- Nhúm ủộ ct ố tế bào (Shiga /Verotoxin)
3.4.3.Phương phỏp giỏm ủị nh một số ủặ c tớnh sinh h ọc chủ yếu của cỏc ch ủng vi khuẩn Ẹ coli phõn lập ủược
3. ðỐ IT ƯỢNG, NGUYấN LIỆU, NỘI DUNG
3.4.3.Phương phỏp giỏm ủị nh một số ủặ c tớnh sinh h ọc chủ yếu của cỏc ch ủng vi khuẩn Ẹ coli phõn lập ủược
3.4.3.1. Phản ứng sinh Indol
- Nguyờn lý: trong mụi trường khụng cú ủường mà chỉ cú Pepton, một số vi khuẩn sản sinh men Tryptophataza làm phõn giải axit amin Tryptophan ủể sinh Indol.
- Cỏch tiến hành: cấy vi khuẩn vào mụi trường Trypton, bồi dưỡng tủ ấm 37oC trong 24 giờ, lấy ra rồi nhỏ vào mụi trường 5-6 giọt dung dịch Kovac's, quan sỏt trong vũng 1 phỳt.
- ðỏnh giỏ kết quả:
+ Phản ứng dương tớnh: trờn bề mặt mụi trường xuất hiện một vũng trũn màu ủỏ
+ Phản ứng õm tớnh: mụi trường khụng chuyển màu
3.4.3.2. Phản ứng lờn men ủường
- Thành phần của dung dịch pepton:
Pepton: 15 g
Nước cất vụ trựng: 1000 ml - Cỏch tiến hành:
Trong 100 ml mụi trường pepton cho vào 1 ml chỉ thị màu Andrader, lắc ủều rồi chia ra cỏc ống nghiệm. Mỗi ống 5 ml cú ống Durham (ủể kiểm tra sinh hơi của vi khuẩn).
Pha cỏc loại ủường Glucoza, Lactoza…thành dung dịch 10%, hấp ướt 110oC trong vũng 20-30 phỳt.
Cho vào mỗi ống mụi trường nước peptol 5-6 giọt dung dịch ủường 10%, 20%. ðể tủ ấm 37oC trong 24 giờ ủể kiểm tra nếu cú tạp khuẩn thỡ loại
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………37 bỏ và thay thế bằng ống mụi trường khỏc. Sau ủú cấy vi khuẩn cần giỏm ủịnh vào, rồi bồi dưỡng ở nhiệt ủộ 37oC trong 24 giờ.
- ðỏnh giỏ kết quả: cựng một lỳc kiểm tra ủược 2 tớnh chất: + Phản ứng lờn men ủường:
* Phản ứng dương tớnh: mụi trường chuyển thành mầu hồng ủỏ * Phản ứng õm tớnh: mụi trường khụng chuyển màụ
+ Phản ứng sinh hơi:
* Phản ứng dương tớnh: ống Durham bị ủẩy lờn và trong ống cú một khoảng khớ.
* Phản ứng õm tớnh: ống Durham vẫn ở ủỏy ống nghiệm, trong ống khụng cú gỡ.
3.4.4. Phương phỏp xỏc ủịnh cỏc yếu tố gõy bệnh của cỏc chủng vi khuẩn Ẹ coli phõn lập ủược bằng phương phỏp PCR