Ứng dụng bộ kít nhuộm hóa học tế bào để phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB

MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận văn Hiện nay, việc phân loại dòng tế bào thể bệnh bạch cầu cấp dựa hai tiêu chuẩn FAB WHO Tiêu chuẩn FAB nhà Huyết học Pháp-Anh-Mỹ đưa năm 1976 tổng hợp kết hình thái học hóa học tế bào, năm 1986 tiêu chuẩn bổ sung thêm kết miễn dịch di truyền [15, 17] Nhuộm hóa học tế bào gồm kỹ thuật: Periodic-Acid Schiff (PAS), sudan black (SD), peroxidaza (PER), esteraza đặc hiệu, esteraza không đặc hiệu ức chế NaF không ức chế, photphataza kiềm axit Ưu điểm phương pháp nhuộm hóa học tế bào: Rẻ tiền, giá thành 1/4 so với phương pháp miễn dịch 1/10 so với phương pháp di truyền, không cần máy móc đại, dễ triển khai Hiện nay, kít nhuộm có bán thị trường kít đơn, giá thành cao có nhược điểm: kỹ thuật nhuộm nằm nên có nhiều cặn, quy trình nhuộm khác thời gian, số bước nhuộm, hóa chất cố định khác nhau, bước tẩy màu kỹ thuật nhuộm Sudan Periodic - Acid Schiff khó đồng nhất, nhuộm thiếu tương phản, chất màu dễ hòa tan dầu soi kính nên khó hội chẩn tiêu nhiều lần Tại Việt Nam, thuốc thử hầu hết tự pha kết hợp với yếu điểm nên độ nhạy, độ đặc hiệu thấp Theo Trần Ngọc Vũ cộng (2014) tỷ lệ phù hợp chẩn đoán hình thái học-hóa học tế bào miễn dịch 89,1%, giá trị dự báo bệnh bạch cầu cấp dòng lympho 88,88% độ đặc hiệu 73,77% [25] Theo tác giả Nguyễn Hữu Toàn việc phân loại dòng tế bào theo tiêu chuẩn FAB dựa phương pháp nhuộm hóa học cần phải có điều chỉnh tới 29,7% nhờ vào kỹ thuật miễn dịch di truyền [19] Hiện nay, tác giả Trần Văn Tính, Trung tâm Huyết học- Truyền máu, Bộ Công an nghiên cứu chế tạo thành công kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC gồm 10 kỹ thuật: Giemsa, Periodic-Axit Schiff (PAS), Peroxidaza, Sudan B, Esteraza đặc hiệu, Esteraza không đặc hiệu, Esteraza không đặc hiệu ức chế NaF, Photphataza kiềm, Photphataza axit, Perls Bộ kít khắc phục yếu điểm Nhằm đánh giá giá trị sử dụng kít, tiến tới thay hàng nhập ngoại, đề tài “Ứng dụng kít nhuộm hóa học tế bào để phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB” đề tài có ý nghĩa khoa học, thực tiễn, kinh tế - xã hội cấp thiết Mục đích nghiên cứu Đánh giá phù hợp kít nhuộm hóa học tế bào phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học di truyền bệnh nhân bạch cầu cấp chẩn đoán thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB (1986) Nội dung nghiên cứu: - Thống kê đặc điểm bệnh bạch cầu cấp bệnh nhân chọc tủy lần đầu Viện Huyết học-Truyền máu trung ương - Đánh giá tính phù hợp phương pháp nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC 10 kỹ thuật so với phương pháp hình thái học, miễn dịch di truyền bệnh nhân chẩn đoán thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB - Đánh giá giá trị kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC, nhuộm photphataza kiềm, nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm Perls bệnh nhân bạch cầu cấp Bố cục đề tài Đề tài gồm 71 trang, có 65 hình vẽ, đồ thị, 26 bảng biểu, chưa kể 41 trang phụ lục 57 tài liệu tham khảo Ngoài phần mở đầu kết luận, đề tài chia làm ba chương: chương – Tổng quan tài liệu, gồm 25 trang; chương –Phương pháp nghiên cứu, gồm trang; chương – Kết bàn luận, gồm 33 trang; Kết luận kiến nghị trang Liên quan đến nội dung đề tài đăng Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu giới nhuộm hóa học tế bào Trong ngành Huyết học thường sử dụng phổ biến kỹ thuật nhuộm hóa học tế bào sau: Periodic-Axit Schiff (PAS), Peroxidaza, Sudan B, Esteraza đặc hiệu, Esteraza không đặc hiệu, Esteraza không đặc hiệu ức chế NaF, Photphataza kiềm, Photphataza axít Các kỹ thuật dựa ba nguyên lý phản ứng hóa học (PAS), khuếch tán vật lý (Sudan B) enzym (6 kỹ thuật lại) Hai kỹ thuật nhuộm PAS Sudan B có cải tiến, riêng kỹ thuật nhuộm enzym phát triển mạnh kể từ tìm phản ứng tạo chất màu với xúc tác enzym theo nguyên lý hình thành phẩm màu azo vào năm 50 kỷ XX 1.2 Nghiên cứu nước nhuộm hóa học tế bào Từ đầu năm 1970, môn Huyết học-Truyền máu triển khai kỹ thuật nhuộm hóa học tế bào khoa Huyết học-Truyền máu Bệnh viện Bạch Mai Một số tác giả như: Lê Đức Ngọc, Nguyễn Đình Triệu, Lưu Văn Bôi tiến hành số nghiên cứu chế phản ứng, tổng hợp chất, đánh giá mối tương quan hoạt tính-cấu trúc cải tiến phương pháp đánh giá phương pháp nhuộm hóa học tế bào Các kết giúp nâng cao chất lượng kỹ thuật nhuộm ứng dụng chẩn đoán dòng tế bào phục vụ cho công tác điều trị bệnh bạch cầu 1.3 Kít nhuộm hóa học tế bào Các kít thường tiến hành qua bước sau: Làm tiêu Phản ứng Nhuộm Cố định hóa học Tế bào Tế bào Nhuộm Nhuộm bạch cầu bạch cầu lên hồng cầu chưa cố cố định màu định chất Như vậy, nhuộm hóa học tế bào dùng phản ứng hóa màu phản ứng xúc tác enzym để phát chất hóa học có tế bào Sự xuất màu chứng tỏ có chất cần phát cường độ màu phụ thuộc vào nồng độ chúng có tế bào Các kỹ thuật cần đạt độ nhạy độ đặc hiệu cần thiết để đảm bảo tính xác kết xét nghiệm 1.4 Ứng dụng phương pháp nhuộm hóa học tế bào y học kỹ thuật nhuộm hóa học tế bào sở để chẩn đoán phân biệt bệnh bạch cầu kinh với nhiễm trùng bạch cầu đơn nhân dòng tế bào bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB 1.5 Các công cụ toán học sử dụng nghiên cứu y học Kế hoạch hóa thực nghiệm nhằm tìm điều kiện tối ưu để đạt kết nhuộm tốt phải dựa công cụ toán học Các phương pháp tối ưu hóa thực nghiệm đơn hình khảo sát mặt mục tiêu thường hay sử dụng nghiên cứu Hiện phần mềm thống kê như: SPSS, Modde, Excel hỗ trợ tốt cho việc xử lý liệu kế hoạch hóa thực nghiệm CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu 202 bệnh nhân có định chọc tủy Viện Huyết học-Truyền máu trung ương 2.2 Các phương pháp nghiên cứu sử dụng nghiên cứu - Nghiên cứu mô tả cắt ngang - Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang Nhuộm 10 kỹ thuật theo hướng dẫn kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC sản phẩm đề tài cấp mang mã số: BH - 2011 BV198 - 11  Kỹ thuật nhuộm hình thái tế bào thuốc nhuộm giemsa;  Kỹ thuật nhuộm glycogen bạch cầu thuốc thử Schiff;  Kỹ thuật nhuộm lipit bạch cầu thuốc thử Sudan B;  Kỹ thuật nhuộm peroxidaza bạch cầu chất benzidin;  Kỹ thuật nhuộm esteraza đặc hiệu bạch cầu chất naphtol ASD 2-cloaxetat;  Kỹ thuật nhuộm esteraza không đặc hiệu bạch cầu chất naphtol AS axetat;  Kỹ thuật nhuộm esteraza đặc hiệu bạch cầu chất naphtol AS axetat với chất ức chế NaF;  Kỹ thuật nhuộm photphataza axit bạch cầu chất naphtol AS-BI photphat pH axit;  Kỹ thuật nhuộm photphataza kiềm bạch cầu chất naphtol AS-BI photphat pH kiềm;  Kỹ thuật nhuộm nguyên hồng cầu tế bào lưới nội mô ứ sắt Kali Feroxyanua CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu Bệnh bạch cầu cấp bệnh lý ác tính hệ tạo máu đặc trưng tăng sinh tích tụ tế bào non máu tủy xương Trong tổng số 202 mẫu chọc tủy lần đầu viện Huyết học - Truyền máu Trung ương có 142 trường hợp chẩn đoán ban đầu mắc bạch cầu cấp có 60 trường hợp kết luận thể bệnh, dựa vào lâm sàng mức độ chẩn đoán thể bệnh đạt tỷ lệ thấp (42,3%) Do cần kết hợp nhiều phương pháp chẩn đoán khác Tiêu chuẩn FAB (1986) sử dụng kết hình thái học-nhuộm hoá học tế bào, marker di truyền làm sở để phân loại thể bệnh dòng tế bào bệnh bạch cầu cấp nhằm chẩn đoán lựa chọn phác đồ điều trị cho bệnh nhân đạt hiệu cao [33, 36, 37, 39, 40] Bảng 3.1 Tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp Kết luận Bạch cầu cấp Bệnh khác Tổng Số lượng 60 142 202 Tỷ lệ (%) 29,7 70,3 100 Trong tổng số 202 trường hợp chọc tủy lần đầu viện Huyết học Truyền máu Trung ương có 60 trường hợp có kết luận thể bệnh chiếm 29,7% Tỷ lệ tương đương với công bố Trần Thị Minh Hương cộng (32.1%) Bệnh viện Bạch Mai [1] Bảng 3.2 Phân loại bạch cầu cấp theo giới tính Giới tính Nam Nữ Tổng Số lượng 28 32 60 Tỷ lệ (%) 46,7 53,3 100 Về giới: Tỷ lệ mắc bệnh nữ giới 53,3%, cao nam giới cao so với công bố Siegel M P H R., cộng ghi nhận Mỹ năm 2014 0,756 (23.370 nữ/30.900 nam) [52] Sự khác ảnh hưởng môi trường sống thói quen sinh hoạt người Mỹ Việt Nam số lượng mẫu thu thập thấp chưa mang tính đại diện Hình 3.1 Biểu đồ phân loại bạch cầu cấp theo độ tuổi giới tính Về độ tuổi: Qua hình 3.1 cho thấy bệnh gặp lứa tuổi, nam tần suất mắc bệnh tỷ lệ nghịch với độ tuổi, tuổi lao động chiếm tỷ lệ cao (21,5%) Ngược lại, nữ giới độ tỷ lệ mắc bệnh cao độ tuổi lao động (20,0%) 3.2 Nhóm bạch cầu cấp dòng lympho 3.2.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh bạch cầu cấp dòng Lympho Bảng 3.3 Bảng phân loại bạch cầu cấp dòng lympho theo giới tính Giới tính Nam Nữ Tổng Số lượng 14 11 25 Tỷ lệ (%) 56,0 44,0 100 Về giới tính: bệnh gặp giới Tuy nhiên, tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho nam cao nữ, nam chiếm 56,0%, nữ chiếm 44,0 % (nam/nữ =1,3) Hình 3.3 Biểu đồ phân loại bệnh bạch cầu cấp dòng lympho theo độ tuổi Về độ tuổi: Mẫu nghiên cứu có tuổi thấp tháng tuổi cao 93 tuổi, bệnh gặp lứa tuổi Theo tiêu chuẩn quy định độ tuổi lao động người Việt Nam: độ tuổi lao động nam giới từ 18-60 tuổi, độ tuổi lao động nữ giới từ 18 - 55 tuổi Qua hình 3.3 cho thấy tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho < 18 tuổi chiếm tỷ lệ cao (60%) Kết phù hợp với công bố tác giả nước Theo Trần Thị Hồng Hà (2004), độ tuổi mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho hay gặp từ 4-5 tuổi [5] Nguyễn Công Khanh (1987) thấy gần 50% trẻ mắc bệnh tuổi tỷ lệ giảm dần trẻ lớn [8] Theo Bùi Ngọc Lan (2007), độ tuổi mắc bệnh trung bình 6,0 ± 3,8 [9] Đối với người 16 tuổi, nhiều nghiên cứu cho thấy Việt Nam, tỷ lệ người mắc bệnh trẻ tuổi chiếm tỷ lệ cao Nghiên cứu Phạm Quang Vinh (2003), có 256 bệnh nhân có 40,0% số bệnh nhân 30 tuổi [24] 3.2.2 Phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho sử dụng kit nhuộm HICYTEC a) Phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho theo tiêu chuẩn FAB Bảng 3.4 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho Kết kít HICYTEC Thể bệnh Số lượng Tỷ lệ (%) L1 L2 23 92 L3 0 Tổng cộng 25 100 Kết bảng 3.4 cho thấy tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp thể L2 gặp nhiều (chiếm 92%), tiếp đến thể L1 (chiếm 8%) không gặp trường hợp thể L3 Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Thị Minh An (1995) [1], Lâm Thị Mỹ cộng (2004) thấy thể L2 chiếm tỷ lệ cao bạch cầu cấp dòng lympho [10] Tuy vậy, khác với nghiên cứu tác giả C H Pui (2001) tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho hầu hết có phân loại theo FAB thuộc thể L1 chiếm tới 70% [48] b) Đánh giá mức độ phù hợp phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho kít nhuộm đồng HICYTEC so với kết chẩn đoán xác định Viện Huyết học-Truyền máu trung ương Bảng 3.5 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ kít HICYTEC kết chẩn đoán xác định Viện Huyết học-Truyền máu trung ương bệnh nhân Kết TT Mã BN Họ tên Năm sinh Ngày XN luận Kết luận thể bệnh viện sử dụng HH- kit TM HICYTEC TW 15010165 Nguyễn Thị L 1949 30/04/2015 L2 L2 15013692 Dương Ngọc L 2013 28/05/2015 L2 L2 15013057 Nguyễn Sơn H 2013 22/05/2015 L2 L2 15012072 Nguyễn Mạnh D 2007 14/05/2015 L2 L2 14034835 Lưu Kế X 1954 01/10/2014 L2 L2 15011022 Nguyễn Thị Đ 1936 11/05/2015 L2 L2 15011378 Vũ Trung T 2010 11/05/2015 L2 L2 15010693 Vũ Thị Đ 1947 13/05/2015 L2 L2 15011337 Phùng Thị A 2012 08/05/2015 L2 L2 10 15011154 Ngô Văn Tr 2008 07/05/2015 L2 L2 11 15009721 Tô Phương L 2008 30/04/2015 L2 L2 12 14035107 Trương Thị T 1994 27/04/2015 L2 L2 13 15010527 Trần Đức A 2013 28/04/2015 L2 L2 14 14019748 Đỗ Minh T 2013 27/04/2015 L2 L2 15 15008709 Lê Ngọc Bảo P 2015 27/04/2015 L2 L2 16 15010257 Nguyễn Hữu T 2000 24/04/2015 L2 L2 17 1992 31/03/2015 L2 L2 18 14037484 Nguyễn Hiền A 2012 10/10/2014 L2 L2 19 14037438 Giàng Thị N 2012 10/10/2014 L2 L2 856 Nguyễn Văn T Kết TT Mã BN Họ tên Năm sinh Ngày XN luận Kết luận thể bệnh viện sử dụng HH- kit TM HICYTEC TW 20 14038058 Lê Phạm V 1963 17/10/2014 L2 L2 21 14038278 Trần Hoàng Th 1997 21/10/2014 L2 L2 22 14035789 Doãn Hữu T 1922 26/09/2014 L1 L1 23 14087493 Nguyễn Ngọc A 2013 10/10/2014 L2 L2 24 14035765 Nguyễn Trọng T 1998 22/09/2014 L1 L1 25 14035113 Hoàng Mai P 2009 15/09/2014 L2 L2 Tổng hợp lại kết bảng phân loại thể bệnh bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho Thể bệnh L1 L2 L3 Tổng cộng Chẩn đoán xác định Viện HH-TMTW Số Tỷ lệ (%) lượng 23 92 0 25 100 Kết kít HICYTEC Số Tỷ lệ lượng (%) 23 92 0 25 100 Sai khác Số lượng 0 Tỷ lệ (%) 0 0 Như vậy, mức độ phù hợp phân loại thể bệnh theo phương pháp hình thái học-hóa học tế bào kít nhuộm đồng HICYTEC so với kết chẩn đoán xác định Viện Huyết học-Truyền máu trung ương dựa phương pháp: miễn dịch, di truyền hình thái học-hóa học tế bào đạt 100% theo tiêu chuẩn FAB ( bảng 3.6) Kết cao so với nghiên cứu 10 Trần Ngọc Vũ cộng (2014) sử dụng phương pháp nhuộm: Giem sa, peroxidaza, sudan B, PAS esteraza không đặc hiệu tự pha độ nhạy 100%, độ đặc hiệu 73,77%, giá trị dự báo phân loại dòng lympho 88,88% Sự phù hợp chẩn đoán hình thái-hóa học tế bào miễn dịch tế bào 89,10% [25] 3.2.3 Kết nhuộm photphataza axit bạch cầu xác định loại lympho T bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lympho Bảng 3.7 Kết nhuộm photphataza axit phân loại dòng lympho T Dòng tế bào Số lượng Tỷ lệ (%) Lympho B 24 80 Lympho T 20 Tổng 30 100 Bảng 3.7 cho thấy, tỷ lệ bệnh bạch cầu cấp lympho dòng B (80%) cao so với dòng T (20%) Kết tương tự so với tác giả C H Pui [48], cao so với nghiên cứu Bùi Ngọc Lan (2007) tỷ lệ dòng lympho B chiếm 70,1%, dòng lympho T chiếm 25,8% [9] Tủy đồ có hạn chế phân biệt dòng B T kỹ thuật miễn dịch tế bào Trong dựa vào hóa học tế bào nhuộm photphataza axit bạch cầu phân loại dòng tế bào lympho B T Điều có ý nghĩa lớn cần thiết cho bác sĩ việc chẩn đoán, tiên lượng bệnh lựa chọn phác đồ điều trị 3.3 Nhóm bạch cầu cấp dòng tủy 3.3.1 Phân nhóm bạch cầu cấp dòng tủy theo giới tính tuổi Trong số 202 bệnh nhân tự đến có triệu chứng lâm sàng định hướng chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp chẩn đoán bạch cầu cấp bệnh viện khác gửi đến viện Huyết học-Truyền máu trung ương, phát 14,85% bệnh nhân mắc bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Bảng phân bố bệnh bạch cầu cấp theo giới tính thể bảng 3.8 11 Bảng 3.8 Bảng phân bố bệnh bạch cầu cấp dòng tủy theo giới tính Giới Số trường hợp Tỷ lệ Nam 10 36,67% Nữ 20 63,33% Tổng 30 100% Trong đó, bạch cầu cấp dòng tủy gặp nữ (63,33%) cao so với nam giới lần, tỷ lệ cao nhiều so với công bố Siegel M P H R., cộng (nữ chiếm 46,4%) Mỹ năm 2012 [51] Bảng 3.9 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tủy theo giới tính Nam Thể Nữ Tổng cộng bệnh Số lượng M0 0,00% 3,3% 3,33% M1 3,33% 6,7% 10,00% M2 3,33% 16,7% 20,00% M3 6,67% 3,3% 10,00% M4 16,67% 26,7% 13 43,33% M5 0,00% 10,0% 10,00% M6 3,33% 0,0% 3,33% M7 0,00% 0,0% 0,00% Tổng 10 33,33% 20 66,67% 30 Tỷ lệ Số lượng Tỷ lệ Số lượng Tỷ lệ 100% Kết bảng 3.9 cho thấy thể bệnh M4 chiếm tỷ lệ cao hai giới (chiếm 43,33%) Không gặp thể M0 nam thể M7 hai giới Một trường hợp bệnh nhân thể M0 trường hợp M5 gặp bệnh nhân nữ Bên cạnh gặp trường hợp mắc thể M6 nam giới Đối với thể M1, M2, M3 M4 gặp nam nữ thể M2, M3 có chênh lệch rõ số trường hợp mắc: thể M2 tỷ lệ nữ/nam=5/1, thể M3 có nam/nữ= 2/1 12 Về độ tuổi: Kết nghiên cứu cho thấy bệnh bạch cầu cấp dòng tủy gặp lứa tuổi gặp cao tuổi 18-60 Kết phù hợp với kết nghiên cứu Phan Nguyễn Thanh Vân, Nguyễn Hữu Toàn (1999) cho bệnh bạch cầu cấp gặp độ tuổi, tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp chủ yếu độ tuổi 15 chiếm 77,8% [19, 20] 3.3.2 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tủy theo kết chẩn đoán Viện Huyết học-Truyền máu trung ương Kết phân loại thể bệnh Viện Huyết học-Truyền máu trung ương dựa phương pháp: hình thái học-hóa học tế bào, miễn dịch di truyền Kết chẩn đoán Viện Huyết học-Truyền máu trung ương cho thấy: Tỷ lệ bệnh nhân mắc thể M4 cao 43,4%, gấp khoảng lần so với số trường hợp mắc thể M2 gấp khoảng lần so với thể bệnh M1, M3 M5 Không có trường hợp bệnh nhân mắc thể M7 (xem hình 3.14) Hình 3.14 Tỷ lệ bệnh nhân bạch cầu cấp theo kết chẩn đoán Viện Huyết học-Truyền máu trung ương Kết khác với nghiên cứu Phan Nguyễn Thanh Vân (tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng tủy chủ yếu gặp thể M2 chiếm 66,1% thống kê cỡ mẫu 162 mẫu) [21] Sự sai khác cỡ mẫu nghiên cứu nhỏ (30) nên chưa có tính đại diện cao thời gian nghiên cứu ngắn 13 3.3.3 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ kit nhuộm HICYTEC Bảng 3.10 Kết phân loại thể bệnh kit nhuộm HICYTEC Kết sử dụng kit HICYTEC Thể bệnh Số lượng Tỷ lệ M0 0% M1 13,3% M2 20,0% M3 10,0% M4 12 40,0% M5a 10,0% M5b 3,3% M6 3,3% M7 0% Tổng 30 100% 3.3.4 Mức độ phù hợp chẩn đoán thể bệnh bạch cầu cấp dòng tủy kít HICYTEC kết luận viện Huyết học-Truyền máu TW 14 Bảng 3.11 Kết chẩn đoán thể bệnh bạch cầu cấp dòng tủy kít HICYTEC kết luận viện Huyết học-Truyền máu TW đôi Kết TT Mã BN Họ tên Năm sinh luận Kết luận Ngày thể bệnh xét viện sử dụng nghiệm HH- kit TM HICYTEC TW 14036597 Phạm Thị H 1989 10/01/2014 M4 M4 14038360 Nguyễn Đức D 1962 22/10/2014 M4 M4 14037630 Bùi Danh T 1988 22/10/2014 M3 M3 14037167 Chu Quyền L 1988 22/20/2014 M4 M4 15012076 Hồ Ngọc A 2007 15/05/2015 M2 M2 15012171 Lê Thị T 1956 12/05/2015 M5a M5 15011072 Nguyễn Như T 1961 11/05/2015 M4 M4 15009749 Trần Thị T 1960 11/05/2015 M5a M5 15011309 Lê Duy S 1947 11/05/2015 M1 M1 10 15010643 Nguyễn Văn D 1987 05/05/2015 M4 M4 11 15009702 Dương Quang T 1952 27/04/2015 M6b M6 12 1982 27/04/2015 M5b M5 13 15010303 Phan Thị D 1953 25/04/2015 M2 M2 14 15008623 Vũ Thị N 1936 13/04/2015 M1 M1 15 15009229 Đào Minh H 2007 14/04/2015 M2 M2 16 15009993 Nguyễn Đình T 1956 22/10/2015 M4 M4 17 15008651 Bùi Thị T 1972 09/04/2015 M2 M2 18 15008364 Nguyễn Thị M 1962 08/04/2015 M3 M3 19 15008212 Phạm Thị L 1999 07/04/2015 M4 M4 1501908 Đặng Thị Thu M 15 Kết TT Mã BN Họ tên Năm sinh luận Kết luận Ngày thể bệnh xét viện sử dụng nghiệm HH- kit TM HICYTEC TW 20 15007750 Bùi Thị C 1942 03/04/2015 M2 M2 21 15007543 Nguyễn Thị D 1940 01/04/2015 M2 M2 2002 28/10/2014 M4 M4 23 14034995 Đỗ Thị P 1940 12/09/2014 M4 M5a 24 14035097 Đặng Hồng M 2010 11/09/2014 M4 M4 25 14034414 Hà Thị Thu H 2004 9/09/2014 M4 M4 26 14034408 Nguyễn Văn T 1960 8/09/2014 M3 M3 27 14033993 Nguyễn Thanh T 1997 28/08/2014 M0 M1 1998 29/08/2014 M4 M4 29 14008990 Vi Văn P 1996 29/08/2014 M4 M4 30 12017400 Lê Thị L 1994 24/04/2015 M1 M1 22 14038805 28 14034192 Nguyễn Thị Kim A Hoàng Thị Vân A Mức độ phù hợp phân loại thể bệnh theo phương pháp hình thái học-hóa học tế bào kít nhuộm đồng HICYTEC so với kết chẩn đoán xác định Viện Huyết học-Truyền máu trung ương dựa phương pháp: miễn dịch, di truyền hình thái học-hóa học tế bào đạt 28/30 trường hợp (đạt 93,3%) Kết cao so với công bố Trần Ngọc Vũ cộng (2014) tỷ lệ phù hợp chẩn đoán hình thái học-hóa học tế bào miễn dịch 89,1 [25] Nguyễn Hữu Toàn (1999) 29,7% [19] 16 3.4 Phân loại dòng tế bào bạch cầu cấp thể lai lympho - tủy (Lai L-T) Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp lai lympho - tuỷ kít HICYTEC kết chẩn đoán xác định Viện Huyết học-Truyền máu trung ương bệnh nhân thể bảng 3.12 Bảng 3.12 Kết phân loại thể bệnh bạch cầu cấp lai lympho-tủy Kết luận TT Mã BN Họ tên Năm sinh Ngày XN Kết luận viện thể bệnh sử HH-TM dụng kit TW HICYTEC 15011531 Lý Trọng Đ 2009 21/05/2015 Lai L-T Lai L-T 15011862 Lê Tiến N 2012 13/05/2012 Lai L-T Lai L-T 15009743 Trần Văn C 1989 08/05/2015 Lai L-T Lai L-T 497 Đỗ Hoàng P 1986 25/04/2015 Lai L-T Lai L-T 15008086 Ngô Quang C 1940 09/04/2015 Lai L-T Lai L-T Kết nhuộm hóa học tế bào kít nhuộm HICYTEC cho thấy có trường hợp bạch cầu cấp thể lai lympho-tủy chiếm 8,3% (xem bảng 3.4) Tỷ lệ cao so với nghiên cứu Nguyễn Triệu Vân cs (2004) bạch cầu cấp thể lai tủy-lympho chiếm 6,2% [22] Đây thể hỗn hợp dòng tế bào dòng lympho dòng tủy Khó khăn lớn việc phân loại thể bệnh bạch cầu cấp lai lympho - tủy sử dụng phương pháp hình thái học - hóa học tế bào dùng để phân loại thể bệnh tỷ lệ tế bào dòng lympho dòng tủy biến động mẫu tủy Một số tế bào đột biến số chất hóa học enzym nguyên sinh chất tế bào nên dẫn đến không nhận định kết 17 3.5 Kết nhuộm photphataza kiềm bạch cầu Bảng 3.13 Kết nhuộm photphataza kiềm bệnh nhân bạch cầu cấp Điểm nhuộm Số lượng Tỷ lệ 146 1,7% Tổng 60 100% Trong tổng số 60 trường hợp chẩn đoán bạch cầu cấp hầu hết giảm điểm nhuộm (71,7%) 20 điểm, có trường hợp tăng điểm có định hướng nhiễm trùng (xem Bảng 3.13) Nhuộm photphataza kiềm bạch cầu dùng để phân biệt bệnh bạch cầu kinh bệnh bạch cầu cấp hội chứng nhiễm trùng bạch cầu đơn nhân Nếu bệnh bạch cầu kinh thường có tượng giảm điểm nhuộm (có thể giảm đến mức điểm Trong trường hợp bạch cầu cấp điểm nhuộm mẫu tuỷ thường nằm mức giảm vừa có tăng cao tế bào blast Nếu trường hợp bị nhiễm trùng (một triệu chứng bệnh) điểm nhuộm mẫu tăng lên dấu giúp bác sỹ lâm sàng theo dõi tiên lượng bệnh Tuy vậy, biến động lớn tế bào thành phần tế bào mẫu tuỷ bệnh nhân bạch cầu cấp nên xét nghiệm thường có giá trị có giá trị theo dõi mang tính động học [40] Hình 3.56 thể phản ứng nhuộm photphataza kiềm dương tính, nguyên sinh chất tế bào bắt màu đỏ nhân hồng cầu màu xanh 18 Hình 3.56 Ảnh nhuộm photphataza kiềm mẫu tủy bệnh nhân Trần Văn C 3.6 Kết nhuộm sắt mẫu tủy bệnh nhân bạch cầu cấp Viện HH-TM trung ương Bảng 3.14 Kết nhuộm Perls mẫu tủy bị bệnh bạch cầu cấp Giới Số trường hợp Tỷ lệ Có tế bào mạng lưới nội mô sắt 10,0% Không có tế bào mạng lưới nội mô sắt 54 90,0% 60 100% Tổng Nhuộm sắt (Perls) phát nguyên hồng cầu sắt tế bào mạng lưới nội mô sắt [42] (hình 3.57) Kết nhuộm Perls kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC cho thấy 60 bệnh nhân bạch cầu cấp có trường hợp (chiếm 10,0%) có tế bào mạng lưới nội mô sắt (xem bảng 3.14) Theo Elisabeth Rybo cs tế bào mạng lưới nội mô sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt so với nguyên hồng cầu sắt [50] Hình 3.57 Ảnh nhuộm Perls tế bào lưới nội mô sắt mẫu tủy bệnh nhân Trương Thị T 19 KẾT LUẬN Sử dụng kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC đồng 10 kỹ thuật để phân loại thể bệnh chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp 202 mẫu tủy bệnh nhân chọc tủy lần đầu chưa điều trị có triệu chứng nằm tiêu chuẩn mặt lâm sàng chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp, đề tài thu số kết sau: Tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp 31,2%, cao bạch cầu cấp dòng tủy chiếm 50,0%, bạch cầu cấp dòng lympho chiếm 41,7% thấp bạch cầu cấp lai lympho - tủy chiếm 8,3% Bạch cầu cấp dòng lympho chủ yếu trẻ em chiếm 60% có tỷ lệ nam giới mắc bệnh cao nữ giới, nam/nữ = 1,3 Đã đánh giá giá trị sử dụng kít phân loại thể bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB đạt phù hợp 100% dòng lympho 93,3% dòng tủy so với kết chẩn đoán Viện Huyết học - Truyền máu trung ương phương pháp hình thái học, miễn dịch di truyền Có trường hợp bạch cầu cấp thể lai lympho-tủy, mức độ phù hợp chẩn đoán đạt 100% Đã đánh giá giá trị kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm photphataza kiềm nhuộm Perls bệnh nhân bạch cầu cấp: 20% mẫu tủy có photphataza axit dương tính định hướng dòng lympho T; 1,7% có điểm nhuộm photphataza kiềm tăng định hướng có nguy nhiễm trùng; 3,3% mẫu tủy gặp tế bào mạng lưới nội mô sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt so với nguyên hồng cầu sắt KIẾN NGHỊ Sử dụng kít nhuộm HICYTEC đồng 10 kỹ thuật để nhuộm mẫu tủy chọc tủy lần đầu phòng xét nghiệm Huyết học để xác định thể bệnh 20