- Nhúm ủộ ct ố tế bào (Shiga /Verotoxin)
3. ðỐ IT ƯỢNG, NGUYấN LIỆU, NỘI DUNG
3.4.5. Xỏc ủị nh serotyp khỏng nguyờn Oc ủa cỏc ch ủng vi khuẩn Ẹ coli phõn lập ủược bằng phản ứng ngưng kết nhanh trờn phiến kớnh
Vi khuẩn Ẹ coli cú nhiều serotyp O khỏc nhau, do vậy bước quan trọng ủầu tiờn là xỏc ủịnh ủược nhúm serotyp O, sau ủú tiến hành cỏc phản ứng
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………40 ngưng kết với cỏc khỏng huyết thanh ủơn giỏ trong nhúm cần xỏc ủịnh. Những nguyờn liệu cơ bản cho việc xỏc ủịnh serotyp gồm:
+ Cỏc chủng Ẹ coli cần ủịnh typ ủược nuụi trờn mụi trường thạch mỏu + Cỏc khỏng huyết thanh O chuẩn (ủa giỏ và ủơn giỏ)
* Phương phỏp tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trờn phiến kớnh như sau:
Nhỏ lờn 2 ủầu lam kớnh sạch, mỗi ủầu 1 giọt nước muối sinh lý, dựng que cấy vụ trựng lấy khuẩn lạc Ẹ coli cần xỏc ủịnh trờn mụi trường thạch mỏu trộn ủều với 2 giọt nước muối sinh lý thành huyễn dịch vi khuẩn. Nhỏ một giọt khỏng huyết thanh chuẩn vào một bờn huyễn dịch và một giọt nước muối sinh lý vào bờn huyễn dịch cũn lại (ủối chứng).
+ Phản ứng dương tớnh khi hỡnh thành ngưng kết giữa khỏng nguyờn là vi khuẩn với khỏng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, huyễn dịch tỏch ra làm 2 phần là cỏc hạt ngưng kết và phần nước trong. Với phản ứng ngưng kết xảy ra nhanh, rừ rệt thỡ ủược ủỏnh giỏ mức ++++. Tuỳ theo khả năng ngưng kết ủể cú thể ủỏnh giỏ mức ngưng kết ở cỏc mức ủộ khỏc nhau +, ++, +++.
+ Phản ứng là õm tớnh khi hỗn dịch vi khuẩn với khỏng huyết thanh ủục ủều như bờn ủối chứng.
* Với những chủng cú ngưng kết với khỏng huyết thanh nhúm, tiếp tục thực hiện như vậy với cỏc khỏng huyết thanh ủơn giỏ thuộc nhúm ủể xỏc ủịnh rừ từng serotyp. Trong trường hợp cỏc chủng cú hiện tượng ngưng kết chộo với nhiều nhúm hoặc ngưng kết với nhiều ủơn giỏ khỏc nhau, thỡ phải pha loóng khỏng huyết thanh theo cấp số 2, kết quả sẽ lấy ngưng kết ở cấp số pha loóng cao nhất.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………41
3.4.6. Kiểm tra ủộc lực của cỏc chủng vi khuẩn Ẹ coli phõn lập trờn chuột bạch