Tìm hiểu quy trình phát hiện enterobacter sakazakii trong sữa bột

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CƠNG NGHỆ TP HCM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TÌM HIỂU QUY TRÌNH PHÁT HIỆN ENTEROBACTER SAKAZAKII TRONG SỮA BỘT Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực MSSV: 0811110013 : VƯƠNG MINH ĐẠT Lớp: 08CSH1 TP Hồ Chí Minh, 2011 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, với hỗ trợ từ Giáo viên hướng dẫn Những số liệu bảng biểu hình ảnh phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi phần tài liệu tham khảo Ngồi ra, cịn sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả, quan tổ chức khác, đề tài thể phần tài liệu tham khảo Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước Hội đồng, kết khóa luận TP.HCM, ngày tháng năm 2011 Sinh viên Vương Minh Đạt LỜI CẢM ƠN Trải qua ba năm học mái trường đại học kỹ thuật công nghệ, giúp đỡ tận tình thầy cơ, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Nhờ q trình làm khóa luận, mà em học nhiều kiến thức mà trước em chưa biết Em xin chân thành cám ơn thầy cô khoa Môi trường công nghệ sinh học, giúp đỡ em tận tình ba năm học vừa qua để hồn thành khóa học Em xin cám ơn giáo viên hướng dẩn tận tình hướng dẫn em suốt q trình làm khóa luận tốt nghiệp Một điều khơng thể thiếu, gia đình, cha mẹ động viên em, giúp em có thêm tinh thần, vượt qua khó khăn tinh thần, vật chất Nhờ vậy, mà em hồn thành khóa học hồn thành khóa luận tốt nghiệp Ngồi thầy gia đình ra, điều quan trọng khơng thể thiếu, tập thể bạn lớp 08CSH trường Đại học Kỹ thuật Cơng nghệ Chính nhờ bạn, giúp đỡ động viên nhiều trình học tập, đời sống Em xin chân thành cám ơn!!! TP.HCM, ngày tháng năm 2011 Sinh viên Vương Minh Đạt MỤC LỤC Danh mục từ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN 2.1 Giá trị dinh dưỡng sữa bột 2.1.1 Đường lactose 2.1.2 Protein 2.1.3 Chất béo 2.1.4 Chất khoáng .5 2.1.5 Vitamin 2.1.6 Các hợp chất khác 2.2 Các vi sinh vật gây hại sữa bột .6 2.2.1 Listeria monocytogenes .6 2.2.1.1 Giới thiệu 2.2.1.2 Phân loại 2.2.1.3 Đặc điểm 2.2.1.4 Yếu tố độc lực 2.2.1.5 Khả gây bệnh 2.2.1.6 Các thực phẩm liên quan 2.2.2 Escherichia Coli 2.2.2.1 Giới thiệu 2.2.2.2 Phân loại 2.2.2.3 Hình thái, cấu trúc 10 2.2.2.4 Đặc điểm 10 i 2.2.2.5 Khả gây bệnh 11 2.2.2.6 Các thực phẩm liên quan .12 2.3 Tổng quan Enterobacter sakazakii 13 2.3.1 Lịch sử phát .13 2.3.2 Phân loại 13 2.3.3 Đặc điểm 14 2.2.3.1 Đặc điểm chung .14 2.2.3.2 Đặc điểm sinh hóa 16 2.3.4 Cấu trúc 16 2.3.4.1 Thành tế bào 17 2.3.4.2 Màng sinh học 18 2.3.4.3 Tiên mao .19 2.3.5 Yếu tố độc lực 20 2.3.6 Cơ chế gây bệnh 21 2.2.6.1 Các nguồn nhiễm bệnh 21 2.2.6.2 Triệu chứng 21 2.2.7 Các biện pháp phịng xử lí bệnh 22 2.2.7.1 Các biện pháp phòng bệnh 22 2.2.7.2 Xử lí bệnh .22 2.2.8 Tình hình nhiễm E sakazakii sữa bột 22 2.2.8.1 Việt Nam 22 2.2.8.2 Thế giới 23 CHƯƠNG 3: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ENTEROBACTER SAKAZAKII 3.1 Phương pháp truyền thống 25 3.1.1 Nguyên tắc .25 3.1.2 Môi trường nuôi cấy 25 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ .25 3.1.4 Lấy mẫu 25 3.1.5 Chuẩn bị mẫu thử .27 ii 3.1.6 Quy trình phân tích 28 3.1.7 Cách tiến hành 29 3.1.7.1 Phần mẫu thử 29 3.1.7.2 Tiền tăng sinh 29 3.1.7.3 Tăng sinh chọn lọc 29 3.1.7.4 Phân lập Enterobacter sakazakii giả định 29 3.1.7.5 Khẳng định .30 3.1.8 Phân lập Enterobacter sakazakii môi trường vi sinh Brilliance Enterobacter sakazakii Agar .31 3.1.9 Phân lập Enterobacter sakazakii môi trường MacConkey 32 3.1.10 Khẳng định sinh hóa 33 3.1.10.1 Môi trường thuốc thử thử nghiệm sinh hóa 33 3.1.10.2 Phép thử Oxydase 34 3.1.10.3 Phép thử L-Lysin decarboxylase, L-Ornithin decarboxylase 34 3.1.10.4 Phép thử L- arginin dihydrolase .34 3.1.10.5 Phép thử lên men loại đường khác 34 3.1.10.6 Phép thử sử dụng Citrate 34 3.1.10.7 Thử nghiệm Nitrate .35 3.1.10.8 Thử nghiệm ONPG .36 3.1.10.9 Thử nghiệm tính di động thạch mềm 37 3.1.9.10 Thử nghiệm VP (voges-proskauer) .38 3.2 Các phương pháp đại 39 3.2.1 Phương pháp PCR .39 3.2.1.1 lịch sử phát triển .40 3.2.1.2 Nguyên tắc 40 3.2.1.3 Các thành phần tham gia vào trình PCR 41 3.2.1.4 Phương pháp xác định Enterobacter sakazakii phản ứng PCR 43 3.2.2 Phương pháp real time PCR .46 3.2.2.1 Lịch sử phát triển 46 iii 3.2.2.2 Khái niệm nguyên lí hoạt động 47 3.2.2.3 Phương pháp tiến hành 49 CHƯƠNG : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị 53 Tài liệu tham khảo .55 PHỤ LỤC 56 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ATVSTP: An toàn Vệ sinh thực phẩm FDA : Cơ quan Thực phẩm Dược phẩm Mỹ TCVN: Tiêu chuẩn việt nam PCR: Polymerase Chain Reaction BPW: Buffered Pepton Water mLST: Canh thang tryptoza lauryl sulfat cải biến ESIATM : Môi trường phân lập Enterobacter sakazakii giả định TSA: Tryptone Soya Agar EE: Enrichment Enterobacteriaceae ONPG: O-Nitrophenyl-p-D-galactopyranoside MR-VP: Methyl red – Voges Proskauer KIA: Kligler Iron Agar TSI: Triple Sugar Iron Agar PCR: Polymerase Chain Reaction v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Khối lượng đường lactose loại sữa bột Bảng 2.2 Thành phần chất béo có sữa bị Bảng 2.3 Thành phần chất khống có sữa bột Bảng 2.4 Các thành phần vitamin sữa vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Vi khuẩn Listeria monocytogenes Hình 2.2: Vi khuẩn Escherichia Coli Hình 2.3: Trẻ em bị viêm màng não sử dụng sữa bột nhiễm E sakazakii Hình 2.4: E.sakazakii kính hiển vi Hình 2.5: Tế bào vi khuẩn E sakazakii Hình 2.6: Cấu trúc tế bào Gram – Hình 2.7: bước phát triển màng sinh học Hình 2.8: Cấu trúc tiên mao Hình 2.9: Hai loại sữa điển hình nhiễm E sakazakii Hình 3.1: E sakazakii mơi trường ESIA Hình 3.2: E sakazakii mơi trương thạch TSA Hình 3.3: Khuẩn lạc Enterobacter sakazakii mơi trường Brilliance Enterobacter sakazakii Agar Hình 3.4: E sakazakii mơi trường Macconkey Hình 3.5: Kết thử nghiệm nitratase (+) xuất màu đỏ Hình 3.6: Kết thử nghiệm ONPG (+) ống nghiệm màu vàng Hình 3.7: Kết thử nghiệm VP ( Voges-Proskauer) Hình 3.8: Cơ chế phản ứng PCR Hình 3.9: Kết sau điện di Hình 3.10: Sơ đồ phát quang Taqman-probe Hình 3.11: Kết đọc máy real time 7500 Hình 3.12: Kết khảo sát khả khuếch đại mồi mẫu dò gene OmpA E sakazakii vii Hình 3.10 : Sơ đồ phát quang Taqman-probe 3.2.2.3 Phương pháp tiến hành Hỗn hợp phản ứng real time PCR 50µl bao gồm - x dung dịch đệm PCR - 0,4 µM/L mồi mẩu dị, 1µl DNA - 200 µmol/L mổi loại dATP, dGTP, dCTP, dTTP - 2,6 unit Taq DNA polymerase, 1,7 mmol/L MgCl2 49 Hoặc sử dụng kít có chứa sẵn thành phần phản ứng ta cần thêm vào lượng DNA mẫu cần thiết Hình 3.11: Kết đọc máy real time 7500 Hệ thống Real - time PCR gồm máy luân nhiệt nối với máy quang phổ huỳnh quang máy vi tính Các điều kiện phản ứng 94 oC phút, 35 chu kỳ 94oC 30s, 58 oC 30s 72oC 30s bước mở rộng để kéo dài chuỗi 72 oC phút Đoạn mồi đoạn probe Primer and probe Sequentie (5’- 3’) OmpA-F GGTGAAGGATTTAACCGTGAACTT OmpA-R GCGCCTCGTTATCATCCAAA OmpA-probe CCCGGAAAGCGCATGGCC Đọc kết Biểu đồ khuếch đại Real-time PCR có: trục tung (Y) cường độ huỳnh quang phát từ ống phản ứng nhận ánh sáng kích thích, cịn trục hồnh (X) chu kỳ nhiệt 50 Chứng âm Hình 3.12 : Kết khảo sát khả khuếch đại mồi mẫu dò gene OmpA E sakazakii 51 CHƯƠNG IV : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 kết luận Sữa bột thức ăn dinh dưỡng cho trẻ em chứa hầu hết chất dinh dưỡng cần thiết cho phát triển trẻ sơ sinh protein, glucid, lipid, vitamin, muối khoáng Những hợp chất cần thiết cho phần ăn ngày trẻ sơ sinh Do sữa đóng vai trò quan trọng nhu cầu dinh dưỡng trẻ em Bên cạnh mơi trường thuận lợi cho việc phát triển vi sinh vật gây bệnh Enterobacter sakazakii vi khuẩn Gram (-) hình que, có tiên mao kị khí tùy nghi có đầy đủ tiêu chuẩn colifrom đặc điểm chịu nhiệt 58 oC nên khả sống sót chúng cao Là nguyên nhân gây bệnh nguy hiểm cho trẻ sơ sinh viêm màng não viêm ruột hoại tử để lại nhiều di chứng nguy hiểm gây chết người Sữa bột xem nguồn lây nhiễm E sakazakii sang người nhiều Đa số trường hợp nhiễm bệnh sử dụng loại sữa nhiễm khuẩn E sakazakii Các phương pháp phân lập để phát E sakazakii nghiên cứu nhiều, tiểu luận xin đề cập đến số phương pháp phân lập phát loại vi khuẩn độc hại gồm có :  Phương pháp ni: cấy dựa vào đặc điểm sống E sakazakii sử dụng mơi trường thạch để tăng sinh sau sử dụng kiểm nghiệm sinh hóa để khẳng định - Ưu điểm: dễ thực chi phí cho phịng thí nghiệm thấp, thu sinh khối vi sinh vật - Nhược điểm: Tốn thời gian, cần sử dụng nhiều loại hóa chất, hiểu rỏ đặc điểm sinh hóa vi sinh vật Dễ bị nhầm lẫn với chủng vi sinh vật khác, dễ bị nhiễm loại vi sinh vật khác qúa trình ni cấy  Phương pháp PCR : Là phương pháp đại dựa vào trình tru trình nhiệt để khuếch đại đoạn DNA đặc trưng cho vi khuẩn E sakazakii 52 - Ưu điểm: phương pháp PCR xem phương pháp cho kết tốt so với phương pháp truyền thống Những lợi phương pháp độ nhạy, độ xác tin cậy cao tự động hóa thiết bị công nghệ cao - Nhược Điểm : Mặc dù kỹ thuật PCR phát nhanh với độ nhạy cao cần 18 – 36 cho xét nghiệm Kỹ thuật khơng có khả định lượng xác số tác nhân cần kiểm tra mẫu Do sử dụng thiết bị cơng nghệ cao phí đầu tư cho phịng thí nghiệm cao  Phương pháp Real-time PCR phương pháp cải tiến phương pháp PCR thông qua chất thị huỳnh quang - Ưu điểm nhược điểm Không cần điện di sau thực phản ứng Real - time PCR, quy trình đơn giản, tiến trình thực nhanh, rút ngắn thời gian cho kết quả, độ nhạy cao, độ đặc hiệu cao, ống phản ứng PCR ln ln đóng, tránh nguy ngoại nhiễm Tuy nhiên Real - time PCR đòi hỏi phịng thí nghiệm phải có trang thiết bị máy đại, giá thành cao 4.2 Kiến nghị Sau hồn thành khóa luận này, tơi nhận thấy Enterobacter sakazakii vi sinh nguy hiểm đặc biệt trẻ sơ sinh Bên cạnh yếu tố độc lực chế gây bệnh vi khuẩn E sakazakii chưa nghiên cứu rõ Sự tồn vi khuẩn khó phát phương pháp thông thường dễ gây tượng dương tính giả Dễ nhầm lẫn với vi sinh vật khác, gây khó khăn việc chuẩn đốn Do Tơi có đề nghị nên có biện pháp phịng ngừa phịng tránh hạn chế rủi ro Enterobacter sakazakii gây Cụ thể sau : Nên nuôi sữa mẹ sữa mẹ chứa yếu tố quan trọng hệ miễn dịch trẻ nhỏ Đối với loại sữa bột nên kiểm tra tiêu vi sinh phương pháp có độ xác cao để phát yếu tố gây bệnh trước đến tay người tiêu dùng Trong trình pha chế sữa bột cần làm dẫn 53 nhà sản xuất Tuyên truyền tác hại Enterobacter sakazakii cho mội người để hạn chế đến mức thấp nhấp tổn hại vi sinh vật gây Thông qua tiểu luận này, hy vọng góp phần giúp người hiểu rõ nguy gây bênh vi sinh vật sản phẩm dinh dưỡng đặc biệt tác hại Enterobacter sakazakii gây cho người Góp phần hiểu rõ tầm quan trọng việc đánh giá chất lượng thực phẩm việc giữ vệ sinh môi trường sống, bảo quản pha chế thực phẩm tiêu chuẩn để bảo vệ sức khỏe người 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Cấu trúc tế bào vi khuẩn Vietsciences - Nguyễn Lân Dũng- 05/10/2005 Phương pháp phân tích vi sinh – Trần Linh Thước – nhà xuất giáo dục TCVN (7850:2008) : Sữa sản phẩm sữa - Phát Enterobacter sakazakii TCVN 6400 : Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẩn lấy mẩu TCVN (6263:1997): sữa sản phẩm sữa - Cách chuẩn bị mẩu thử Tài liệu tiếng Anh [1].www.fineli.fi/food.php?foodid=672&lang=en [2].http://www.foodsafety.govt.nz/elibrary/industry/cronobacter.pdf [3].http://www.ugacfs.org/faculty/Erickson/EBWhitePaper.mpd.PDF [4].http://scholar.sun.ac.za/bitstream/handle/10019.1/3097/Kemp,%20F.pd f?sequence=1 [5].http://aem.asm.org/cgi/content/full/72/4/2539 [6].http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1449048/ [7].http://nguyenanhvn.com/san-pham/moi-truong-vi-sinh-brillianceenterobacter-sakazakii-agar-cong-thuc-dfi 1847.html 55 PHỤ LỤC Thành phần môi trưởng Nước đệm peptone (BPW)  Thành phần Dịch thủy phân casein enzyme 10,0 g Natri clorua (NaCl) 5,0 g Natri hydro phosphat ngậm 12 phân tử nước 9,0 g Kali dihydro phosphat (KH2PO4) 1.5 g Nước 000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước cách đun nóng, cần Chỉnh pH đến 7,0 ± 0,2 25 oC cần, cho dung dich vào bình cầu ống nghiệm theo nhu cầu phân tích khử trùng 15 phút 121oC Canh thang tryptoza lauryl sunfat cải biến (mLST)/môi trường vancomyxin a Canh thang tryptoza lauryl sunfat cải biến (mLST)  Thành phần Natri Clorua 34,0 g Dịch thủy phân mô động vật thực vật Enzyme 20,0 g Lactoza (C12H22O11) 5,0 g Kali hydro phosphat (H2HPO4) 2,75 g Dikali hydro phosphat (K2HPO4) 2,75 g Natri lauryl sunfat (C12H25NaO5S) 0,1 g Nước 1000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước, cách đun nóng cần, chỉnh pH 6,8 ± 0,2 25oC, phân phối 10ml mLST vào ống nghiệm, khử trùng 15 phút 121 oC 56 b Dung dịch vanomyxin  Thành phần Vancomyxin 10 mg Nước 10 ml  Chuẩn bị Hòa tan vancomyxin vào nước cất trộn lọc khử trùng c Môi trường vancomyxin/mLST Cho 0,1 ml vancomyxin vào 10 ml dung dịch mLST đển thu nồng độ 10µg ml mLST Mơi trường vancomyxin/mLST bền đến ngày bảo quản từ 0-5oC Thạch phân lập Enterobacter Sakazakii (ESIATM)  Thành phần Peptone pancreatic casein 7,0 g Dịch chiết nấm men 3,0 g Natri Clorua NaCl 5,0 g Natri desoxycholat 0,6 g 5-brom-4-cloro α-D glucopyranosit (C14H15BrCINO6) 0,15 g Tím tinh thể mg Thạch agar 12-18 g Nước 1000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước cách đun sôi Chỉnh pH đến 7,0 ± 0,2 25o C, khử trùng 15 phút 121 oC Làm nguội đến nhiệt độ 44-47 oC Rót 15 ml môi trường vào đỉa Petri vô trùng đông đặc mặt phẳng ngang Mơi trường bền đến 15 ngày bảo quản từ 0-5oC Thạch đậu tương trypton TSA  Thành phần 57 Dịch thủy phân casein Enzym 15,0 g Dịch thủy phân đậu tương Enzym 5,0 g Natri Clorua 5,0 g Thạch 9-18 g Nước 000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước cách đun sôi chỉnh pH đến 7,3 ± 0,2 25oC , khử trùng 15 phút 121oC Làm nguội đến nhiệt độ 44-47 oC Rót 15 ml môi trường vào đỉa Petri vô trùng đông đặc mặt phẳng ngang Môi trường EE borth ( Enterobacteriaceae Enrichment broth ) Peptone 10g Glucose 5g Disodium hydrogen phosphate 6,45g Potassium dihydrgen phosphate 2g Ox bile 20g Brilliant green 0,0135g Water 1000 ml pH 7,2 ± 0,2 t 25 oC Môi trường vi sinh Brilliance Enterobacter sakazakii Agar  Thành phần Công thức * gm/lít Tryptone 15.0 Soya peptone 5.0 Sodium chloride 5.0 Ferric ammonium citrate 1.0 Sodium desoxycholate 1.0 58 Sodium thiosulphate 1.0 Chromogen 0.1 Agar 15.0 pH 7,3 ± 0,2 t 25oC  Chuẩn bị Cân 43.1g Brilliance Enterobacter sakazakii Agar đổ vào lít nước cất Lắc đun sơi đến hịa tan hồn tồn Thanh trùng nồi hấp 121°C vòng 15 phút , làm nguội đến 50°C Trộn đổ vào đia Petri Môi trường MacConkey Peptone 20g Lactose 10g Mật khô 1,5g Desoxychorate 2,0g Neutral red 0,03g Crystal violet 0,0001g NaCl 5,0g Agar 14g Nước 1000 ml Môi trường thuốc thử đặc tính sinh hóa 8.1 Thuốc thử phát Oxidaza  Thành phần N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine dihydro clorua 1,0 g (C10H16N2.2HCl) Nước 100 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước trước sử dung 59 8.2 Mơi trường Lysine decarboxylase, Ornithin decarboxylase, tách nhóm cacboxyl (decarboxylation ) Môi trường Arginin dehydrolase cộng hydro  Thành phần L-lysin monohydroclorua C6H14N2O2.HCl 5,0 g Dịch chiết nấm men 3,0 g Glucoza C6H12O6 1,0 g Bromocresol tía 0,015 g Nước 1000 ml L-lysin monohydroclorua C6H12N2O2.HCl 5,0 g Dịch chiết nấm men 3,0 g Glucoza C6H12O6 1,0 g Bromocresol tía 0,015 g Nước 1000 ml L-Arginin monohydroclorua C5H14N4O2.HCl 5,0 g Dịch chiết nấm men 3,0 g Glucoza C6H12O6 1,0 g Bromocresol tía 0,015 g Nước 1000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước cách đun nóng, chỉnh pH cho sau khử trùng pH 6,8 ± 0,2 25oC , phân phối ml mổi loại môi trường L – lysine decarboxylation, L- Ornithin decarboxylation L- Arginin dihydrolation sang ống nghiệm khử trùng ống nghiệm 15 phút 121oC 8.3 Môi trường để lên men hydrat cacbon ( nước peptone có phenol red, Dsorbitol, L-rhamnoza, D-sucroza, D-melibioza amygdalin ) a Môi trường 60  Thành phần Dịch thủy phân casein 10 g Enzym Natri Clorua (NaCl) 5g Đỏ phenol 0,02 g Nước 1000 ml  Chuẩn bị Hòa tan thành phần nước cách đun nóng, chỉnh pH cho sau khử trùng pH 6,8 ± 0,2 25oC phân phối vào bình cầu có dung tích phù hợp khử trùng môi trường 15 phút 121oC b Dung dịch Hydrat cacbon (D-sorbitol, L-rhamnoza, D-sucroza, Dmelibioza amygdalin ) 80mg/ml  Thành phần Hydrat cacbon 8g Nước 100 ml  Chuẩn bị Hòa tan riêng bốn thành phần Hydrat cacbon nước để thu dung dịch hydrat cacbon lọc khử trùng c Môi trường lên men Hydrat cacbon hoàng chỉnh  Thành phần Môi trường 875 ml Dung dịch hydrat cacbon 125 ml  Chuẩn bị Đối với loại Hydrat cacbon, them dung dich Hydrat cacbon chuẩn bị vào môi trường bản,một cách vô trùng trộn Phân phối 10 ml mơi trường hồng chỉnh hydrat cacbon vào ống nghiệm 3.1.2.6 Môi trường simon xitrat 61  Thành phần Natri xitrat Na3C6H5O7 2,0 g Natri Clorua NaCl 5,0 g Dikali hydro phosphat 1,0 g Amoni dihhydro phosphat (NH4H2PO4) 1,0 g Magie sunfat 0,2 g Xanh bromothymol 0,08 g Thạch 8-18 g Nước 1000 ml Hòa tan thành phần nước cách đun nóng, chỉnh pH cho sau khử trùng pH 6,8 ± 0,2 25oC Phân phối 10 ml môi trường simon xitrat vào ống nghiệm ,khử trùng môi trường 15 phút 121oC Để nghiêng ống cho thạch có chiều sâu 2,5 cm Lưu ý : giá trị pH qui 25oC Dùng axit Clohydric C(HCl)=1mol/l dung dịch natri hydroxit C(NaOH)=1mol/l để chỉnh pH cần , nước sử dụng nước cất nước đả khử ion 62 63 ... khuẩn Enterobacter sakazakii qui trình phân lập phát E sakazakii sữa bột 1.3 Nội dung nghiên cứu - Tìm hiểu giá trị dinh dưỡng sữa bột mối nguy sữa bột - Tìm hiểu tổng quan E sakazakii - Các qui trình. .. loại sữa bột[ 1] Loại sữa bột Khối lượng lactose/100g bột Sữa bột 78.0 g Sữa bột tách kem 52,9 g Sữa bột cho trẻ sơ sinh 50,9 g 2.1.2 Protein - Casein Casein tên nhóm protein chủ yếu sữa Trong sữa. .. dụng sữa bột bị nhiễm Enterobacter Sakazakii Xuất phát từ lý tiến hành thực khóa luận: “Qui trình phát Enterobacter sakazakii sữa bột? ?? Để có nhìn tổng quan vi sinh vật 1.2 Mục đích Tìm hiểu vi