Xác định yếu tố gây bệnh của vi khuẩn e coli phân lập từ lợn con theo mẹ bị tiêu chảy tại trung tâm nghiên cứu lợn thụy phương và thử nghiệm vacxin phòng bệnh

luận văn, tiến sĩ, thạc sĩ, báo cáo, khóa luận, đề tài

Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiƯp hµ néi Ngun ngut cÇm XÁC ðỊNH YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN E.COLI PHÂN LẬP TỪ LỢN CON THEO MẸ BỊ TIÊU CHẢY TẠI TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU LỢN THỤY PHƯƠNG VÀ THỬ NGHIỆM VACXIN PHÒNG BỆNH Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: THú Y MÃ số: 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: TS Đỗ NgäC TH Hµ Néi - 2008 LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam ñoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn ñã ñược cảm ơn thơng tin trích dẫn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Nguyệt Cầm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ………………………i LỜI CẢM ƠN ðể hồn thành luận văn này, tơi ln nhận hướng dẫn chu đáo, tận tình thầy hướng dẫn khoa học: TS ðỗ Ngọc Th phó Bộ mơn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc ñến TS Trần Thị Lan Hương giảng viên Bộ môn Vi sinh - Bệnh lý - Truyền nhiễm Khoa Thú y, trường ðại học nông nghiệp Hà Nội quan tâm, giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tơi xin cám ơn Ban Giám đốc, cán cơng nhân Trung tâm nghiên cứu lợn Thụy Phương, cán Bộ môn Di truyền giống vật ni - Viện Chăn ni giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tơi thực ñề tài nghiên cứu hoàn thành luận văn Xin chân thành cám ơn bạn bè, ñồng nghiệp ñã giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu để hồn thành luận văn Hà Nội, tháng 10 năm 2008 Tác giả Nguyễn Nguyệt Cầm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………ii Môc lôc Lêi cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii M U i 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số hiểu biết chung hội chứng tiêu chảy 2.2 Một số nghiên cứu vi khuẩn E coli gây bệnh đường tiêu hố 17 ðỐI TƯỢNG, NGUN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 3.1 ðối tượng, ñịa ñiểm thời gian nghiên cứu 33 3.2 Nội dung nghiên cứu 33 3.3 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 33 3.4 Phương pháp nghiên cứu 34 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tình hình mắc bệnh lợn từ sơ sinh đến 21 ngày tuổi nuôi TTNC lợn Thụy Phương 4.2 45 45 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ mẫu bệnh phẩm lợn theo mẹ mắc tiêu chảy Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………iii 47 4.3 Kết giám định số đặc tính sinh học chủng vi khuẩn phân lập ñược 4.4 49 Kết xác ñịnh yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 51 4.4.1 Kết xác ñịnh loại ñộc tố ñường ruột chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 51 4.4.2 Kết xác ñịnh kháng nguyên bám dính chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 4.5 Tổ hợp yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 4.6 4.10 61 Kết xác ñịnh khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 4.9 59 Kết kiểm tra ñộc lực số chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược chuột bạch 4.8 57 Kết xác ñịnh serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 4.7 53 Kết thử nghiệm phác ñồ ñiều trị tiêu chảy cho lợn 64 67 Kết theo dõi hiệu vacxin sử dụng cho lợn mẹ ñể phòng hội chứng tiêu chảy lợn 70 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 74 5.1 Kết luận 74 5.2 ðề nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 PHỤ LỤC 87 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………iv DANH Môc chữ viếT tắT BEt Ethidium bromide BHI Brain Heart Infusion C perfringens Clostridium perfringens DNA Deoxyribo Nucleic Acid E coli Escherichia coli ETEC Enterotoxigenic Escherichia coli F Fimbriae LT Heat-labile toxin NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standards PCR Polymerase Chain Reaction ST Heat-stable toxin TAE Tris - Acetic - EDTA TGE Transmissible Gastro Enteritis (Bệnh viêm dày ruột truyền nhiễm) TTNC Trung tâm nghiên cứu lợn Thụy Phương VTEC Verotoxigenic Escherichia coli WTO World Trade Organization Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa hc Nụng nghip v Danh mục bảng STT Tên bảng Trang 2.1 Tiờu chun ủỏnh giỏ mc ủ mẫn cảm kháng kháng sinh theo NCCLS (1999) 42 4.1 Tỷ lệ mắc số bệnh thường gặp lợn từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi 45 4.2 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ mẫu phân phủ tạng lợn bị tiêu chảy 47 4.3 Kết giám ñịnh số ñặc tính sinh học chủng vi khuẩn phân lập ñược 50 4.4a Kết xác ñịnh tỷ lệ chủng mang gen quy ñịnh khả sản sinh ñộc tố ñường ruột 51 4.4b Tỷ lệ chủng vi khuẩn E coli mang gen quy ñịnh sản sinh kháng ngun bám dính 54 4.5 Tổ hợp gen quy định yếu tố gây bệnh có chủng E coli phân lập ñược 57 4.6 Kết xác ñịnh serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 60 4.7 Kết kiểm tra độc lực số chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược chuột bạch 63 4.8 Kết xác ñịnh khả mẫn cảm kháng sinh với số chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược từ lợn bệnh 65 4.9 Kết thực nghiệm số phác ñồ ñiều trị hội chứng tiêu chảy lợn trước cai sữa 69 4.10 Kết theo dõi hiệu vacxin sử dụng cho lợn mẹ để phịng tiêu chảy lợn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ………………………vi 72 Danh mơc c¸c hình STT Tên hình Trang 3.1 Quy trỡnh phõn lp giám ñịnh vi khuẩn E coli 35 4.1 So sánh tỷ lệ chủng E coli mang gen quy ñịnh sản sinh ñộc tố ñường ruột theo lứa tuổi 52 4.2 So sánh tỷ lệ loại kháng nguyên bám dính theo lứa tuổi 55 4.3 So sánh tỷ lệ tổ hợp yếu tố gây bệnh theo lứa tuổi 58 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………vii MỞ ðẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài ðể ñáp ứng nhu cầu ngày cao chất lượng lương thực, thực phẩm, sản phẩm có nguồn gốc từ ñộng vật - thứ ñồ ăn cần thiết gia đình hàng ngày, khơng thể khơng nói đến tầm quan trọng ngành chăn nuôi gia súc gia cầm Muốn cung cấp cho thị trường sản phẩm ngon, sạch, công tác chăn nuôi thú y, đặc biệt phịng chống dịch bệnh cần phải ñược ñặt lên hàng ñầu, sở chăn nuôi tập trung theo hướng công nghiệp Sau Việt Nam gia nhập WTO, thị trường kinh tế ñược mở rộng, việc xuất nhập giống sản phẩm nguồn gốc ñộng vật ñược quan tâm nhiều Làm để có giống tốt, chất lượng thịt ñạt tiêu chuẩn quốc tế, dich bệnh xảy tràn lan khắp nơi tốn đặt cho nhà chăn ni - thú y, cho dù thời gian gần ñây, nhà nước có nhiều sách hỗ trợ đầu tư nhiều cho chăn ni, đặc biệt cơng tác phịng chống dịch bệnh, nhiều dự án giúp người nơng dân vốn kỹ thuật ñể tăng suất chăn ni Từ trước đến nay, tiêu chảy nguyên nhân gây thiệt hại lớn cho ngành chăn ni, đặc biệt chăn ni lợn Bệnh xảy lợn lứa tuổi, gây chết nhiều ñiều trị hiệu quả, lợn trước cai sữa Có nhiều nguyên nhân gây hội chứng tiêu chảy (E coli, Clostridium perfringens, Rotavirus, virus gây viêm dày ruột truyền nhiễm ký sinh trùng cầu trùng, giun ñũa…), ñó, vi khuẩn E coli ñược ñánh giá nguyên nhân gây bệnh phổ biến quan trọng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………1 Ở nước ta, bệnh xảy quanh năm rầm rộ cuối đơng đầu xn khí hậu thay ñổi ñột ngột, lạnh, mưa nhiều, ẩm ướt, ñây ñiều kiện lý tưởng ñể vi khuẩn E coli phát tán gây bệnh Các yếu tố kể trên, kết hợp với điều kiện chăm sóc, ni dưỡng khơng tốt làm phát sinh bệnh gây thiệt hại lớn kinh tế Bệnh nỗi lo thường trực người chăn ni, đặc biệt nhà chăn nuôi lợn nái sinh sản quy mô lớn Trung tâm nghiên cứu (TTNC) lợn Thụy Phương, thuộc Viện Chăn ni có chức ni giữ giống lợn cho quốc gia không tránh khỏi ảnh hưởng bệnh gây ñối với ñàn lợn theo mẹ ðể giảm thiểu thiệt hại bệnh vi khuẩn gây xây dựng biện pháp phịng điều trị bệnh có hiệu quả, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Xác ñịnh yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập từ lợn theo mẹ bị tiêu chảy Trung tâm Nghiên cứu lợn Thụy Phương thử nghiệm vacxin phòng bệnh” 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác ñịnh ñược số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập ñược từ lợn theo mẹ bị tiêu chảy Trung tâm nghiên cứu lợn Thuỵ Phương từ sở cho việc sử dụng vacxin phòng bệnh 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn - Cơng trình ñã chứng minh vai trò vi khuẩn E coli bệnh tiêu chảy lợn từ sơ sinh ñến 21 ngày tuổi TTNC lợn Thụy Phương - ðã ñưa phác ñồ ñiều trị có hiệu quả, giúp cho thú y sở hộ chăn nuôi tham khảo phòng trị hội chứng tiêu chảy cho lợn, góp phần giảm thiệt hại tăng thu nhập chăn ni lợn - Bước đầu đánh giá hiệu vacxin phòng bệnh tiêu chảy vi khuẩn E coli gây cho lợn qua lợn mẹ, hướng tới áp dụng rộng rãi Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………2 ... Trung tâm Nghiên cứu lợn Thụy Phương thử nghiệm vacxin phịng bệnh? ?? 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định ñược số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập ñược từ lợn theo mẹ bị tiêu chảy Trung tâm nghiên. .. hại bệnh vi khuẩn gây xây dựng biện pháp phịng điều trị bệnh có hiệu quả, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli phân lập từ lợn theo mẹ bị tiêu chảy Trung. .. chủng vi khuẩn phân lập ñược 4.4 49 Kết xác ñịnh yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 51 4.4.1 Kết xác ñịnh loại ñộc tố ñường ruột chủng vi khuẩn E coli phân lập ñược 51 4.4.2 Kết xác