Luận văn Khảo sát thành phần lớp chất lipit và hoạt tính sinh học của loài Hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thị Kim Dung KHẢO SÁT THÀNH PHẦN LỚP CHẤT LIPIT VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI HÀU THÁI BÌNH DƢƠNG (CRASSOSTREA GIGAS) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thị Kim Dung KHẢO SÁT THÀNH PHẦN LỚP CHẤT LIPIT VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI HÀU THÁI BÌNH DƢƠNG (CRASSOSTREA GIGAS) Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Trịnh Thị Thu Hƣơng Hà Nội - 2020 i Lời cam đoan Luận văn cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn khoa học TS Trịnh Thị Thu Hương Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan Tác giả luận văn Đào Thị Kim Dung ii Lời cảm ơn Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Trịnh Thị Thu Hương – người trực tiếp hướng dẫn khoa học dành nhiều thời gian, công sức hướng dẫn em suốt trình thực nghiên cứu hoàn thành đề tài nghiên cứu khoa học Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban lãnh đạo Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, GS TS Phạm Quốc Long, PGS TS Đoàn Lan Phương, TS Trần Quốc Toàn toàn thể anh chị em, bạn bè đồng nghiệp cơng tác phịng Hóa sinh hữu tận tình truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Xin chân thành cảm ơn đề tài: “Nghiên cứu tạo chế phẩm bổ sung dinh dưỡng nguồn gốc thiên nhiên (TPCN) nhằm phòng ngừa khắc phục yếu tố bất lợi thể sống môi trường vũ trụ” hỗ trợ em thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy, cô giáo Học viện Khoa học Công nghệ trực tiếp giảng dạy, truyền đạt kiến thức khoa học chuyên ngành cho em năm tháng qua Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè bên cạnh, ủng hộ, động viên Một lần em xin chân thành cảm ơn! Tác giả luận văn Đào Thị Kim Dung iii Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ALP Alkalin phosphatase Alkalin phosphatase Axb Fatty acid Axit béo CAEP Ceramide aminoethylphosphonate Ceramide aminoethylphosphonate DBE Double bond equivalent Tổng số liên kết đôi DAG Diacylglycerol Diacylglycerol DHA Docosahexaenoic Docosahexaenoic EPA Eicosapentaenoic acid Axit eicosapentaenoic FFA Free fatty acid Các axit béo tự GGLs Glycoglycerolipid Glycoglycerolipid GL Glycolipid Glycolipid GSLs Glycosphingolipid Glycosphingolipid HC Hydrocacbon Các hydrocacbon HR-ESIMS High resolution electrospray Phổ khối phân giải cao ionisation mass spectrometry ILCNC International Lipid Classification Ủy ban Danh pháp Phân and Nomenclature Committee loại Lipit Quốc tế LCB Long-chain base Gốc chuỗi dài MADAG Monoankyldiacylglycerol Monoankyldiacylglycerol MAG Monoacylglycerol Monoacylglycerol MUFA Monounsaturated fatty acids Axit béo không no nối đôi NBT Nitroblue tetrazol Nitroblue tetrazol OD Optical density Mật độ quang PA Phosphatidic Phosphatidic PBS Phosphate buffered saline Phosphate buffered saline iv PC Phosphatidylcholine Phosphatidylcholine PE Phosphatidylethanolamine Phosphatidylethanolamine PI Phosphatidylinositol Phosphatidylinositol PL Phospholipid Phospholipid PLs Polar lipid lipit phân cực PS Phosphatidylserine Phosphatidylserine PUFA Polyunsaturated fatty acids Axit béo không no đa nối đôi SE Steryl ester Steryl ester SFA Saturated fatty acid Axit béo no ST Sterol Lipids Sterol TAG Triacylaglycerol Triacylaglycerol TBD Pacific Ocean Thái Bình Dương TVPD Phytoplankton Thực vật phù du WE Wax ester Các Wax ester v Danh mục bảng Bảng 1.1: Các lớp lipit sinh vật biển Bảng 1.2 Thành phần, hàm lượng axit béo theo mùa loài hàu C.rhizophorae 16 Bảng 1.3 Thành phần, hàm lượng axit béo theo tháng loài hàu C madrasensis 19 Bảng 1.4 Hàm lượng axit béo mẫu hàu C madrasensis nuôi Gangewadiya (GW_C), C madrasensis tự nhiên Kandakuliya (KC_C) C madrasensis tự nhiên Gangewadiya (GW_W) 20 Bảng 3.1 Hàm lượng lipit tổng mẫu hàu nghiên cứu 37 Bảng 3.2 Thành phần hàm lượng axit béo lipit tổng mẫu hàu nghiên cứu 38 Bảng 3.3 Thành phần hàm lượng lớp chất lipit mẫu hàu nghiên cứu 42 Bảng 3.4 Thành phần hàm lượng phân lớp phospholipid mẫu hàu nuôi hàu tự nhiên 44 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ (-) ESIMS/MS dạng phân tử PI mẫu hàu tự nhiên 58 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ (-) ESIMS/MS dạng phân tử PI’ mẫu hàu nuôi 65 Bảng 3.7 Ảnh hưởng mẫu nghiên cứu đến phát triển tế bào RAW264.7 67 Bảng 3.8 Tác động mẫu nghiên cứu đến tăng tiết IL-2 68 Bảng 3.9 Ảnh hưởng mẫu nghiên cứu đến phát triển tế bào 69 Bảng 3.10 Ảnh hưởng mẫu nghiên cứu đến hoạt động ALP 70 Bảng 3.11 Ảnh hưởng mẫu nghiên cứu đến khả tạo collagen 70 Bảng 3.12 Ảnh hưởng mẫu nghiên cứu đến khả tạo khống 71 vi Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1.1: Cấu tạo phân tử lipit Hình 1.2 Cấu trúc phân tử Sterol Hình 1.3 Cấu trúc phân tử monoankyldiacylglyxerol (MADAG) Hình 1.4 Cấu trúc phân tử triacylglyxerol (TAG) Hình 1.5 Cấu trúc glycoglycerolipit 10 Hình 1.6 Cấu trúc glycosphingolipid 10 Hình 1.7 Cấu tạo phân tử: a) glycerophospholipid, b) sphingophospholipid 11 Hình 1.8 Sơ đồ cấu tạo glycerophospholipid 12 Hình 1.9 Hình ảnh mẫu hàu Thái Bình Dương (Crassostrea gigas) 26 Hình 2.1 Hình ảnh mẫu hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas ni hàu Crassostrea gigas tự nhiên 30 Hình 3.1 Thành phần, hàm lượng số axit béo lipit tổng mẫu hàu C gigas nuôi C gigas tự nhiên 41 Hình 3.2 Hình ảnh TLC lipit tổng mẫu hàu nghiên cứu 43 Hình 3.3 Hình ảnh TLC lớp chất phospholipid mẫu hàu 45 Hình 3.4 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI1 48 Hình 3.5 Phổ (-) ESIMS dạng phân tử PI1 48 Hình 3.6 Phổ (-) ESIMS/MS dạng phân tử PI1 49 Hình 3.7 Công thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI1 C20:1/C20:4 49 Hình 3.8 Phổ (-) ESIMS dạng phân tử PI2 50 Hình 3.9 Phổ (-) ESIMS/MS dạng phân tử PI2 50 Hình 3.10 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI2 16:0/20:5 50 Hình 3.11 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI3 51 Hình 3.12 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI3 18:1/18:1 51 vii Hình 3.13 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI4 52 Hình 3.14 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI4 17:0/20:5 52 Hình 3.15 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh củaPI5 18:0/20:5 53 Hình 3.16 Công thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI6 18:0/20:4 54 Hình 3.17 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI7 18:1/20:1 55 Hình 3.18 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI8 55 Hình 3.19 Công thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI8 20:1/20:5 56 Hình 3.20 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI9 56 Hình 3.21 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI9 C20:1/C22:6 57 Hình 3.22 Sắc ký đồ LC-MS dạng phân tử PI10 57 Hình 3.23 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI10 20:1/20:4 58 Hình 3.24 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh của PI’1 16:0/20:5 60 Hình 3.25 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’2.1 16:1/20:1 60 Hình 3.26 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’2.2 18:1/18:1 61 Hình 3.27 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’3 17:0/20:4 61 Hình 3.28 Công thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’4 18:0/20:5 62 Hình 3.29 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’5 18:0/20:4 63 Hình 3.30 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’6 C20:1/C20:5 63 Hình 3.31 Công thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’7 20:1/20:4 64 Hình 3.32 Cơng thức cấu tạo sơ đồ phân mảnh PI’8 C20:1/C20:1 65 viii MỤC LỤC Lời cam đoan………………………………………………………………… i Lời cảm ơn…………………………………………………………………… ii Danh mục bảng……………………………………………………………… v Danh mục hình vẽ, đồ thị……………………………………………… vi CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN……………………………………………… 1.1 Tổng quan lipit 1.1.1 Khái niệm chung 1.1.2 Phân loại lipit 1.1.2.1 Lipit không phân cực 1.1.2.2 Lipit trung tính 1.1.2.3 Lipit phân cực 1.2 Tổng quan Hàu biển 13 1.2.1 Giới thiệu chung Hàu biển 13 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Hàu biển giới 14 1.2.2.1 Những nghiên cứu hàm lượng lipid tổng thành phần axit béo Hàu biển 14 1.2.2.2 Những nghiên cứu lớp chất lipit Hàu biển 21 1.2.2.3 Những nghiên cứu khác Hàu biển 23 1.2.3 Tình hình nghiên cứu Hàu biển Việt Nam 23 1.2.4 Tổng quan đối tượng nghiên cứu – Hàu Thái Bình Dương 25 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………………………………………………………………………… 30 2.1 Nguyên vật liệu 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Phương pháp chiết lipit tổng 31 PHỤ LỤC Phổ (-) HR-LCMS/MS PI5 18:0/20:5 mẫu hàu tự nhiên 10 PHỤ LỤC 10 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI6 18:0/20:4 mẫu hàu tự nhiên 11 PHỤ LỤC 11 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI7 18:1/20:1 mẫu hàu tự nhiên 12 PHỤ LỤC 12 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI8 20:1/20:5 mẫu hàu tự nhiên 13 PHỤ LỤC 13 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI9 20:1/22:6 mẫu hàu tự nhiên 14 PHỤ LỤC 14 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI10 20:1/20:4 mẫu hàu tự nhiên 15 PHỤ LỤC 15 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI1 16:1/20:5 mẫu hàu nuôi 16 PHỤ LỤC 16 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI2.1 18:1/18:1 PI2.2 16:1/20:1 mẫu hàu nuôi 17 PHỤ LỤC 17 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI3 17:0/20:4 mẫu hàu nuôi 18 PHỤ LỤC 18 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI4 18:0/20:5 mẫu hàu nuôi 19 PHỤ LỤC 19 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI5 18:0/20:4 mẫu hàu nuôi 20 PHỤ LỤC 20 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI6 20:1/20:5 mẫu hàu nuôi 21 PHỤ LỤC 21 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI7 20:1/20:4 mẫu hàu nuôi 22 PHỤ LỤC 22 Phổ (-) HR-LCMS/MS PI8 20:1/20:1 mẫu hàu nuôi 23 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thị Kim Dung KHẢO SÁT THÀNH PHẦN LỚP CHẤT LIPIT VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI HÀU THÁI... ? ?Khảo sát thành phần lớp chất lipit hoạt tính sinh học lồi hàu Thái Bình Dương (Crassostrea gigas) ” 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ LIPIT 1.1.1 Khái niệm chung Trong sách, tài liệu tham khảo. .. Hình ảnh mẫu hàu Thái Bình Dương (Crassostrea gigas) 26 Hình 2.1 Hình ảnh mẫu hàu Thái Bình Dương Crassostrea gigas ni hàu Crassostrea gigas tự nhiên 30 Hình 3.1 Thành phần, hàm lượng