Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học và di truyền trên những bệnh nhân bạch cầu cấp đã được chẩn đoán thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB.
MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Tên viết tắt ALL Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho Acute lymphoblastic leukemia AML Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Acute myeloid leukemia BCC Bạch cầu cấp Leukemia CE Cacboxyl esteraza Carboxyl esterase CS Cộng sự et al CD Dấu ấn miễn dịch Cluster of Differenciation FAB Hội các nhà huyết học Pháp Mỹ Anh French American British HHTB Nhuộm Hóa học tế bào Cytochemistry HLA DR Kháng nguyên bạch cầu người Human Leukocyte antigen 10 LA Bệnh bạch cầu cấp Acute leukemia Tên Tiếng Việt Tên Tiếng Anh 11 L1 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho đã biệt hóa Homogenous small blast type 12 L2 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho chưa biệt hóa Heterogenous blast type 13 L3 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho loại Burkitt Homogenous lager blast type 14 M0 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy biệt hóa tối thiếu Minimally differentiated acute myeloid 15 M1 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy khơng có tế bào trưởng thành Acute myeloblastic leukemia, without maturation 16 M2 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy có tế bào trưởng thành Acute myeloblastic leukemia, with granulocytic maturation 17 M3 Bệnh bạch cầu cấp dòng tiền tủy Acute promyelocytic leukemia 18 M4 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Acute myelomonocytic mono leukemia 19 M5 Bệnh bạch cầu cấp dòng mono Acute mono 20 M6 Bệnh bạch cầu cấp dòng hồng cầu Acute erythroid leukemia 21 M7 Bệnh bạch cầu cấp dòng Acute megakaryoblastic tiểu cầu leukemia 22 NE Esteraza không đặc hiệu Nonspecific esterase Esteraza không đặc hiệu ức chế bằng NaF Nonspecific esteraza NaF inhibitor Photphataza axit Acid photphatase PAL Photphataza kiềm Alkaline photphatase 26 PAS Periodic Axit Schiff Periodic Acid Schiff 27 PER Peroxydaza Peroxidase 28 SD Sudan đen Sudan black 29 SLTBT Số lượng tế bào tủy The number of myeloid cells 30 WHO Tổ chức Y tế thế giới World Heath Organization 23 NE NaF 24 PA 25 DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU Bệnh bạch cầu cấp là nhóm bệnh máu ác tính của hệ thống tạo máu với đặc trưng bởi sự tăng sinh và tích tụ tế bào non trong máu và tủy xương. Bạch cầu cấp được chia thành 2 nhóm là bạch cầu cấp dòng tủy và bạch cầu cấp dòng lympho. Bạch cầu cấp dòng tủy là kết quả của sự tích lũy tế bào non bất thường trong tủy xương. Bạch cầu cấp dòng lympho là bệnh tăng sinh ác tính trong q trình tạo máu dòng lympho. Những tế bào này lấn át sự sinh máu bình thường trong tủy xương, chúng có thể thốt ra ngồi máu ngoại vi và thâm nhiễm vào các quan nội tạng [23]. Bệnh có các hội chứng: Thiếu máu, xuất huyết, nhiễm trùng và dẫn tới tử vong nếu khơng được phát hiện và điều trị kịp thời. Vì vậy, việc xác định chính xác thể bệnh cũng như dòng tế bào bị ung thư có vai trò quyết định trong điều trị. Hiện nay, việc phân loại dòng tế bào và thể bệnh bạch cầu cấp dựa trên một trong hai tiêu chuẩn là FAB và WHO. Tiêu chuẩn FAB do các nhà Huyết học PhápAnhMỹ đưa ra năm 1976 là tổng hợp kết quả hình thái học và hóa học tế bào, năm 1986 tiêu chuẩn này đã bổ sung thêm kết quả miễn dịch và di truyền [15, 17]. Nhuộm hóa học tế bào gồm 8 kỹ thuật: PeriodicAcid Schiff (PAS), sudan black (SD), peroxidaza (PER), esteraza đặc hiệu, esteraza khơng đặc hiệu ức chế bằng NaF và khơng ức chế, photphataza kiềm và axit. Ưu điểm của phương pháp nhuộm hóa học tế bào: Rẻ tiền, giá thành chỉ bằng 1/4 so với phương pháp miễn dịch và bằng 1/10 so với phương pháp di truyền, khơng cần máy móc hiện đại, dễ triển khai. Hiện nay, các bộ kít nhuộm có bán trên thị trường là các kít đơn, giá thành cao và có những nhược điểm: kỹ thuật nhuộm nằm nên có nhiều cặn, quy trình nhuộm khác nhau về thời gian, số bước nhuộm, hóa chất cố định khác nhau, bước tẩy màu của kỹ thuật nhuộm Sudan và Periodic Acid Schiff khó đồng nhất, nhuộm nền thiếu tương phản, chất màu dễ hòa tan trong dầu soi kính nên khó hội chẩn tiêu bản nhiều lần. Tại Việt Nam, các thuốc thử hầu hết là tự pha kết hợp với các yếu điểm trên nên độ nhạy, độ đặc hiệu còn thấp. Theo Trần Ngọc Vũ và cộng sự (2014) tỷ lệ phù hợp chẩn đốn giữa hình thái họchóa học tế bào và miễn dịch là 89,1%, giá trị dự báo đối với bệnh bạch cầu cấp dòng lympho là 88,88% và độ đặc hiệu là 73,77% [25]. Theo tác giả Nguyễn Hữu Tồn thì việc phân loại dòng tế bào theo tiêu chuẩn FAB dựa trên phương pháp nhuộm hóa học vẫn cần phải có sự điều chỉnh tới 29,7% nhờ vào kỹ thuật miễn dịch và di truyền [19]. Hiên nay, tác gi ̣ ả Trần Văn Tính, Trung tâm Huyết học Truyền máu, Bộ Cơng an đã nghiên cứu và chế tạo thành cơng kít nhuộm hóa học tế bào đồng HICYTEC gồm 10 kỹ thuật: Giemsa, PeriodicAxit Schiff (PAS), Peroxidaza, Sudan B, Esteraza đặc hiệu, Esteraza khơng đặc hiệu, Esteraza khơng đặc hiệu ức chế bằng NaF, Photphataza kiềm, Photphataza axit, Perls. Bộ kít đã cơ bản khắc phục được các yếu điểm ở trên Nhằm đánh giá giá trị sử dụng của bộ kít, tiến tới có thể thay thế hàng nhập ngoại, đề tài “Ứng dụng bộ kít nhuộm hóa học tế bào để phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB” là đề tài có ý nghĩa khoa học, thực tiễn, kinh tế xã hội cấp thiết Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học và di truyền trên những bệnh nhân bạch cầu cấp đã được chẩn đốn thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB (1986) Nội dung nghiên cứu: Thống kê đặc điểm bệnh bạch cầu cấp trên các bệnh nhân được chọc tủy lần đầu tại Viện Huyết họcTruyền máu trung ương Đánh giá tính phù hợp của phương pháp nhuộm hóa học tế bào đồng bộ HICYTEC 10 kỹ thuật so với phương pháp hình thái học, miễn dịch và di truyền trên các bệnh nhân đã được chẩn đốn thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB Đánh giá giá trị của kít nhuộm hóa học tế bào đồng bộ HICYTEC, khi nhuộm photphataza kiềm, nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm Perls trên bệnh nhân bạch cầu cấp. CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Q trình sinh máu 1.1.1. Cơ quan sinh máu Cơ quan tạo máu bao gồm: tủy xương, tổ chức lympho (lách, hạch, tuyến ức) và tổ chức võng mơ. Thời kì phơi thai, cơ quan tạo máu gồm có gan, lách, hạch. Sau khi sinh, q trình tạo máu (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu) chỉ xảy ra ở tủy đỏ của các xương. Đến tuổi trưởng thành, q trình sinh máu chỉ còn diễn ra tại đầu các xương dẹt, đầu xương đùi, xương cánh tay và một vài khu vực sinh máu ngồi tủy biệt hóa các dòng lympho T và B [6] 1.1.2. Q trình sinh máu Hiện nay nhiều cơng trình đã chứng minh, các dòng tế bào máu được sinh ra từ tế bào gốc vạn năng. Q trình biệt hóa qua nhiều giai đoạn và tùy theo sự kích thích đặc hiệu mà tế bào gốc vạn năng biệt hóa để tạo thành những tế bào có chức năng cần thiết [11]. Ba kích thích tố chính tạo máu gồm: Erythropoietin tạo hồng cầu, thrombopoietin tạo tiểu cầu và colonystimulating factors cùng với interleukin (IL) kích thích tạo bạch cầu. Q trình sinh máu được điều hòa bởi yếu tố di truyền đặc biệt là các tế bào bị chết theo chương trình [13] 1.2. Bệnh bạch cầu cấp 1.2.1. Khái niệm chung Bệnh bạch cầu cấp là tình trạng bệnh lý cấp tính của tế bào sinh máu với đặc điểm chính là tăng số lượng bạch cầu bất thường ở cả trong tủy xương và ở ngồi máu ngoại vi, tủy xương có trên 30% tế bào non (blast) trong tổng số tế bào có nhân, phá hủy q trình sinh máu bình thường trong tủy và xâm nhiễm vào các cơ quan [12] 1.2.2. Dịch tễ học Theo cơng bố của Rebecca Siegel MPH và cộng sự (2015) trong năm 2014, ở Mỹ ghi nhận 6.250 ca mắc mới bệnh bạch cầu cấp dòng lympho. Tỷ lệ nam (3.100) và nữ (3.150) gần bằng nhau, số tử vong gây ra bởi bệnh này là 1.450 người [52]; Tại Mỹ, hàng năm xuất hiện mới khoảng 2,2 trường hợp bạch cầu cấp dòng tủy trên 100.000 dân và có khoảng 3.000 trường hợp bạch cầu cấp dòng lympho mới trên tồn quốc [44]; Tại Việt Nam, tuy chưa có nghiên cứu nào tiến hành đầy đủ về dịch tễ học của bệnh bạch cầu cấp trên tồn quốc nhưng theo tổng kết tại Viện Huyết họcTruyền máu, Bệnh viện Bạch Mai thì thấy bệnh bạch cầu cấp gặp tỷ lệ cao nhất (32.1%) trong số các bệnh máu đến khám và điều trị tại Bệnh viện Bạch Mai [7] 1.2.3.Các ngun nhân gây bệnh Cho tới nay nguyên nhân gây bệnh chưa sáng tỏ. Tuy nhiên qua nhiều nghiên cứu cho thấy có nhiều yếu tố liên quan tới phát sinh bệnh: Tia xạ: Những người tiếp xúc nhiều với tia ion hóa hay tia xạ thường có nguy cơ bị bạch cầu cấp; Hóa chất: Những người nhiễm mạn tính benzen hay sử dụng hóa chất để chữa bệnh ác tính dễ mắc bệnh bạch cầu cấp; Virus: Human Tcell lymphotropic virus gây bạch cầu cấp dòng lympho, EpsteinBarr virus (EBV) gây ung thư vòm Yếu tố di truyền: Những bệnh nhân bị một số bệnh di truyền như hội chứng Down, hội chứng Bloom, thiếu máu Fanconi có nguy cơ cao bị bạch cầu cấp [12] 1.2.4. Cơ chế bệnh sinh Sự hoạt động của các gen ung thư (oncogene): Các gen bình thường do yếu tố nào đó tác động trở thành các gen bất thường gây ung thư gọi là gen ung thư. Sản phẩm của các gen ung thư là các protein bất thường, có hoạt tính mạnh, gây rối loạn q trình sinh sản và biệt hóa của tế bào; 10 Hinh 3.46. ̀ Ảnh nhuộm PAS mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.47. ̀ Ảnh nhuộm PAS mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Hình 3.48 và 3.49 là ảnh nhuộm peroxidaza bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lai lympho tủy. Các tế bào blast dòng tủy dương tính mạnh có màu vàng nâu trong bào tương. Các tế bào blast lympho âm tính khơng bắt màu vàng nâu trên nguyên sinh chất Hinh 3.48. ̀ Ảnh nhuộm peroxidaza mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.49. ̀ Ảnh nhuộm peroxidaza mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Hình 3.50 và 3.51 là ảnh nhuộm Sudan của bệnh nhân bạch cầu cấp lai lympho tủy. Các tế bào blast dòng tủy cho kết quả dương tính mạnh, có nhiều hạt to màu đen trong bào tương thậm chí che kín nhân tế bào. Trên tiêu bản còn có các tế bào blast dòng lympho cho kết quả âm tính 81 Hinh 3.50. ̀ Ảnh nhuộm Sudan B mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.51. ̀ Ảnh nhuộm Sudan B mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Trên hình 3.52 và 3.53 là kết quả nhuộm esteraza đặc hiệu các mẫu lai lymphotủy. Các tế bào blast dòng tủy bắt màu đỏ đậm trên ngun sinh chất xen lẫn các tế bào blast dòng lympho cho kết quả âm tính 82 Hinh 3.52. ̀ Ảnh nhuộm esteraza đặc hiệu Hinh 3.53. ̀ Ảnh nhuộm esteraza đặc mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T hiệu mẫu tủy của bệnh nhân Tr Văn C Phản ứng esteraza khơng đặc hiệu và khơng đặc hiệu ức chế NaF để phân định dòng mono và dòng hạt. Hình 3.54 và 3.55 là hình ảnh nhuộm của bệnh nhân bạch cầu cấp thể lai lympho tủy. Các tế bào lai lympho khơng bị ức chế bởi cơ chất, các tế bào lai dòng tủy thì bị ức chế Hinh 3.54. ̀ Ảnh nhuộm esteraza khơng Hinh 3.55. ̀ Ảnh nhuộm esteraza không đặc đặc hiệu ức chế NaF mẫu tủy của bệnh hiệu mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C nhân Trương Thị T 83 Qua các phản ứng nhuộm trên, trên cùng một vi trường vừa có tế bào blast nhuộm dương tính với dòng lympho (PAS) và tế bào blast nhuộm dương tính với dòng tủy (peroxidaza, sudanB và esteraza đặc hiệu), điều này chứng tỏ trên mẫu tủy xuất hiện tế bào blast của cả hai dòng tủy và lympho vì thế được gọi là thể lai lymphotủy 3.5. Kết quả nhuộm photphataza kiềm bạch cầu Bang ̉ 3.13. Kết quả nhuộm photphataza kiềm trên bệnh nhân bạch cầu cấp Điểm nhuộm Số lượng Tỷ lệ 146 1,7% Tổng 60 100% Trong tổng số 60 trường hợp được chẩn đốn bạch cầu cấp hầu hết là giảm điểm nhuộm (71,7%) dưới 20 điểm, chỉ có một trường hợp tăng điểm và như vậy có định hướng nhiễm trùng (xem Bảng 3.13). Nhuộm photphataza kiềm bạch cầu dùng để phân biệt bệnh bạch cầu kinh và bệnh bạch cầu cấp cũng như hội chứng nhiễm trùng bạch cầu đơn nhân. Nếu là bệnh bạch cầu kinh thường có hiện tượng giảm điểm nhuộm (có thể giảm đến mức 0 điểm. Trong trường hợp bạch cầu cấp điểm nhuộm của các mẫu tuỷ thường nằm trong mức giảm vừa do có sự tăng cao của các tế bào blast. Nếu trong trường hợp bị nhiễm trùng (một trong những triệu chứng của bệnh) thì điểm nhuộm của mẫu sẽ tăng lên và là chỉ dấu giúp các bác sỹ lâm sàng theo dõi tiên lượng bệnh. Tuy vậy, do sự biến động rất lớn của các tế bào và thành phần tế bào trong mẫu tuỷ của các bệnh nhân bạch cầu cấp nên xét nghiệm thường ít có giá trị và chỉ có giá trị khi theo dõi mang tính động học [40] 84 Hình 3.56 thể hiện phản ứng nhuộm photphataza kiềm dương tính, ngun sinh chất tế bào bắt màu đỏ trên nền nhân và hồng cầu màu xanh Hình 3.56. Ảnh nhuộm photphataza kiềm mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C 3.6. Kết quả nhuộm sắt trên mẫu tủy của bệnh nhân bạch cầu cấp tại Viện HH TM trung ương Bảng 3.14. Kết quả nhuộm Perls trên các mẫu tủy bị bệnh bạch cầu cấp Giới Số trường hợp Tỷ lệ Có tế bào mạng lưới nội mơ sắt 10,0% Khơng có tế bào mạng lưới nội mơ sắt 54 90,0% Tổng 60 100% Nhuộm sắt (Perls) có thể phát hiện các ngun hồng cầu sắt hoặc các tế bào mạng lưới nội mơ sắt [42] (hình 3.57). Kết quả nhuộm Perls bằng bộ kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC cho thấy trong 60 bệnh nhân bạch cầu cấp thì có 6 trường hợp (chiếm 10,0%) có tế bào mạng lưới nội mơ sắt (xem bảng 3.14) Theo Elisabeth Rybo và cs thì tế bào mạng lưới nội mơ sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt hơn so với ngun hồng cầu sắt [50] 85 Hình 3.57. Ảnh nhuộm Perls tế bào lưới nội mơ sắt mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T KẾT LUẬN Sử dụng bộ kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC đồng bộ 10 kỹ thuật để phân loại thể bệnh trong ch ẩn đốn bệnh bạch cầu cấp trên 202 mẫu tủy của bệnh nhân chọc tủy lần đầu chưa điều trị có các triệu chứng nằm trong tiêu chuẩn về mặt lâm sàng hoặc đượ c chẩn đốn là bệnh bạch cầu cấp, đề tài đã thu được một số kết quả như sau: 1. Tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp là 31,2%, trong đó cao nhất là bạch cầu cấp dòng tủy chiếm 50,0%, bạch cầu cấp dòng lympho chiếm 41,7% và thấp nhất là bạch cầu cấp lai lympho tủy chiếm 8,3%. Bạch cầu cấp dòng lympho chủ yếu là trẻ em chiếm 60% và có tỷ lệ nam giới mắc bệnh cao hơn nữ giới, nam/nữ = 1,3 2. Đã đánh giá được giá trị sử dụng của bộ kít trong phân loại thể bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chn FAB đ ̉ ạt được sự phù hợp 100% đối với dòng lympho và 93,3% đối với dòng tủy so với kết quả chẩn đốn của Viện Huyết học Truyền máu trung ương bằng các phương pháp hình thái học, miễn dịch và di truyền. Có 5 trường hợp bạch cầu cấp thể lai lymphotủy, mức độ phù hợp trong chẩn đốn cũng đạt 100%. Đã đánh giá được giá trị kít nhuộm hóa học tế bào đồng bộ HICYTEC khi nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm photphataza kiềm và 86 nhuộm Perls trên bệnh nhân bạch cầu cấp: 20% mẫu tủy có photphataza axit dương tính định hướng dòng lympho T; 1,7% có điểm nhuộm photphataza kiềm tăng định hướng có nguy cơ nhiễm trùng; 3,3% mẫu tủy gặp các tế bào mạng lưới nội mơ sắt có giá trị theo dõi tình trạng ứ sắt tốt hơn so với ngun hồng cầu sắt. 87 KIẾN NGHỊ Sử dụng bộ kít nhuộm HICYTEC đồng bộ 10 kỹ thuật để nhuộm các mẫu tủy chọc tủy lần đầu trong các phòng xét nghiệm Huyết học để xác định thể bệnh 88 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Trần Văn Tính, Vũ Thị Thủy, Lê Thị Thanh Thủy, Ngơ Thị Thảo, Đồn Văn Thuyết, Bùi Phương Thuận (2015), “Đánh giá kết quả của bộ kít nhuộm HICYTEC trong chẩn đốn các bệnh bạch cầu trên bệnh nhân chọc tủy lần đầu tại viện Huyết họcTruyền máu trung ương”, Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, tập 19 (4) tr. 508513 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1. Nguyễn Thị Minh An và cộng sự (1995), “Tình hình bệnh lơ xê mi cấp ở một số bệnh viện địa phương và bệnh viện bạch mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học, Đại học Y Hà Nội, tr.185192. Đỗ Thị Vinh An, Phạm Quang Vinh, Phan Văn Chi, Nguyễn Thị Bích Nhi (2010), “Bước đầu tìm hiểu một số biến đổi protein bệnh nhân lơ xê mi cấp dòng lympho tại khoa Huyết học Truyền máu bệnh viện Bạch Mai”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 373, tr.267270 Bộ môn Huyết họcTruyền máu (1984), Kỹ thuật xét nghiệm huyết học và truyền máu, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Trọng Biểu, Từ Văn Mặc (1978), Thuốc thử hữu cơ, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trần Thị Hồng Hà (2004), Nghiên cứu đặc điểm, giá trị của một số yếu tố sinh học và lâm sàng ở trẻ em bị lơ xê mi cấp dòng lympho tại bệnh viện nhi Trung ương, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thị Hằng (2004), “Thiếu máu thiếu sắt”, Giáo trình Huyết học Truyền máu, NXB Y học, Hà Nội Trần Thị Minh Hương, Đỗ Trung Phấn (2002), “Tình hình bệnh máu tại Viện Huyết học truyền máu, bệnh viện Bạch Mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Huyết học Truyền máu 19992000, NXB Y học, tr.1524. Nguyễn Cơng Khanh và cộng sự (1987), “Phân loại bệnh lơ xê mi cấp ở trẻ em”, Y học Việt Nam (140), tr. 2832. Bùi Ngọc Lan (2007), Nghiên cứu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh lơ xê mi cấp dòng lympho và điều trị thể nguy cơ khơng cao ở trẻ em , Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội. 10 Lâm Thị Mỹ, Trần Thái Bình, Nguyễn Thanh Hưng, Huỳnh Nghĩa (2004), “Đặc điểm bệnh bạch cầu cấp khu vực phía Nam năm 20022003”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 1(8), tr. 98102 90 11 Đỗ Trung Phấn (2008), “L xê mi cấp”, Bệnh lí tế bào nguồn, NXB Y học, tr. 96 107. 12 Đỗ Trung Phấn (2008), “Sinh máu”, Bệnh lí tế bào nguồn, NXB Y học, tr. 13 17 13 Trần Văn Tính (2014), “Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ cơ chất, pH, muối điazo đối với phản ứng nhuộm photphataza axit”, Tạp chí Y học thực hành (05), tr.2930 14 Trần Văn Tính, Bùi Thanh Hương, Nguyễn Đắc Thảo, Đinh Ngọc Quân (2015), Nghiên cứu chế tạo bộ kít nhuộm hóa học tế bào để chẩn đốn các dòng tế bào trong bệnh ung thư máu, Đề tài cấp Bộ, Bộ Cơng an 15 Trần Văn Tính, Lê Đức Ngọc (1993), “Cải tiến phương pháp đánh giá một số thay đổi hóa sinh trong tế bào bạch cầu ung thư dòng tuỷ”, Kỷ yếu Hội nghị hóa học tồn quốc Việt Nam lần thứ 3, tr.179 16 Trần Văn Tính, Phạm Hồi Thu, Nguyễn Anh Trí, Lưu Văn Bôi (2011), “Tổng hợp và nghiên cứu ảnh hưởng hiệu ứng electron đối với phản ứng nhuộm esteraza đặc hiệu tế bào bạch cầu người naphtol AS thế cloaxetat”, Tạp chí Hóa học, Tập 49 (4), tr. 479488 17 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2000), “Nghiên cứu áp dụng chương trình Hyperchem để tính tốn cơ chế động học và tối ưu hố trong phản ứng nhuộm Esteraza khơng đặc hiệu bạch cầu người”, Tạp chí thơng tin y dược học (03), tr.1824 18 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2000), “Nghiên cứu tối ưu hố phản ứng nhuộm Esteraza khơng đặc hiệu bằng phương pháp đơn hình”, Tạp chí thơng tin y dược học (06), tr.3135 19 Nguyễn Hữu Tồn (1999), Nghiên cứu phân loại leukemia cấp người lớn, rối loạn tạo máu và tế bào miễn dịch ở các thể M1, M2, M3 , Luận án Tiến sĩ Y dược, Học viện Qn y 20 Phan Nguyễn Thanh Vân, Nguyễn Tấn Bỉnh (2006), “Triển khai kỹ thuật FISH và RTPCR nhằm phát hiện bất thường nhiễm sắc thể và gen trong 91 bệnh lý huyết học tại bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh”. Tạp Chí Y Học Thực Hành, tập 545, tr. 7379 21 Phan Nguyễn Thanh Vân (2013), Ứng dụng kỹ thuật khuếch đại gen khảo sát các tổ hợp gen thường gặp trong bệnh lý bạch cầu cấp, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh 22 Nguyễn Triệu Vân và cộng sự (2004), “Giá trị của một số dấu ấn miễn dịch (marker) trong chẩn đốn phân loại lơ xê mi cấp dòng lympho người lớn tại Viện Huyết học truyền máu”, Tạp Chí Y học Thực hành, tập 497, tr.2729. 23 Nguyễn Triệu Vân (2014), “Một số hiểu biết hiện nay về bệnh nguyên, bệnh sinh, điều trị và tiên lượng bệnh lơ xê mi cấp”, Một số chuyên đề Huyết họcTruyền máu, Tập 5, NXB Y học, tr. 225244 24 Phạm Quang Vinh (2003), Các biến đổi nhiễm sắc thể trong bệnh nhân lơ xê mi cấp tại Viện Huyết học Truyền máu, bệnh viện Bạch Mai, Luận án Tiến sỹ Y học. 25 Trần Ngọc Vũ, Nguyễn Duy Thăng, Phan Thị Thu Hoa, Trần Thị Phương Túy, Phan Hồng Duy, Ngơ Tứ Cương, Hồng Thị Thanh Trang, Tơn Nữ Trà Mai (2014), “Nghiên cứu ứng dụng của hóa học tế bào và giá trị bổ sung của dấu ấn miễn dịch trong chẩn đốn, phân loại lơ xê mi cấp”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 423, tr. 189195 Tiếng Anh 26 Barnes A (1994), Acute leukemias: The F.A.B classification and more, Resource exchange intern'lVietnam 27 Bennett J. M. and et al. (1976), "Proposals for the classification of the acute leukaemias FrenchAmericanBritish (FAB) cooperative group", Br J Haematol, 33 (4), pp.451458 28 Brennan M L., Penn M S., Van Lente F., Nambi V., Shishehbor M H., Aviles R. J., Goormastic M., Pepoy M. L., McErlean E. S., Topol E. J., Nissen S. E., Hazen S. L. (2003), "Prognostic value of myeloPeroxidaza in patients with chest pain", N. Engl. J. Med. 349 (17), pp. 1595604 92 29 Burstone, M. S. (1957), “Esteraza activity of developing bones and teeth”, A M. A. Arch. Path. Vol 60, pp. 164 167 30 Chayen J., Bitensky L. (1994), Practical histochemistry, Wiley, London 31 Connor J. R. , Dodds R. A. , James I. E. , Gowen M. (1995), “Human osteoclast and giant cell differentiation, The apparent switch from nonspecific esteraza to tartrate resistant acid photphataza activity coincides with the in situ expression of osteopontin mRNA”, J Histochemistry and Cytochemistry Vol 43 (12), pp. 11931201 32 Craig F E., Foon K A (2008), "Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms", Blood, 111 (8), pp. 394167 33 Dacie J. V., Lewis S. M. (1994), Practical Haematology, Longman Group Ltd, Hong Kong 34 David Swirsky and Barbara J. Bain (2006), Practical Haematology, Churchill Livingstone, Hong kong 35 Dissing J., Svensmark O (1990), "Human red cell acid photphataza: purification and properties of A, B and C isozymes", Biochim Biophys Acta Vol 1041, pp. 23242 36 Drexler H. G. (1987). "Classification of acute myeloid leukemiasa comparison of FAB and immunophenotyping", Leukemia, 1 (10), pp. 697705 37 Estey E. , Dohner H. (2006), "Acute myeloid leukaemia". Lancet, 368 (9550), pp. 1894907 38 Gignac S. M., Hu Z. B., Denkmann S. A., Uphoff C. C., Drexler H. G. (1996), “Esteraza isoenzyme profiles of 255 leukemialymphoma cell lines from all hematopoietic cell lineages”, Leuk lymphoxítsm Vol 22, pp. 143151. 39 Greer J. P., Foerster J., Rodgers G. M., Paraskevas F., Glader B., Arber D. A., Means Jr T R (2009), Wintrobe’s clinical hematology Vol 1, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, USA. 40 Hann I. M. ; Smith O. P (2006), Pediatric hematology, WileyBlackwell, USA 93 41 Hayhoe F. G. J., Quaglino D. (1994), Haematological cytochemistry, Edinburgh Churchill Livingstone, London 42 Heslop C. L. , Frohlich J. J. , Hill J. S. (2010), "MyeloPeroxidaza and Creactive protein have combined utility for longterm prediction of cardiovascular mortality after coronary angiography". J. Am. Coll. Cardiol. 55 (11), pp. 11029 43 Kantarjian H. M., Deisseroth A., Kurzrock R., Estrov Z., Talpaz M. (1993). "Chronic myelogenous leukemia: a concise update", Blood, 82, pp. 691703 44 Leong A. SY, Cooper K., Leong F. J. WM (2003), Manual of Diagnostic Antibodies for Immunohistology, Greenwich Medical Media, London, pp. 325 326 45 MathyHartert M., Bourgeois E., Grülke S., DebyDupont G., Caudron I., Deby C., Lamy M., Serteyn D. (1998), "Purification of myeloPeroxidaza from equine polymorphonuclear leucocytes", Can. J. Vet. Res, Vol 62 (2), pp. 127132 46 Merck (1995), “Enzyme cytochemistry Leucognost /HematoGnost Fe ; Working intructions for simpified cytochemical staining for differentiation of leukaemias and myelodysplastic syndromes”, E.Merck, D64271 Darmstadt 47 Moe W. and et al (2008), “Diagnosis of acute myeloid leukemia according to the WHO classification in the Japan adult leukemia study group AML97 protocol”, International Journal of Hematology Vol 87 (2), pp. 144151 48 Pui C H., Sallan S., Relling M V., Masera G., Evans W E (2001), “International Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia”, Leukemia, 15, pp. 707715 49 Pui C. H., Robinson L. L., Look A. T. (2008) “Acute lymphoblastic leukemia”, Lancet, 371 (9617), pp. 10301072 50 Rybo E. and Bengtsson C. (1985), "Sideroblast count and examination of bone marrow reticuloendothelial iron in the diagnosis of iron deficiency", Scandinavian Journal of Haematology, Vol 34(S43), pp 7785 51 Siegel M. P. H. R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal DVM, PhD (2013), Cancer statistics, Vol 63(1), pp. 1130 94 52 Siegel M. P. H. R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal D. V. M., PhD (2015), Cancer statistics, CA Cancer J Clin, vol 65(1), pp. 529 53 Sigma (2006), Accustain iron stain, Procedure No HT20, Revised 201409, United Kingdom 54 SigmaAldrich (2008), Hematology & Histiology, Product guide, USA 55 Sigma (2014), Lymphocyte enzyme, Procedure No 181, Revised 201409, USA 56 Stok J. E., Goloshchapov A., Cheng Song, Wheelock C. E., M. B. H. Derbel, C. Morisseau, Hammock B. D. (2004), “Investigation of the role of a second conserved serine in carboxylesterazas via sitedirected mutagenesis”, Archives of Biochemistry and Biophysics Vol 430, pp. 247255 57 William H. E (1941), Stain technique, The Science press printing company lancaster. 95 ... của ba phương pháp: Hình thái học hóa học tế bào, marker CD, di truyền để phân loại dòng tế bào lympho và thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB (1986) 21 Bang 1.3. ̉ Phân loại tế bào lympho và thể bệnh theo FAB có bổ sung thêm Marker và di truyền [26]... và đặc biệt trong chun ngành Huyết học Truyền máu. Trong bệnh bạch cầu cấp, kết quả của phương pháp hình thái học nhuộm hóa học tế bào, phương pháp marker và di truyền là tiêu chuẩn để phân loại dòng tế bào bệnh bạch cầu ... phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB là đề tài có ý nghĩa khoa học, thực tiễn, kinh tế xã hội cấp thiết Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học