Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin vô hoạt tụ huyết trùng trâu bò nhũ dầu chủng t2, t4 tại xí nghiệp thuốc thú y trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - NGUYỄN VĂN HƯNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN VƠ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU BỊ NHŨ DẦU CHỦNG T2, T4 TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - NGUYỄN VĂN HƯNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN VƠ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU BÒ NHŨ DẦU CHỦNG T2, T4 TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG KHOA HỌC : TS VŨ NHƯ QUÁN TS NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI, NĂM 2013 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi trực tiếp thực với cố vấn giúp ñỡ thầy: TS Vũ Như Quán TS Nguyễn Bá Hiên giảng viên Khoa Thú y – Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội Các số liệu, hình ảnh kết thu ñược luận văn hồn tồn trung thực, chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu chưa sử dụng để bảo vệ học vị khác Tơi xin cam đoan thơng tin tài liệu có liên quan trích dẫn xác Hà Nội, Ngày 15 tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn NGUYỄN VĂN HƯNG Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành luận văn nỗ lực thân, tơi cịn nhận quan tâm giúp đỡ, động viên chia sẻ gia đình, bạn đồng nghiệp, bảo tận tình nhiều cá nhân tập thể thầy, cô giảng viên Bộ môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm Khoa Thú y Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội Qua cho tơi bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc ñến thầy: TS Vũ Như Quán TS Nguyễn Bá Hiên, người ñã trực tiếp bảo, giúp ñỡ suốt q trình nghiên cứu, thực đề tài Cũng nhân cho tơi gửi lời cảm ơn đến ban lãnh đạo Xí nghiệp thuốc Thú y Trung Ương Phịng ban, Phân xưởng Xí nghiệp, bạn bè ñồng nghiệp ñã tạo ñiều kiện thuận lợi để tơi hồn thành q trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn tới tất quan tâm giúp đỡ q báu Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, Ngày 15 tháng 10 năm 2013 Tác giả luận văn NGUYỄN VĂN HƯNG Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix MỞ ðẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ðặc tính chung vi khuẩn P.multocida 1.1.1 ðặc điểm hình thái 1.1.2 ðặc tính ni cấy 1.1.3 ðặc tính sinh hóa 1.2 Kháng nguyên P multocida 1.2.1 Kháng nguyên giáp mô (K) 1.2.2 Kháng nguyên thân (O) 1.2.3 Kháng nguyên Protein 1.3 Vacxin sử dụng Vacxin phịng bệnh cho động vật 1.3.1 Khái niệm vacxin 1.3.2 ðặc tính vacxin 1.3.3 Thành phần vacxin 11 1.3.4 Yêu cầu vacxin 13 1.3.5 Phân loại vacxin 14 1.3.6 Những phản ứng phụ không mong muốn sử dụng vacxin 18 1.4 Sản xuất kiểm nghiệm vacxin 19 1.4.1 Sản xuất vacxin 19 1.4.2 Kiểm nghiệm vacxin 19 1.5 Bệnh Tụ huyết trùng trâu bò 22 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 1.5.1 Lịch sử bệnh 22 1.5.2 Nguyên nhân bệnh 22 1.5.3 Phân bố ñịa lý mùa vụ 22 1.5.4 ðộng vật cảm thụ 24 1.5.5 Cách phát sinh lây lan bệnh 25 1.5.6 Triệu chứng bệnh tích 25 1.5.7 Thiệt hại kinh tế bệnh Tụ huyết trùng trâu bò gây 27 1.5.8 Phòng trị bệnh Tụ huyết trùng trâu bò 28 1.6 Vài nét giới thiệu Xí nghiệp Thuốc thú y Trung Ương 29 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Nội dung nghiên cứu 31 2.1.1 Xây dựng quy trình sản xuất kháng nguyên 31 2.1.2 Xây dựng quy trình tạo nhũ 31 2.3.3 Kiểm nghiệm tiêu vacxin theo Tiêu chuẩn ngành 31 2.2 ðối tượng nghiên cứu 31 2.3 ðịa ñiểm nghiên cứu 31 2.4 Nguyên liệu 31 2.5 Phương pháp nghiên cứu 32 2.5.1 Phương pháp ni cấy vi khuẩn để sản xuất vacxin 32 2.5.2 Phương pháp kiểm tra khiết pha loãng canh trùng ñếm số xác ñịnh số lượng vi khuẩn 32 2.5.3 Phương pháp kiểm nghiệm vacxin theo Tiêu chuẩn ngành 34 2.5.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 37 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Kết xây dựng quy trình sản xuất kháng nguyên 38 3.1.1 Kết kiểm tra khiết giống đếm số vi khuẩn mơi trường tăng sinh 3.1.2 38 Kết nhân giống sản xuất lần nồi Fermentor 10 lít (nhân giống nhỏ) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 40 v 3.1.3 Kết kiểm tra khiết ñếm số lượng vi khuẩn nồi lên men 100 lít (sản xuất vacxin) 42 3.1.4 Vô hoạt canh trùng formol kết kiểm tra vô trùng sau vô hoạt 46 3.2 Kết xây dựng quy trình tạo nhũ 47 3.2.1 Sự thay ñổi chất bổ trợ từ keo phèn sang nhũ dầu 48 3.2.2 Các bước tạo nhũ (W/O: nước dầu) 49 3.3 Kết kiểm nghiệm vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng trâu bò nhũ dầu theo Tiêu chuẩn ngành 51 3.3.1 Kết kiểm tra vô trùng lơ vacxin vơ hoạt THT trâu bị nhũ dầu 52 3.3.2 Kết kiểm tra an toàn lơ vacxin vơ hoạt THT trâu bị nhũ dầu 53 3.3.3 Kết kiểm tra hiệu lực lơ vacxin THT trâu bị nhũ dầu 57 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 60 Kết luận 60 ðề nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cð Cường ñộc Cs Cộng DD Dưới da ðC ðối chứng MD Miễn dịch KT Kiểm tra MLD Minimum Lethal Dose (Liều gây chết tối thiểu) ND Nhũ dầu NTG Nước thịt gan NPN Nitơ phi protein OIE Office International des Epizootie (Tổ chức dịch tễ giới) P multocida Pasteurella multocida TSA Tryptone Soya Agar THT Tụ huyết trùng TK Thuần khiết TCN Tiêu chuẩn ngành VK Vi khuẩn YPC Yeast extract pepton L-cystine Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BẢNG STT 3.1 Tên bảng Trang Kết kiểm tra khiết ñếm số lượng vi khuẩn môi trường tăng sinh lô giống 3.2 Kết kiểm tra khiết ñếm số lượng vi khuẩn lô giống sản xuất nồi Fermentor 10 lít (nhân giống lần 2) 33 39 41 Kết kiểm tra khiết ñếm số lượng vi khuẩn lô vacxin nồi Fermentor 100 lít 45 3.4 Kết kiểm tra vô trùng canh trùng sau vô hoạt formol 47 3.5 Kết vô trùng bán thành phẩm sau phối trộn với nhũ dầu 50 3.6 Kết pha loãng canh trùng phối trộn với chất bổ trợ nhũ dầu 51 3.7 Kết kiểm tra vô trùng tỷ lệ vô trùng lô vacxin 53 3.8 Kết kiểm tra an toàn lơ vacxin THT trâu bị bê 54 3.9 Kết kiểm tra an tồn lơ vacxin THT trâu bị nhũ dầu thỏ 55 3.10 Kết kiểm tra an tồn lơ vacxin THT trâu bị chuột bạch 56 3.11 Kết kiểm tra hiệu lực lô vacxin Tụ huyết trùng trâu bị thỏ 58 Kết kiểm tra hiệu lực lơ vacxin THT trâu bị ñối với chuột bạch 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii 3.12 DANH MỤC HÌNH STT 3.1 Tên hình Trang Mật độ vi khuẩn Tụ huyết trùng trâu bị mơi trường ni cấy thời điểm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 43 ix KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ Kết luận Căn vào kết đạt q trình thực đề tài chúng tơi có số kết luận sau đây: Chủng vi khuẩn Tụ huyết trùng trâu bò T2, T4 Ban giống Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương cung cấp, ñạt tiêu chuẩn giống gốc ñể sản xuất vacxin - Giống sản xuất ñược nhân lên hai lần từ giống gốc: qua môi trường tăng sinh (nhân giống lần 1) nồi fermentor 10 lít (nhân giống lần 2) - Ni cấy sản xuất vacxin mơi trường thích hợp fermentor dung tích 100 lít Thu hoạch canh trùng vacxin thời điểm sau ni cấy, đảm bảo nồng độ kháng nguyên ñạt từ 24 ñến 25 tỷ VK/ml - Bất hoạt vi khuẩn canh trùng nuôi cấy formol có nồng độ 36%, với tỷ lệ sử dụng 0,2%, 14 – 16 giờ, ñây hàm lượng formol thấp để vơ hoạt hồn tồn vacxin Sử dụng chất bổ trợ nhũ dầu ISA 50V2 (của hãng Seppic), phối trộn với kháng nguyên theo tỷ lệ 1/1 ta thu vacxin vơ hoạt tụ huyết trùng trâu bò nhũ dầu bán thành phẩm Qua q trình kiểm nghiệm lơ vacxin sản xuất thử nghiệm theo quy trình với Tiêu chuẩn kiểm nghiệm ngành thấy: - Vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng trâu bị nhũ dầu chủng T1 T2 đạt tiêu về: khiết, vơ trùng, an tồn hiệu lực - Sau ñược thử nghiệm vào thực tế sản xuất sử dụng vacxin thay hoàn toàn cho vacxin Tụ huyết trùng keo phèn để phịng bệnh cho trâu bị nước ta ðề nghị ðể Xí nghiệp tiến hành triển khai sản xuất vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng trâu bò nhũ dầu thay cho sản phẩm vacxin keo phèn trước đây, chúng tơi xin đề nghị: Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 60 - Tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện quy trình sản xuất - Thực tiêm thử nghiệm kiểm tra hiệu lực vacxin thực ñịa diện rộng - Nghiên cứu xác ñịnh ñộ dài miễn dịch ñộ dài bảo quản vacxin Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT ðặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Kim Dung, Nguyễn Thị Hà Lê Bá Hiệp (2010) Khảo sát lưu hành vi khuẩn P multocida gia súc số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam KHKT Thú y, tập XVII - số Phạm Văn Chức (1994) Bệnh Tụ huyết trùng trâu bị Báo cáo khoa học Cơng ty thuốc thú y Trung Ương Sa ðình Chiến (2001) Nghiên cứu bệnh Tụ huyết trùng Sơn La, số ñạc tính P multocida phân lập ñược, biện pháp phịng trị Luận án tiến sỹ nơng nghiệp Hà Nội ðỗ Tuấn Cương, Tơ Long Thành, ðặng Vũ Hồng Trương Văn Dung (2004) Thiết lập phương án miễn dịch bệnh lý chân đốn bệnh Tụ huyết trùng trâu bò KHKT Thú y, tập XI – số 1, tr 46 – 52 Phan ðình ðỗ Trịnh Văn Thịnh (1958) Bệnh truyền nhiễm gia súc (những bệnh thường có Việt Nam), NXB Nông thôn Hà Nội ðỗ Văn ðược (1998) Vài nét tình hình dịch bệnh ñàn tâu bò Lạng Sơn năm 1991 – 1996 KHKT Thú y, tập V- số 4, tr 92 – 93 Bùi Quý Huy (1998) Một số ñặc ñiểm bệnh Tụ huyết trùng trâu bò Việt Nam nhữn năm qua KHKT Thú y, tập V – số 1, Hội Thú y Việt Nam, tr 94 – 95 Phùng Duy Hồng Hà (1990) Nghiên cứu sản xuất vacxin Tụ huyết trùng gia cầm nhũ dầu Tạp chí KHKT Nông nghiệp – 4, tr 168 - 172 Cao Văn Hồng (2002) Nghiên cứu ñặc ñiểm dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn ðăk Lăk số biện pháp phòng trị Luận án tiến sỹ nông nghiệp, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội Trần Xuân Hạnh, Kirsty M Townsend, Ian Wilkie, Alan J Frost, Tơ Thị Phấn Nguyễn Tiến Trung (2002) Giám định vi khuẩn P multocida serotype B:2 kỹ thuật PCR Tạp chí KHKT Thú y – số 3, 2002 Trương Nam Hải (2005) Sản xuất vacxin phòng bệnh Salmonella enteritidis S typhimurium vi khuẩn biến nạp Báo cáo tổng kết ñề tài KC 04.06, Hà Nội 2005 Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương, (2009) Giáo trình miễn dịch học ứng dụng, NXB Nơng nghiệp Hà Nội ðinh Duy Kháng, Lê Văn Phan, Phan Thanh Phượng, Trương Văn Dung Hoàng Xuân Nghinh (2000) Ứng dụng kỹ thuật PCR ñể ñịnh type vi khuẩn P multocida miền Trung Việt Nam Tạp chí KHKT Thú y, số 2000 Dương Thế Long (1994) Ảnh hưởng thời tiết khí hậu tới tình hình dịch bệnh Tụ huyết trùng trâu bò Sơn La KHKT Thú y, tập I – số 5, tr 59 – 63 Phan ðịch Lân (1998) Kêt hoạt động khoa học cơng nghệ Viện Thú y giai ñoạn 1991 – 1996 phương hướng nghiên cứu đến năm 2000 Tạp chí KHKT Thú y, tập V – số 4, tr – Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 62 Nguyễn Ngã, Lê Minh Tâm Nguyễn Bá Cường (1987) Nghiên cứu sản xuất vacxin Tụ huyết trùng tâu bò chủng Iran Tạp chí KHKT Thú y, tập Hồng Xn Nghinh, Trương Văn Dung, Hồng ðăng Huyến Tơ Long Thành (2004) Khả ñáp ứng miễn dịch số vacxin phòng bệnh Tụ huyết trùng trâu bò ñang lưu hành nước ta Tạp chí KHKT Thú y, số 2004 ðỗ Trung Phấn (1979) Miễn dịch trung gian tế bào, NXB Y học Hà Nội Phan Thanh Phượng (1985) Các loại chất bổ trợ vacxin nghiên cứu ứng dụng, Tạp chí NN CNTP, số 9, tr 430 – 432 Phan Thanh Phượng (1986) Bệnh Tụ huyết trùng gia súc, gia cầm NXB Nông nghiệp Phan Thanh Phượng (1989) Cơ sở miễn dịch dịch tễ điều khiển phịng chống đặc hiệu bệnh Tụ huyết trùng gia súc, gia cầm Việt Nam Luận án tiến sỹ khoa học, Matxcơva Phan Thanh Phượng Trương Văn Dung (1990) Vacxin nhũ hóa Tụ huyết trùng trâu bị sản xuất cơng nghệ Báo cáo tổng kết cơng trình 02B giai đoạn 1986 – 1990 Hồng ðạo Phấn (1986) ðặc tính P multocida type huyết chúng, tạp chí KHKT Thú y, tr – Nguyễn Vĩnh Phước (1988) Phân lập giám ñịnh serotype vi khuẩn Tụ huyết trùng trâu bò tỉnh phía Nam Kết hoạt động KHKT Thú y 1975 – 1985, NXB Nơng nghiệp Quy trình Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 162 – 92 (1994) Quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vacxin dung thú y, NXB Nông nghiệp – Bộ NN CNTP Nguyễn Như Thanh (1974) Giáo trình thực tập vi sinh vật thú y NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 56 – 57 Lê Văn Tạo (2006) Vacxin sử dụng vcxin phòng bệnh ñộng vật Tạp chí KHKT Thú y, tập XIII – số Nguyễn Bá Thành (2006) Nghiên cứu số ñặc ñiểm dịch tễ bệnh Gumbro, virus gây bệnh ñề xuất lịch tiêm chủng vacxin phù hợp ñể phòng bệnh cho ñàn gà ðồng Nai Luận án tiến sỹ nơng nghiệp, TP Hồ Chí Minh Phạm Quang Thái, Trần Xuân Hạnh, Tô Thị Phấn, Nguyễn Thị Thiên Thu, Phạm Hào Quang ðỗ Văn Dũng (2007) “An toàn hiệu lực vacxin Tụ huyết trùng trâu bò nhũ hóa chủng P52” Tạp chí KHKT Thú y, tập XIV – số Tô Long Thành (2009) “Tổng quan vacxin”, tạp chí KHKT Thú y, tập XVI – số TÀI LIỆU TIẾNG ANH Aalbeak B., Eriksen L., Rimler R.B., Leifsson P.S., Basse A., Christiansen T., Eriksen E (1999) Typing of P.multocida from haemorrhagic septicaemia in Danish fallow deer (Dama dama) APMIS 107(10), pp.913 Bain R.V.S (1963) Haemorrhagic septicaemia FAO Agricultural studies No 62, FAO, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 63 Rome Bain R.V.S., De Alwis M.C.L., Carter G.R., Gupta B.K (1982) Haemorrhagic septicaemia Animal production and health No 33, FAO, Rome Carter G R and Rundell S W.(1975) “Indentification of type a strains of P multocida using staphylococcal hyaluronidase” Veterinary record, pp: 343 Carter G.R (1982) Whatever happened to haemorrhagic septicaemia Journal of the American Veterinary Medical Association, 180, pp 1176 – 1177 Carrigan M.J., Dawkins J.J., Cockram F.A., Hansen A.T (1991) P multocida septicaemia in fallew deer (Dama dama) Aust Vet J (6), pp 201 – 206 De Alwis M C L (1982) “P multocida serotype 6:B infection from an elephant” Sri Lanka Veterinary Jounal, 18, pp 28 De Alwis M C L (1984) Haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes, Rev sci tech Off Int Epiz., 3, pp 707 – 730 proceedings No 57 De Alwis M C L., Wijewardana T.G., Gomis A.I., Vipulasiri A.A (1990) Persistence of the carrier status haemorrhagic septicaemia (serotype 6:B infection) in buffaloes Trop Anim Health Prod 22(3), pp.185 – 202 De Alwis M C L (1992) Pasteurellosis in production animals A review An International workshop sponsored by ACIAR held at Bali, Indonesia 10 – 13 August 1992 Darrmadi, (1991) Country report-Indonesia In: Produceeding of the fourth international Workshop on Haemorrhagic septicaemia, 11 – 17 February 1991, Kandy, Sri Lanka Diallo I.S., Frost A.J (2000) Charactieristics of haemolytic extract from avian P multocida Veterinary Microbioly 71, pp 37 – 45 Elfaki M.G., Abbas B., Mahmoud O.M., Abdel-Magied E.M (2002) Septicaemia pasteurellosis in camelus in central Saudi Arabia Vet J 163(2), pp 218 – 231 Frank G.H (1989) Pasteurellosis in cattle In Adlam C and Rutter M (eds) Pasteurella ang Pasteurellosis, Academic Press London Gupta K.B, (1980) Symptomes on diseases of livestocks 13, pp.45-53 Heddleston K.L., Reber P.A (1972) Fowl cholera: Cross – immunity induced in turkeys with formalin – killed in vivo propagated P multocida Avian Dis 16, pp 578 – 586 Hiramune T and De Alwis M.C.L (1982) Haemorrmagic septicaemia carrier status of cattle and buffalo in Sri Lanka, Tropical animal Health and production 14, pp: 91 – 92 Tran Xuan Hanh, (2002) Septicaemic pasteurellosis in pigs: Some features of distribution and pathology of Pasteurella multocida serotype B:2 in pigs in Vietnam PhD thesis Scholl of Veterinary Science, The University of Queensland Kumar A.A., Harbola P.C., Rimler R.B., Kumar P.N (1996) Studies on P multocida isolates of animal and avian origin from India Ind J Comp Microbiol Immunol Infect Dis 17, pp 120 – 124 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 64 Lignieres J.M, (1900) Contribution Lestude classification des septicaemia haemorrhagic les Pasteurella Ann Inst Pasteur (Paris), pp 15:734 Mustafa A.A., Ghalib H.W and Shigidi M.T (1978) “Carrier rate of Pasteurella multocida in cattle associated with an out break of haemorrhagic septicaemia in Suda” British Veterinary Jounal Muniandy N., Edgar J., Woolcock J.B., Mukhur T.K.S (1992) Virulence, Purification, Structure and Protective potential of the putative capsular polysachride of P multocida type 6:B Pasteurellosis in production animal ACIAR Proceeding No 43, pp 47 – 54 Martrenchar A and Njanpop B.M, (1994) First case of an outbreak of haemorrhagic septicaemia caused by P multocida serotype B:6 in Northern Cameroon Rev Elev Med Vet Pays Trop 47(1), pp 19 – 20 Michael L.P., Barbara J.M., Vivek K, (2002) Transcriptional response of P multocida to nutrient limitation, Journal of bacteriology 184(13), pp 3734 – 3739 Namioka S.,and Murata M, (1961) Serological studies on Pasteurella multocida I, A simplified method of capsule typing of the organism, Cornell Veterinarian 51, pp 498 – 507 Namioka S.,and Murata M, (1961) Serological studies on Pasteurella multocida II,Characteristics of somatic “O” antigen of organism, Cornell Veterinarian 51, pp 507 - 521 OIE, (2004) Manual of diagnostic tests and vaccine for terrestrial animals Rosenbusch C.T., and Merchant I.A, (1939) A study of the Haemorrhagic septicaemia Pasteurella Jornal of Bacteriology 37, pp 68 -74 Rimler R.B., Rhoades K.R, (1989) Pasteurella and Pasteurellosis Academic rpress Limited, London, pp.37 – 73 Rimler R.B, (1992) Pasteurella: Laboratory techniques for typing and diagnosis of infection ACIAR oroceedings No 43, 1992, pp 199 – 202 Rimler R.B, (1994) Presumptive identification of P multocida serogroup A, D and F by capsul depolymerisation with mucopoly saccharidases National Animal Diseases centel PO Box, Ames, IA 50010, USA Rahim N.A.A, (1991) Country report – Malaysia In: Proceeding of the fourth international Workshop on Heamorrhagic septicaemia, 11 – 17 February 1991, Kandy, Sri Lanka Ryu H.I., Kim C.J, (2000) Immunologic reactivity of a lipopolycarcharide – protein complex pf type A P multocida in mice Jour of Vet Sci (2), pp 87 – 95 Shigidi M.T.A., Mustafa A.A, (1979) Biochemical and serological studies on P multocida isolated from cattle in Sudan Cornell Veterinarian 69, pp 77 – 84 Souriya M, (1991) Country report – Laos In: proceeding of the fourth international Workshop on Haemorrhagic septicaemia, 11 – 17 February 1991, Kandy, Sri Lanka Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 65 Sheikh M.A., Anzam M., Shakoori A.R, (1996) Observations on haemorrhagic septicaemia in Pakistan livestocks Zentrabl Veterinarmed 43(5), pp 293 – 304 Shivachandra S.B., Kumar A.A., Gautam R., Singh V.P., Saxena M.K., Srivastava S.K, (2006) Identification of avian strains of P multocida in India by conventional and PCR assays Vet Joural 172(3), pp.561 – 565 Voigts A., Nagaisiue G., Henton M.N, (1997) Haemorrhagic septicaemia due to P multocida type B:2 in Namibia Trop Anim Health Prod 29(4), pp 247 – 255 Wijewadana T.G., Gunawardana G.A., De Alwis M.C.L., Talagoda S.A (1994) Serotyping and biochemical characteristics of P multocida isolated from outbreaks of fowl cholera in chiken in Sri Lanka Vet Journal 41, pp.1 – Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 66 PHỤ LỤC Hình 3.1 Nhân giống môi trường tăng sinh giàn lắc Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 67 Hình 3.2 Nhân giống mơi trường tăng sinh giàn lắc Hình 3.3 Pha lỗng đếm số lượng vi khuẩn thạch máu Hình 3.4 Pha lỗng đếm số lượng vi khuẩn thạch máu Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 68 Hình 3.5 Máy tạo nhũ Silverson L4RT Hình 3.6 Cân kiểm tra trọng lượng bê thí nghiệm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 69 Hình 3.7 Cân kiểm tra trọng lượng bê thí nghiệm Hình 3.8 Cân kiểm tra trọng lượng bê thí nghiệm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 70 Hình 3.9 Tiêm kiểm tra an tồn vacxin bê Hình 3.10 Tiêm kiểm tra an toàn vacxin bê Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 71 Hình 3.11 Tiêm kiểm tra an tồn vacxin thỏ Hình 3.12 Tiêm kiểm tra an toàn vacxin thỏ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 72 Hình 3.13 Tiêm kiểm tra hiệu lực vacxin thỏ Hình 3.614 Tiêm kiểm tra hiệu lực vacxin thỏ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 74 ... vacxin vơ hoạt Tụ huyết trùng trâu bị nhũ dầu chủng T2, T4 Xí nghiệp Thuốc thú y Trung Ương? ?? Mục đích đề tài - Nghiên cứu x? ?y dựng quy trình sản xuất vacxin Tụ huyết trùng trâu bị nhũ dầu đạt tiêu... NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - NGUYỄN VĂN HƯNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN VƠ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU BỊ NHŨ DẦU CHỦNG T2, T4 TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y. .. tiêu vô trùng - Chỉ tiêu an toàn - Chỉ tiêu hiệu lực 2.2 ðối tượng nghiên cứu Vacxin vơ hoạt tụ huyết trùng trâu bị nhũ dầu chủng T2, T4 sản xuất Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương 2.3 ðịa ñiểm nghiên