Ứng dụng bộ kit nhuộm hóa học tế bào để phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn fab 14

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Đồn Văn Thuyết ỨNG DỤNG BỘ KÍT NHUỘM HĨA HỌC TẾ BÀO ĐỂ PHÂN LOẠI BỆNH BẠCH CẦU CẤP THEO TIÊU CHUẨN FAB LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÀ NỘI - 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Đồn Văn Thuyết ỨNG DỤNG BỘ KÍT NHUỘM HÓA HỌC TẾ BÀO ĐỂ PHÂN LOẠI BỆNH BẠCH CẦU CẤP THEO TIÊU CHUẨN FAB Chuyên ngành: Mã số: Sinh học thực nghiệm 60420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Trần Văn Tính PGS.TS.Bùi Phương Thuận HÀ NỘI - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu v t nghiên cứu tơi hồn tồn trung thực v đề tài không trùng với đề t i n o công bố N u sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tác giả Đồn văn Thuyết LỜI CẢM ƠN Tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Khoa Sinh Học - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội, h t lòng tạo điều kiện để tơi học tập tốt v đạt thành ng y hôm Đặc biệt, với lịng bi t ơn sâu sắc, tơi xin g i ời cảm ơn tới thầy cô hướng dẫn T Trần đ n T nh v PG T Bùi Phương Thuận tận tâm hướng dẫn gi p tạo điều iện thuận ợi để ho n th nh uận v n tốt nghiệp Tôi c ng xin g i ời cảm ơn chân th nh đ n cán nhân vi n uy t học - Truyền máu Trung ương Trung tâm đạo Bệnh viện uy t học - Truyền máu v iện ãnh - Bộ ông an gi p đ v tạo điều iện để thu thập số liệu, nghiên cứu ho n th nh luận v n tốt nghiệp Xin g i tới Ban ãnh đạo Công ty MEDLATEC lời cảm ơn sâu sắc tạo điều kiện thời gian c ng inh ph để tơi hồn thành khóa học Một lần nữa, tơi xin g i lời cảm ơn tới thầy cô, bạn bè tồn người thân gia đình n gi p đ nhiệt tình v động viên tơi suốt q trình học tập Học viên Đồn Văn Thuyết MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Quá trình sinh máu 1.1.1 Cơ quan sinh máu 1.1.2 Quá trình sinh máu 1.2 Bệnh bạch cầu cấp 1.2.1 Khái niệm chung 1.2.2 Dịch tễ học 1.2.3 Các nguyên nhân gây bệnh 1.2.4 Cơ chế bệnh sinh 1.2.5 Phân loại 1.2.6 Đặc điểm lâm sàng 1.2.7 Đặc điểm xét nghiệm 1.3 Tình hình nghiên cứu giới nhuộm hóa học tế bào 1.3.1 Kỹ thuật nhuộm Periodic-Axit Schiff (PAS) 1.3.2 Kỹ thuật nhuộm peroxidaza (PER) 10 1.3.3 Kỹ thuật nhuộm sudan B 11 1.3.4 Kỹ thuật nhuộm esteraza 11 1.3.5 Kỹ thuật nhuộm photphataza 13 1.4 Ứng dụng phương pháp nhuộm hóa học tế bào y học 14 1.5 Nghiên cứu nước nhuộm hóa học tế bào 23 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 28 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 28 2.2.2 Phương pháp thu thập mẫu số liệu 28 2.2.3 Kỹ thuật nghiên cứu 29 2.2.4 Xử lý số liệu 30 2.2.5 Biện pháp hạn chế sai số 30 2.2.6 Thời gian địa điểm nghiên cứu 30 2.3 Thực nghiệm 30 2.3.1 Bệnh phẩm, dụng cụ, máy móc hóa chất nghiên cứu 30 2.3.2 Quy trình nhuộm hóa học tế bào 32 2.3.3 Đánh giá kết 35 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 37 3.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu 37 3.2 Nhóm bạch cầu cấp dòng lympho 39 3.2.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh bạch cầu cấp dịng Lympho 39 3.2.2 Phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho sử dụng kit nhuộm HICYTEC 41 3.2.3 Kết nhuộm photphataza axit bạch cầu xác định loại lympho T bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lympho 47 3.3 Nhóm bạch cầu cấp dịng tủy 48 3.3.1 Phân nhóm bạch cầu cấp dịng tủy theo giới tính tuổi 48 3.3.2 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tủy theo kết chẩn đoán Viện Huyết học-Truyền máu trung ương 50 3.3.3 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ kit nhuộm HICYTEC 51 3.3.4 Mức độ phù hợp chẩn đốn thể bệnh bạch cầu cấp dịng tủy kít HICYTEC kết luận viện Huyết học-Truyền máu TW 53 3.4 Phân loại dòng tế bào bạch cầu cấp thể lai lympho - tủy (Lai L-T) .62 3.5 Kết nhuộm photphataza kiềm bạch cầu 67 3.6 Kết nhuộm sắt mẫu tủy bệnh nhân bạch cầu cấp Viện HHTM trung ương 69 KẾT LUẬN 69 KIẾN NGHỊ 70 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên TT viết tắt ALL AML BCC CE CS CD FAB HHTB HLA - DR 10 LA 11 L1 12 L2 13 L3 14 M0 15 M1 16 M2 Qua phản ứng nhuộm trên, vi trường vừa có tế bào blast nhuộm dương tính với dịng lympho (PAS) tế bào blast nhuộm dương tính với dịng tủy (peroxidaza, sudanB esteraza đặc hiệu), điều chứng tỏ mẫu tủy xuất tế bào blast hai dòng tủy lympho gọi thể lai lympho-tủy 3.5 Kết nhuộm photphataza kiềm bạch cầu Bảng 3.13 Kết nhuộm photphataza kiềm bệnh nhân bạch cầu cấp Điểm nhuộm 146 Tổng Trong tổng số trường hợp chẩn đoán bạch cầu cấp hầu hết giảm điểm nhuộm (71,7%) điểm, có trường hợp tăng điểm có định hướng nhiễm trùng (xem Bảng 3.13) Nhuộm photphataza kiềm bạch cầu dùng để phân biệt bệnh bạch cầu kinh bệnh bạch cầu cấp hội chứng nhiễm trùng bạch cầu đơn nhân Nếu bệnh bạch cầu kinh thường có tượng giảm điểm nhuộm (có thể giảm đến mức điểm Trong trường hợp bạch cầu cấp điểm nhuộm mẫu tuỷ thường nằm mức giảm vừa có tăng cao tế bào blast Nếu trường hợp bị nhiễm trùng (một triệu chứng bệnh) điểm nhuộm mẫu tăng lên dấu giúp bác sỹ lâm sàng theo dõi tiên lượng bệnh Tuy vậy, biến động lớn tế bào thành phần tế bào mẫu tuỷ bệnh nhân bạch cầu cấp nên xét nghiệm thường có giá trị có giá trị theo dõi mang tính động học [40] Hình 3.56 thể phản ứng nhuộm photphataza kiềm dương tính, nguyên sinh chất tế bào bắt màu đỏ nhân hồng cầu màu xanh 67 Hình 3.56 Ảnh nhuộm photphataza kiềm mẫu tủy bệnh nhân Trần Văn C 3.6 Kết nhuộm sắt mẫu tủy bệnh nhân bạch cầu cấp Viện HH-TM trung ƣơng Bảng 3.14 Kết nhuộm Perls mẫu tủy bị bệnh bạch cầu cấp Giới Có tế bào mạng lưới nội mơ sắt Khơng có tế bào mạng lưới nội mô sắt Tổng Nhuộm sắt (Perls) phát nguyên hồng cầu sắt tế bào mạng lưới nội mô sắt [42] (hình 3.57) Kết nhuộm Perls kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC cho thấy 60 bệnh nhân bạch cầu cấp có trường hợp (chiếm 10,0%) có tế bào mạng lưới nội mơ sắt (xem bảng 3.14) Theo Elisabeth Rybo cs tế bào mạng lưới nội mơ sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt so với nguyên hồng cầu sắt [50] Hình 3.57 Ảnh nhuộm Perls tế bào lưới nội mô sắt mẫu tủy bệnh nhân Trương Thị T 68 KẾT LUẬN Sử dụng kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC đồng 10 kỹ thuật để phân loại thể bệnh chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp 202 mẫu tủy bệnh nhân chọc tủy lần đầu chưa điều trị có triệu chứng nằm tiêu chuẩn mặt lâm sàng chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp, đề tài thu số kết sau: Tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp 31,2%, cao bạch cầu cấp dòng tủy chiếm 50,0%, bạch cầu cấp dòng lympho chiếm 41,7% thấp bạch cầu cấp lai lympho - tủy chiếm 8,3% Bạch cầu cấp dòng lympho chủ yếu trẻ em chiếm 60% có tỷ lệ nam giới mắc bệnh cao nữ giới, nam/nữ = 1,3 Đã đánh giá giá trị sử dụng kít phân loại thể bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB đạt phù hợp % dòng lympho 93,3% dòng tủy so với kết chẩn đoán Viện Huyết học - Truyền máu trung ương phương pháp hình thái học, miễn dịch di truyền Có trường hợp bạch cầu cấp thể lai lympho-tủy, mức độ phù hợp chẩn đoán đạt 100% Đã đánh giá giá trị kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm photphataza kiềm nhuộm Perls bệnh nhân bạch cầu cấp: 20% mẫu tủy có photphataza axit dương tính định hướng dịng lympho T; 1,7% có điểm nhuộm photphataza kiềm tăng định hướng có nguy nhiễm trùng; 3,3% mẫu tủy gặp tế bào mạng lưới nội mô sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt so với nguyên hồng cầu sắt 69 KIẾN NGHỊ Sử dụng kít nhuộm HICYTEC đồng 10 kỹ thuật để nhuộm mẫu tủy chọc tủy lần đầu phòng xét nghiệm Huyết học để xác định thể bệnh 70 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Trần Văn Tính, Vũ Thị Thủy, Lê Thị Thanh Thủy, Ngơ Thị Thảo, Đồn Văn Thuyết, Bùi Phương Thuận (2 15), “Đánh giá kết kít nhuộm HICYTEC chẩn đoán bệnh bạch cầu bệnh nhân chọc tủy lần đầu viện Huyết học-Truyền máu trung ương”, Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, tập 19 (4) tr 508-513 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thị Minh An cộng (1995), “Tình hình bệnh lơ xê mi cấp số bệnh viện địa phương bệnh viện bạch mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học, Đại học Y Hà Nội, tr.185-192 Đỗ Thị Vinh An, Phạm Quang Vinh, Phan Văn Chi, Nguyễn Thị Bích Nhi (2 ), “Bước đầu tìm hiểu số biến đổi protein bệnh nhân lơ xê mi cấp dòng lympho khoa Huyết học Truyền máu bệnh viện Bạch Mai”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 373, tr.267-270 Bộ môn Huyết học-Truyền máu (1984), Kỹ thuật xét nghiệm huyết học truyền máu, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Trọng Biểu, Từ Văn Mặc (1978), Thuốc thử hữu cơ, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trần Thị Hồng Hà (2004), Nghiên cứu đặc điểm, giá trị số yếu tố sinh học lâm sàng trẻ em bị lơ xê mi cấp dòng lympho bệnh viện nhi Trung ương, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thị Hằng (2 4), “Thiếu máu thiếu sắt”, Giáo trình Huyết họcTruyền máu, NXB Y học, Hà Nội Trần Thị Minh Hương, Đỗ Trung Phấn (2 2), “Tình hình bệnh máu Viện Huyết học truyền máu, bệnh viện Bạch Mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Huyết học Truyền máu 1999-2000, NXB Y học, tr.15-24 Nguyễn Công Khanh cộng (1987), “Phân loại bệnh lơ xê mi cấp trẻ em”, Y học Việt Nam (140), tr 28-32 Bùi Ngọc Lan (2007), Nghiên cứu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh lơ xê mi cấp dòng lympho điều trị thể nguy không cao trẻ em, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội 10 Lâm Thị Mỹ, Trần Thái Bình, Nguyễn Thanh Hưng, Huỳnh Nghĩa (2 4), “Đặc điểm bệnh bạch cầu cấp khu vực phía Nam năm 2-2 3”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 1(8), tr 98-102 11 Đỗ Trung Phấn (2 8), “Lơ xê mi cấp”, Bệnh lí tế bào nguồn, NXB Y học, tr 96 - 107 72 12 17 Đỗ Trung Phấn (2 8), “Sinh máu”, Bệnh lí tế bào nguồn, NXB Y học, tr 13- 13 Trần Văn Tính (2 14), “Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất, pH, muối điazo phản ứng nhuộm photphataza axit”, Tạp chí Y học thực hành (05), tr.29-30 14 Trần Văn Tính, Bùi Thanh Hương, Nguyễn Đắc Thảo, Đinh Ngọc Quân (2015), Nghiên cứu chế tạo kít nhuộm hóa học tế bào để chẩn đốn dịng tế bào bệnh ung thư máu, Đề tài cấp Bộ, Bộ Công an 15 Trần Văn Tính, Lê Đức Ngọc (1993), “Cải tiến phương pháp đánh giá số thay đổi hóa sinh tế bào bạch cầu ung thư dòng tuỷ”, Kỷ yếu Hội nghị hóa học tồn quốc Việt Nam lần thứ 3, tr.179 16 Trần Văn Tính, Phạm Hồi Thu, Nguyễn Anh Trí, Lưu Văn Bơi (2 11), “Tổng hợp nghiên cứu ảnh hưởng hiệu ứng electron phản ứng nhuộm esteraza đặc hiệu tế bào bạch cầu người naphtol AS cloaxetat”, Tạp chí Hóa học, Tập 49 (4), tr 479-488 17 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2 dụng chương trình Hyperchem để tính toán chế động học tối ưu phản ứng nhuộm Esteraza khơng đặc hiệu bạch cầu người”, Tạp chí th dược học (03), tr.18-24 18 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2 ưu hố phản ứng nhuộm Esteraza không đặc hiệu phương pháp đ Tạp chí thơng tin y dược học (06), tr.31-35 19 Nguyễn Hữu Toàn (1999), Nghiên cứu phân loại leukemia cấp người lớn, rối loạn tạo máu tế bào miễn dịch thể M1, M2, M3, Luận án Tiến sĩ Y dược, Học viện Quân y 20 Phan Nguyễn Thanh Vân, Nguyễn Tấn Bỉnh (2006), “Triển khai kỹ thuật FISH RT-PCR nhằm phát bất thường nhiễm sắc thể gen bệnh lý huyết học bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh” Tạp Chí Y Học Thực Hành, tập 545, tr 73-79 21 Phan Nguyễn Thanh Vân (2013), Ứng dụng kỹ thuật khuếch đại gen khảo sát tổ hợp gen thường gặp bệnh lý bạch cầu cấp, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh 73 22 Nguyễn Triệu Vân cộng (2 4), “Giá trị số dấu ấn miễn dịch (marker) chẩn đoán phân loại lơ xê mi cấp dòng lympho người lớn Viện Huyết học truyền máu”, Tạp Chí Y học Thực hành, tập 497, tr.27-29 23 Nguyễn Triệu Vân (2 14), “Một số hiểu biết bệnh nguyên, bệnh sinh, điều trị tiên lượng bệnh lơ xê mi cấp”, Một số chuyên đề Huyết học-Truyền máu, Tập 5, NXB Y học, tr 225-244 24 Phạm Quang Vinh (2003), Các biến đổi nhiễm sắc thể bệnh nhân lơ xê mi cấp Viện Huyết học- Truyền máu, bệnh viện Bạch Mai, Luận án Tiến sỹ Y học 25 Trần Ngọc Vũ, Nguyễn Duy Thăng, Phan Thị Thu Hoa, Trần Thị Phương Túy, Phan Hồng Duy, Ngơ Tứ Cương, Hồng Thị Thanh Trang, Tôn Nữ Trà Mai (2 14), “Nghiên cứu ứng dụng hóa học tế bào giá trị bổ sung dấu ấn miễn dịch chẩn đoán, phân loại lơ xê mi cấp”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 423, tr 189-195 Tiếng Anh 26 Barnes A (1994), Acute leukemias: The F.A.B classification and more, Resource exchange intern'l-Vietnam 27 Bennett J M and et al (1976), "Proposals for the classification of the acute leukaemias French-American-British (FAB) co-operative group", Br J Haematol, 33 (4), pp.451-458 28 Brennan M L., Penn M S., Van Lente F., Nambi V., Shishehbor M H., Aviles R J., Goormastic M., Pepoy M L., McErlean E S., Topol E J., Nissen S E., Hazen S L (2003), "Prognostic value of myeloPeroxidaza in patients with chest pain", N Engl J Med 349 (17), pp 1595-604 29 Burstone, M S (1957), “Esteraza activity of developing bones and teeth”, A M A Arch Path Vol 60, pp 164 - 167 30 Chayen J., Bitensky L (1994), Practical histochemistry, Wiley, London 31 Connor J R , Dodds R A , James I E , Gowen M (1995), “Human osteoclast and giant cell differentiation, The apparent switch from nonspecific esteraza to tartrate resistant acid photphataza activity coincides with the in situ expression of osteopontin mRNA”, J Histochemistry and Cytochemistry Vol 43 (12), pp 1193-1201 74 32 Craig F E., Foon K A (2008), "Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms", Blood, 111 (8), pp 3941-67 33 Dacie J V., Lewis S M (1994), Practical Haematology, Longman Group Ltd, Hong Kong 34 David Swirsky and Barbara J Bain (2006), Practical Haematology, Churchill Livingstone, Hong kong 35 Dissing J., Svensmark O (1990), "Human red cell acid photphataza: purification and properties of A, B and C isozymes", Biochim Biophys Acta Vol 1041, pp 232-42 36 Drexler H G (1987) "Classification of acute myeloid leukemias-a comparison of FAB and immunophenotyping", Leukemia, (10), pp 697-705 37 Estey E , Dohner H (2006), "Acute myeloid leukaemia" Lancet, 368 (9550), pp 1894-907 38 Gignac S M., Hu Z B., Denkmann S A., Uphoff C C., Drexler H G (1996), “Esteraza isoenzyme profiles of 255 leukemia-lymphoma cell lines from all hematopoietic cell lineages”, Leuk lymphoxítsm Vol 22, pp 143-151 39 Greer J P., Foerster J., Rodgers G M., Paraskevas F., Glader B., Arber D A., Means Jr T R (2009), Wintrobe’s clinical hematology Vol 1, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, USA 40 Hann I M ; Smith O P (2006), Pediatric hematology, Wiley-Blackwell, USA 41 Hayhoe F G J., Quaglino D (1994), Haematological cytochemistry, Edinburgh Churchill Livingstone, London 42 Heslop C L , Frohlich J J , Hill J S (2010), "MyeloPeroxidaza and Creactive protein have combined utility for long-term prediction of cardiovascular mortality after coronary angiography" J Am Coll Cardiol 55 (11), pp 1102-9 43 Kantarjian H M., Deisseroth A., Kurzrock R., Estrov Z., Talpaz M (1993) "Chronic myelogenous leukemia: a concise update", Blood, 82, pp 691703 44 Leong A S-Y, Cooper K., Leong F J W-M (2003), Manual of Diagnostic Antibodies for Immunohistology, Greenwich Medical Media, London, pp 325326 75 45 Mathy-Hartert M., Bourgeois E., Grülke S., Deby-Dupont G., Caudron I., Deby C., Lamy M., Serteyn D (1998), "Purification of myeloPeroxidaza from equine polymorphonuclear leucocytes", Can J Vet Res, Vol 62 (2), pp 127132 46 Merck (1995), “Enzyme cytochemistry Leucognost/HematoGnost Fe; Working intructions for simpified cytochemical staining for differentiation of leukaemias and myelodysplastic syndromes”, E.Merck, D-64271 Darmstadt 47 Moe W and et al (2 8), “Diagnosis of acute myeloid leukemia according to the WHO classification in the Japan adult leukemia study group AML-97 protocol”, International Journal of Hematology Vol 87 (2), pp 144-151 48 Pui C H., Sallan S., Relling M V., Masera G., Evans W E (2001), “International Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia”, Leukemia, 15, pp 707-715 49 Pui C H., Robinson L L., Look A T (2 8) “Acute lymphoblastic leukemia”, Lancet, 371 (9617), pp 1030-1072 50 Rybo E and Bengtsson C (1985), "Sideroblast count and examination of bone marrow reticuloendothelial iron in the diagnosis of iron deficiency", Scandinavian Journal of Haematology, Vol 34(S43), pp 77-85 51 Siegel M P H R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal DVM, PhD (2013), Cancer statistics, Vol 63(1), pp 11-30 52 Siegel M P H R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal D V M., PhD (2015), Cancer statistics, CA Cancer J Clin, vol 65(1), pp 5-29 53 Sigma (2006), Accustain iron stain, Procedure No HT20, Revised 201409, United Kingdom 54 Sigma-Aldrich (2008), Hematology & Histiology, Product guide, USA 55 Sigma (2014), Lymphocyte enzyme, Procedure No 181, Revised 201409, USA 56 Stok J E., Goloshchapov A., Cheng Song, Wheelock C E., M B H Derbel, C Morisseau, Hammock B D (2 4), “Investigation of the role of a second conserved serine in carboxylesterazas via site-directed mutagenesis”, Archives of Biochemistry and Biophysics Vol 430, pp 247-255 57 William H E (1941), Stain technique, The Science press printing company lancaster 76 ... quy nhuộm hóa học tế bào chẩn đoán thể bệnh bạch cầu cấp theo FAB 27 Hình 3.1 Biểu đồ phân loại bạch cầu cấp theo độ tuổi giới tính 38 Hình 3.2 Biểu đồ phân loại bệnh bạch cầu cấp. ..  Nhuộm hoá học tế bào: Sử dụng hóa chất nhuộm số enzym chất có tế bào, qua xác định dịng tế bào, kết hợp với kết hình thái học tiêu nhuộm giemsa phân loại thể bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn. .. việc phân loại dòng tế bào thể bệnh bạch cầu cấp dựa hai tiêu chuẩn FAB WHO Tiêu chuẩn FAB nhà Huyết học Pháp-Anh-Mỹ đưa năm 1976 tổng hợp kết hình thái học hóa học tế bào, năm 1986 tiêu chuẩn