: ết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông khô bảo quản 2-8°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng SSDK TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed SSDK TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDK Equal variances not assumed Group Statistics Mean Std Deviation Std Error Mean 20 31,01220 1,139752 ,254856 28,85300 1,172992 ,478872 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper N ,017 ,896 4,045 24 ,000 2,159200 ,533786 1,057520 3,260880 3,980 8,063 ,004 2,159200 ,542467 Group Statistics N Mean Std Deviation 20 31,01220 1,139752 25,42967 ,711749 Independent Samples Test Levene's t-test for Equality of Means Test for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error (2Difference Difference tailed) ,887 ,356 11,263 ,909976 3,408424 Std Error Mean ,254856 ,290570 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper 24 ,000 5,582533 ,495668 4,559524 6,605543 14,444 13,543 ,000 5,582533 ,386501 4,750938 6,414128 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục 05: ết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh bảo quản -80°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng SSDL TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed SSDL TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Group Statistics Mean Std Deviation Std Error Mean 20 27,18420 ,994108 ,222289 27,30117 ,320278 ,130753 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper N 8,044 ,009 ,280 - ,744307 ,978240 24 ,782 -,116967 ,417304 ,454 23,659 ,654 -,116967 ,257893 ,649638 ,415704 Group Statistics N Mean Std Deviation Std Error Mean 20 27,18420 ,994108 ,222289 26,79450 ,314117 ,128238 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper 7,862 24 ,359 ,389700 ,417093 1,250537 ,471137 1,519 23,753 ,142 ,389700 ,256627 ,140243 ,010 ,934 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ,919643 Phụ lục 6: ết Toxocara canis IgG ELISA mẫu đông lạnh bảo quản 2-8°C đánh giá ổn định sau tháng sau tháng SSDL TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed SSDL TS BANDAU SAU Equal variances assumed SSDL Equal variances not assumed Group Statistics Mean Std Deviation Std Error Mean 20 27,18420 ,994108 ,222289 26,07800 ,900469 ,367615 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper N ,469 ,500 2,437 24 ,023 1,106200 ,453997 ,169197 2,043203 2,575 9,008 ,030 1,106200 ,429597 ,134515 2,077885 Group Statistics Mean Std Deviation Std Error Mean 20 27,18420 ,994108 ,222289 24,55633 1,096784 ,447760 Independent Samples Test Levene's Test t-test for Equality of Means for Equality of Variances F Sig t df Sig Mean Std Error 95% Confidence (2Difference Difference Interval of the tailed) Difference Lower Upper N ,027 ,871 5,555 24 ,000 2,627867 ,473087 1,651463 3,604271 5,257 7,646 ,001 2,627867 ,499902 1,465738 3,789996 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... nghiệm huyết chẩn đoán Toxocara canis, tiến hành thực đề tài Nghiên cứu quy trình sản xuất mẫu huyết có chứa kháng thể kháng Toxocara để sử dụng ngoại kiểm với mục tiêu sau: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Sản. .. trùng có huyết chẩn đốn Toxocara canis cịn nhiều hạn chế: nay, chƣa có cơng trình đƣợc công bố mẫu ngoại kiểm ký sinh trùng nƣớc Trong tình hình đó, việc sản xuất mẫu huyết sử dụng ngoại kiểm. .. HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NHẬT GIANG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH C CHỨA HÁNG THỂ ĐỂ S HÁNG TOXOCARA DỤNG NGOẠI IỂM Ngành: ỹ thuật xét nghiệm y học Mã số: 8720601