Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Ứng dụng bộ kít nhuộm hóa học tế bào để phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB

Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học và di truyền trên những bệnh nhân bạch cầu cấp đã được chẩn đoán thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB.

MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Tên  viết tắt ALL Bệnh bạch cầu cấp dòng  lympho Acute lymphoblastic  leukemia AML Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Acute myeloid leukemia BCC Bạch cầu cấp Leukemia CE Cacboxyl esteraza Carboxyl esterase CS Cộng sự et al CD Dấu ấn miễn dịch Cluster of Differenciation FAB Hội các nhà huyết học Pháp ­  Mỹ ­ Anh French ­ American ­ British HHTB Nhuộm Hóa học tế bào Cytochemistry HLA ­ DR Kháng nguyên bạch cầu người Human Leukocyte antigen 10 LA Bệnh bạch cầu cấp Acute leukemia Tên Tiếng Việt Tên Tiếng Anh 11 L1 Bệnh bạch cầu cấp dòng  lympho đã biệt hóa Homogenous small blast type 12 L2 Bệnh bạch cầu cấp dòng  lympho chưa biệt hóa Heterogenous blast type 13 L3 Bệnh bạch cầu cấp dòng  lympho loại Burkitt Homogenous lager blast type 14 M0 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy  biệt hóa tối thiếu Minimally differentiated  acute myeloid 15 M1 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy  khơng có tế bào trưởng thành Acute myeloblastic leukemia,  without maturation 16 M2 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy  có tế bào trưởng thành Acute myeloblastic leukemia,  with granulocytic maturation 17 M3 Bệnh bạch cầu cấp dòng tiền  tủy Acute promyelocytic  leukemia 18 M4 Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy ­  Acute myelomonocytic  mono leukemia 19 M5 Bệnh bạch cầu cấp dòng  mono Acute mono 20 M6 Bệnh bạch cầu cấp dòng          hồng cầu Acute erythroid leukemia 21 M7 Bệnh bạch cầu cấp dòng            Acute megakaryoblastic  tiểu cầu leukemia 22 NE Esteraza không đặc hiệu Non­specific esterase Esteraza không đặc hiệu ức  chế bằng NaF Non­specific esteraza ­ NaF  inhibitor Photphataza axit Acid photphatase PAL Photphataza kiềm Alkaline photphatase 26 PAS Periodic Axit Schiff Periodic ­Acid ­ Schiff 27 PER Peroxydaza Peroxidase 28 SD Sudan đen Sudan black 29 SLTBT Số lượng tế bào tủy The number of myeloid cells 30 WHO Tổ chức Y tế thế giới World Heath Organization 23 NE ­ NaF 24 PA 25 DANH MỤC HÌNH  DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU Bệnh bạch cầu cấp là nhóm bệnh máu ác tính của hệ  thống tạo máu với   đặc trưng bởi sự  tăng sinh và tích tụ  tế  bào non trong máu và tủy xương. Bạch   cầu cấp được chia thành 2 nhóm là bạch cầu cấp dòng tủy và bạch cầu cấp dòng  lympho. Bạch cầu cấp dòng tủy là kết quả của sự tích lũy tế bào non bất thường   trong tủy xương. Bạch cầu cấp dòng lympho là bệnh tăng sinh ác tính trong q   trình tạo máu dòng lympho. Những tế  bào này lấn át sự  sinh máu bình thường   trong tủy xương, chúng có thể thốt ra ngồi máu ngoại vi và thâm nhiễm vào các    quan nội tạng [23]. Bệnh có các hội chứng: Thiếu máu, xuất huyết, nhiễm  trùng và dẫn tới tử  vong nếu khơng được phát hiện và điều trị  kịp thời. Vì vậy,   việc xác định chính xác  thể  bệnh cũng như  dòng tế  bào bị  ung thư  có vai trò  quyết định trong điều trị. Hiện nay, việc phân loại dòng tế bào và thể bệnh bạch  cầu cấp dựa trên một trong hai tiêu chuẩn là FAB và WHO. Tiêu chuẩn FAB do   các nhà Huyết học Pháp­Anh­Mỹ đưa ra năm 1976 là tổng hợp kết quả hình thái  học và hóa học tế bào, năm 1986 tiêu chuẩn này đã bổ sung  thêm kết quả miễn  dịch và di truyền [15, 17].  Nhuộm hóa học tế bào gồm 8 kỹ thuật: Periodic­Acid Schiff (PAS), sudan   black (SD), peroxidaza (PER), esteraza đặc hiệu, esteraza khơng đặc hiệu ức chế  bằng NaF và khơng ức chế, photphataza kiềm và axit. Ưu điểm của phương pháp   nhuộm hóa học tế bào: Rẻ tiền, giá thành chỉ bằng 1/4 so với phương pháp miễn  dịch và bằng 1/10 so với phương pháp di truyền, khơng cần máy móc hiện đại,  dễ  triển khai. Hiện nay, các bộ  kít nhuộm có bán trên thị  trường là các kít đơn,   giá thành cao và có những nhược điểm: kỹ  thuật nhuộm nằm nên có nhiều cặn,  quy trình nhuộm khác nhau về thời gian, số bước nhuộm, hóa chất cố định khác   nhau, bước tẩy màu của kỹ  thuật nhuộm Sudan và Periodic ­ Acid Schiff khó   đồng nhất, nhuộm nền thiếu tương phản, chất màu dễ hòa tan trong dầu soi kính   nên khó hội chẩn tiêu bản nhiều lần. Tại Việt Nam, các thuốc thử hầu hết là tự  pha kết hợp với các yếu điểm trên nên độ  nhạy, độ  đặc hiệu còn thấp. Theo  Trần Ngọc Vũ và cộng sự (2014) tỷ lệ phù hợp chẩn đốn giữa hình thái học­hóa   học tế bào và miễn dịch là 89,1%, giá trị dự báo đối với bệnh bạch cầu cấp dòng   lympho là 88,88% và độ đặc hiệu là 73,77% [25]. Theo tác giả Nguyễn Hữu Tồn  thì việc phân loại dòng tế bào theo tiêu chuẩn FAB dựa trên phương pháp nhuộm   hóa học vẫn cần phải có sự điều chỉnh tới 29,7% nhờ vào kỹ thuật miễn dịch và   di truyền [19]. Hiên nay, tác gi ̣ ả  Trần Văn Tính, Trung tâm Huyết học­ Truyền   máu, Bộ Cơng an đã nghiên cứu và chế tạo thành cơng kít nhuộm hóa học tế bào  đồng     HICYTEC   gồm   10   kỹ   thuật:   Giemsa,   Periodic­Axit   Schiff   (PAS),   Peroxidaza, Sudan B, Esteraza đặc hiệu, Esteraza khơng đặc hiệu, Esteraza khơng   đặc hiệu  ức chế bằng NaF, Photphataza kiềm, Photphataza axit, Perls. Bộ kít đã  cơ bản khắc phục được các yếu điểm ở trên  Nhằm đánh giá giá trị sử dụng của  bộ kít, tiến tới có thể thay thế hàng nhập ngoại, đề tài “Ứng dụng bộ kít nhuộm  hóa học tế bào để  phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB” là đề  tài  có ý nghĩa khoa học, thực tiễn, kinh tế ­ xã hội cấp thiết Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế  bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học, miễn dịch học   và di truyền trên những bệnh nhân bạch cầu cấp đã được chẩn đốn thể  bệnh   theo tiêu chuẩn FAB (1986) Nội dung nghiên cứu: Thống kê đặc điểm bệnh bạch cầu cấp trên các bệnh nhân được chọc tủy  lần đầu tại Viện Huyết học­Truyền máu trung ương Đánh giá tính phù hợp của phương pháp nhuộm hóa học tế  bào đồng bộ  HICYTEC 10 kỹ thuật so với phương pháp hình thái học, miễn dịch và di   truyền trên các bệnh nhân đã được chẩn đốn thể  bệnh theo tiêu chuẩn  FAB Đánh giá giá trị  của kít nhuộm hóa học tế  bào đồng bộ  HICYTEC, khi  nhuộm photphataza kiềm, nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm Perls   trên bệnh nhân bạch cầu cấp.  CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Q trình sinh máu 1.1.1. Cơ quan sinh máu Cơ quan tạo máu bao gồm: tủy xương, tổ chức lympho (lách, hạch, tuyến  ức) và tổ  chức võng mơ. Thời kì phơi thai, cơ  quan tạo máu gồm có gan, lách,   hạch. Sau khi sinh, q trình tạo máu (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu) chỉ xảy ra ở  tủy đỏ của các xương. Đến tuổi trưởng thành, q trình sinh máu chỉ còn diễn ra   tại đầu các xương dẹt, đầu xương đùi, xương cánh tay và một vài khu vực sinh   máu ngồi tủy biệt hóa các dòng lympho T và B [6] 1.1.2. Q trình sinh máu Hiện nay nhiều cơng trình đã chứng minh, các dòng tế bào máu được sinh  ra từ tế bào gốc vạn năng. Q trình biệt hóa qua nhiều giai đoạn và tùy theo sự  kích thích đặc hiệu mà tế  bào gốc vạn năng biệt hóa để tạo thành những tế  bào   có chức năng cần thiết [11]. Ba kích thích tố  chính tạo máu gồm: Erythropoietin   tạo hồng cầu, thrombopoietin tạo tiểu cầu và colony­stimulating factors cùng với  interleukin (IL) kích thích tạo bạch cầu. Q trình sinh máu được điều hòa bởi  yếu tố di truyền đặc biệt là các tế bào bị chết theo chương trình [13] 1.2. Bệnh bạch cầu cấp 1.2.1. Khái niệm chung Bệnh bạch cầu cấp là tình trạng bệnh lý cấp tính của tế bào sinh máu với   đặc điểm chính là tăng số lượng bạch cầu bất thường ở cả trong tủy xương và ở  ngồi máu ngoại vi, tủy xương có trên 30% tế  bào non (blast) trong tổng số  tế  bào có nhân, phá hủy q trình sinh máu bình thường trong tủy và xâm nhiễm vào  các cơ quan [12] 1.2.2. Dịch tễ học Theo cơng bố của Rebecca Siegel MPH và cộng sự (2015) trong năm 2014,  ở Mỹ ghi nhận 6.250 ca mắc mới bệnh bạch cầu cấp dòng lympho. Tỷ lệ  nam (3.100) và nữ (3.150) gần bằng nhau, số tử vong gây ra bởi bệnh này   là 1.450 người [52]; Tại Mỹ, hàng năm xuất hiện mới khoảng 2,2 trường hợp   bạch cầu cấp  dòng tủy trên 100.000 dân và có khoảng 3.000 trường hợp bạch cầu cấp   dòng lympho mới trên tồn quốc [44]; Tại Việt Nam, tuy chưa có nghiên cứu nào tiến hành đầy đủ  về  dịch tễ  học của bệnh bạch cầu cấp trên tồn quốc nhưng theo tổng kết tại Viện   Huyết học­Truyền máu, Bệnh viện Bạch Mai thì thấy bệnh bạch cầu cấp  gặp tỷ lệ cao nhất (32.1%) trong số các bệnh máu đến khám và điều trị tại   Bệnh viện Bạch Mai [7] 1.2.3.Các ngun nhân gây bệnh Cho  tới nay nguyên  nhân  gây bệnh chưa    sáng tỏ.  Tuy nhiên  qua   nhiều nghiên cứu cho thấy có nhiều yếu tố liên quan tới phát sinh bệnh: Tia  xạ: Những  người  tiếp xúc  nhiều với  tia  ion hóa  hay  tia  xạ  thường có nguy cơ bị bạch cầu cấp; Hóa chất: Những người nhiễm mạn tính benzen hay sử  dụng hóa  chất để chữa bệnh ác tính dễ mắc bệnh bạch cầu cấp; Virus:   Human   T­cell   lymphotropic   virus   gây   bạch   cầu   cấp   dòng  lympho, Epstein­Barr virus (EBV) gây ung thư vòm Yếu tố di truyền: Những bệnh nhân bị một số bệnh di truyền như hội  chứng Down, hội chứng Bloom, thiếu máu Fanconi có nguy cơ cao bị bạch cầu   cấp [12] 1.2.4. Cơ chế bệnh sinh Sự hoạt động của các gen ung thư (oncogene): Các gen bình thường do  yếu tố nào đó tác động trở thành các gen bất thường gây ung thư gọi là gen  ung thư. Sản phẩm của các gen ung thư là các protein bất thường, có hoạt  tính mạnh, gây rối loạn q trình sinh sản và biệt hóa của tế bào; 10 Hinh 3.46.  ̀ Ảnh nhuộm PAS mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.47.  ̀ Ảnh nhuộm PAS mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Hình 3.48 và 3.49 là ảnh nhuộm peroxidaza bệnh nhân bạch cầu cấp dòng   lai lympho ­ tủy. Các tế  bào blast dòng tủy dương tính mạnh có màu vàng nâu  trong bào tương. Các tế  bào blast lympho âm tính khơng bắt màu vàng nâu trên   nguyên sinh chất Hinh 3.48.  ̀ Ảnh nhuộm peroxidaza mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.49.  ̀ Ảnh nhuộm peroxidaza mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Hình 3.50 và 3.51 là  ảnh nhuộm Sudan của bệnh nhân bạch cầu cấp lai  lympho ­ tủy. Các tế bào blast dòng tủy cho kết quả dương tính mạnh, có nhiều  hạt to màu đen trong bào tương thậm chí che kín nhân tế  bào. Trên tiêu bản còn   có các tế bào blast dòng lympho cho kết quả âm tính 81 Hinh 3.50.  ̀ Ảnh nhuộm Sudan B mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T Hinh 3.51.  ̀ Ảnh nhuộm Sudan B mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C Trên hình 3.52 và 3.53 là kết quả  nhuộm   esteraza đặc hiệu  các mẫu lai  lympho­tủy. Các tế bào blast dòng tủy bắt màu đỏ đậm trên ngun sinh chất xen   lẫn các tế bào blast dòng lympho cho kết quả âm tính 82 Hinh 3.52.  ̀ Ảnh nhuộm esteraza đặc hiệu  Hinh 3.53.  ̀ Ảnh nhuộm esteraza đặc  mẫu tủy của bệnh nhân Trương Thị T hiệu mẫu tủy của bệnh nhân Tr Văn C Phản ứng esteraza khơng đặc hiệu và khơng đặc hiệu ức chế NaF để phân  định dòng mono và dòng hạt. Hình 3.54 và 3.55 là hình ảnh nhuộm của bệnh nhân  bạch cầu cấp thể lai lympho ­ tủy. Các tế bào lai lympho khơng bị ức chế bởi cơ  chất, các tế bào lai dòng tủy thì bị ức chế Hinh 3.54.  ̀ Ảnh nhuộm esteraza khơng  Hinh 3.55.  ̀ Ảnh nhuộm esteraza không đặc  đặc hiệu ức chế NaF mẫu tủy của bệnh  hiệu mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C nhân Trương Thị T 83 Qua các phản  ứng nhuộm   trên, trên cùng một vi trường vừa có tế  bào  blast nhuộm dương tính với dòng lympho (PAS) và tế  bào blast nhuộm dương   tính với dòng tủy (peroxidaza, sudanB và esteraza đặc hiệu), điều này chứng tỏ  trên mẫu tủy xuất hiện tế bào blast của cả  hai dòng tủy và lympho vì thế  được   gọi là thể lai lympho­tủy 3.5. Kết quả nhuộm photphataza kiềm bạch cầu Bang ̉  3.13. Kết quả nhuộm photphataza kiềm trên bệnh nhân bạch cầu cấp Điểm nhuộm Số lượng Tỷ lệ 146 1,7% Tổng 60 100% Trong tổng số  60 trường hợp được chẩn đốn bạch cầu cấp hầu hết là  giảm điểm nhuộm (71,7%) dưới 20 điểm, chỉ  có một trường hợp tăng điểm và   như vậy có định hướng nhiễm trùng (xem Bảng 3.13).  Nhuộm photphataza kiềm bạch cầu dùng để phân biệt bệnh bạch cầu kinh  và bệnh bạch cầu cấp cũng như hội chứng nhiễm trùng bạch cầu đơn nhân. Nếu  là bệnh bạch cầu kinh thường có hiện tượng giảm điểm nhuộm (có thể  giảm  đến mức 0 điểm. Trong trường hợp bạch cầu cấp điểm nhuộm của các mẫu tuỷ  thường nằm trong mức giảm vừa do có sự  tăng cao của các tế  bào blast. Nếu  trong trường hợp bị  nhiễm trùng (một trong những triệu chứng của bệnh) thì  điểm nhuộm của mẫu sẽ tăng lên và là chỉ dấu giúp các bác sỹ lâm sàng theo dõi  tiên lượng bệnh. Tuy vậy, do sự biến động rất lớn của các tế  bào và thành phần   tế   bào  trong mẫu tuỷ  của  các  bệnh nhân bạch  cầu cấp  nên xét nghiệm    thường ít có giá trị và chỉ có giá trị khi theo dõi mang tính động học [40] 84 Hình 3.56 thể hiện phản ứng nhuộm photphataza kiềm dương tính, ngun  sinh chất tế bào bắt màu đỏ trên nền nhân và hồng cầu màu xanh Hình 3.56. Ảnh nhuộm photphataza kiềm mẫu tủy của bệnh nhân Trần Văn C 3.6. Kết quả nhuộm sắt trên mẫu tủy của bệnh nhân bạch cầu cấp tại Viện HH­ TM trung ương Bảng 3.14. Kết quả nhuộm Perls trên các mẫu tủy bị bệnh bạch cầu cấp  Giới Số trường hợp Tỷ lệ Có tế bào mạng lưới nội mơ sắt 10,0% Khơng có tế bào mạng lưới nội mơ sắt 54 90,0% Tổng 60 100% Nhuộm sắt (Perls) có thể  phát hiện các ngun hồng cầu sắt hoặc các tế  bào mạng lưới nội mơ sắt [42] (hình 3.57). Kết quả  nhuộm Perls bằng bộ  kít  nhuộm hóa học tế bào HICYTEC cho thấy trong 60 bệnh nhân bạch cầu cấp thì  có 6 trường hợp (chiếm 10,0%) có tế bào mạng lưới nội mơ sắt (xem bảng 3.14)   Theo Elisabeth Rybo và cs thì tế bào mạng lưới nội mơ sắt có giá trị theo dõi tình  trạng ứ sắt tốt hơn so với ngun hồng cầu sắt [50] 85 Hình 3.57. Ảnh nhuộm Perls tế bào lưới nội mơ sắt mẫu  tủy của bệnh nhân Trương Thị T KẾT LUẬN Sử  dụng bộ  kít nhuộm hóa học tế  bào HICYTEC đồng bộ  10 kỹ  thuật   để  phân loại thể  bệnh trong ch ẩn  đốn bệnh bạch cầu cấp trên 202 mẫu tủy  của bệnh nhân chọc tủy lần đầu chưa điều trị  có các triệu chứng nằm trong   tiêu chuẩn về  mặt lâm sàng hoặc đượ c chẩn đốn là bệnh bạch cầu cấp, đề  tài đã thu được một số  kết quả như sau: 1. Tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp là 31,2%, trong đó cao nhất là bạch cầu cấp   dòng tủy chiếm 50,0%, bạch cầu cấp dòng lympho chiếm 41,7% và thấp nhất là  bạch cầu cấp lai lympho ­ tủy chiếm 8,3%. Bạch cầu cấp dòng lympho chủ yếu là   trẻ  em chiếm 60% và có tỷ  lệ nam giới mắc bệnh cao hơn nữ giới, nam/nữ =   1,3 2. Đã đánh giá được giá trị sử dụng của bộ kít trong  phân loại thể bệnh bạch   cầu cấp theo tiêu chn FAB đ ̉ ạt được sự phù hợp 100% đối với dòng lympho và   93,3% đối với dòng tủy so với kết quả chẩn đốn của Viện Huyết học ­ Truyền   máu trung ương bằng các phương pháp hình thái học, miễn dịch và di truyền. Có  5 trường hợp bạch cầu cấp thể lai lympho­tủy, mức độ phù hợp trong chẩn đốn   cũng đạt 100%.   Đã   đánh   giá   được  giá   trị       kít   nhuộm   hóa   học   tế   bào   đồng   bộ  HICYTEC khi nhuộm photphataza axit bạch cầu, nhuộm photphataza kiềm và   86 nhuộm Perls trên bệnh nhân bạch cầu cấp:  20% mẫu tủy  có  photphataza axit  dương tính định hướng dòng lympho T; 1,7%  có điểm nhuộm photphataza kiềm  tăng định hướng có nguy cơ nhiễm trùng;   3,3% mẫu tủy gặp các tế  bào mạng  lưới nội mơ sắt có giá trị  theo dõi tình trạng  ứ  sắt tốt hơn so với ngun hồng  cầu sắt.  87 KIẾN NGHỊ Sử dụng bộ kít nhuộm HICYTEC đồng bộ 10 kỹ thuật để nhuộm các mẫu  tủy chọc tủy lần đầu trong các phòng xét nghiệm Huyết học để  xác định thể  bệnh 88 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC  CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Trần Văn Tính, Vũ Thị Thủy, Lê Thị  Thanh Thủy, Ngơ Thị  Thảo, Đồn Văn   Thuyết, Bùi Phương Thuận (2015), “Đánh giá kết quả  của bộ  kít nhuộm   HICYTEC trong chẩn đốn các bệnh bạch cầu trên bệnh nhân chọc tủy lần   đầu tại viện Huyết học­Truyền máu trung  ương”, Tạp chí Y học thành phố   Hồ Chí Minh, tập 19 (4) tr. 508­513 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1.   Nguyễn Thị Minh An và cộng sự (1995), “Tình hình bệnh lơ xê mi cấp ở một số  bệnh  viện địa phương và bệnh viện bạch mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu   khoa học, Đại học Y Hà Nội, tr.185­192.  Đỗ  Thị  Vinh An, Phạm Quang Vinh, Phan Văn Chi, Nguyễn Thị  Bích Nhi  (2010), “Bước đầu tìm hiểu một số  biến đổi protein   bệnh nhân lơ  xê mi   cấp dòng lympho tại khoa Huyết học Truyền máu bệnh viện Bạch Mai”,   Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 373, tr.267­270 Bộ  môn Huyết học­Truyền máu (1984),  Kỹ  thuật xét nghiệm huyết học và   truyền máu, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Trọng Biểu, Từ Văn Mặc (1978), Thuốc thử hữu cơ, NXB Khoa học  Kỹ thuật, Hà Nội Trần Thị  Hồng Hà (2004), Nghiên cứu đặc điểm, giá trị  của một số  yếu tố   sinh học và lâm sàng ở trẻ em bị lơ xê mi cấp dòng lympho tại bệnh viện nhi   Trung ương, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội Nguyễn Thị  Hằng (2004), “Thiếu máu thiếu sắt”,  Giáo trình Huyết học­ Truyền máu, NXB Y học, Hà Nội Trần Thị Minh Hương, Đỗ Trung Phấn (2002), “Tình hình bệnh máu tại Viện  Huyết học truyền máu, bệnh viện Bạch Mai”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu   khoa học Huyết học Truyền máu 1999­2000, NXB Y học, tr.15­24.  Nguyễn Cơng Khanh và cộng sự (1987), “Phân loại bệnh lơ xê mi cấp ở  trẻ  em”, Y học Việt Nam (140), tr. 28­32.  Bùi Ngọc Lan (2007), Nghiên cứu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh lơ xê mi cấp   dòng lympho và điều trị thể nguy cơ khơng cao ở trẻ em , Luận án Tiến sỹ Y  học, Đại học Y Hà Nội.  10 Lâm Thị  Mỹ, Trần Thái Bình, Nguyễn Thanh Hưng, Huỳnh Nghĩa (2004),   “Đặc điểm bệnh bạch cầu cấp   khu vực phía Nam năm 2002­2003”, Tạp   chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 1(8), tr. 98­102 90 11 Đỗ  Trung Phấn (2008), “L  xê mi cấp”,  Bệnh lí tế  bào nguồn, NXB Y  học,     tr. 96 ­ 107.  12 Đỗ Trung Phấn (2008), “Sinh máu”, Bệnh lí tế bào nguồn, NXB Y học, tr. 13­ 17 13 Trần Văn Tính (2014), “Nghiên cứu  ảnh hưởng của nồng độ  cơ  chất, pH,  muối điazo đối với phản  ứng nhuộm photphataza axit”,  Tạp chí Y học thực   hành (05), tr.29­30 14 Trần Văn Tính, Bùi Thanh Hương, Nguyễn Đắc Thảo, Đinh Ngọc Quân (2015),  Nghiên cứu chế tạo bộ kít nhuộm hóa học tế bào để chẩn đốn các dòng tế bào   trong bệnh ung thư máu, Đề tài cấp Bộ, Bộ Cơng an 15 Trần Văn Tính, Lê Đức Ngọc (1993), “Cải tiến phương pháp đánh giá một số  thay đổi hóa sinh trong tế bào bạch cầu ung thư dòng tuỷ”, Kỷ yếu Hội nghị   hóa học tồn quốc Việt Nam lần thứ 3, tr.179 16 Trần   Văn   Tính,   Phạm   Hồi   Thu,   Nguyễn   Anh   Trí,   Lưu   Văn   Bôi   (2011),   “Tổng hợp và nghiên cứu  ảnh hưởng hiệu  ứng electron đối với phản  ứng  nhuộm   esteraza   đặc   hiệu   tế   bào   bạch   cầu   người     naphtol   AS   thế  cloaxetat”, Tạp chí Hóa học, Tập 49 (4), tr. 479­488 17 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2000), “Nghiên cứu áp  dụng chương trình Hyperchem để  tính tốn cơ  chế  động học và tối  ưu hố   trong phản  ứng nhuộm Esteraza khơng đặc hiệu bạch cầu người”, Tạp chí   thơng tin y dược học (03), tr.18­24 18 Trần Văn Tính, Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Đình Triệu (2000), “Nghiên cứu tối  ưu hố phản  ứng nhuộm Esteraza khơng đặc hiệu bằng phương pháp đơn   hình”, Tạp chí thơng tin y dược học (06), tr.31­35 19 Nguyễn Hữu Tồn (1999), Nghiên cứu phân loại leukemia cấp người lớn, rối   loạn tạo máu và tế bào miễn dịch ở các thể M1, M2, M3 , Luận án Tiến sĩ Y  dược, Học viện Qn y 20 Phan Nguyễn Thanh Vân, Nguyễn Tấn Bỉnh (2006),  “Triển khai kỹ  thuật  FISH và RT­PCR nhằm phát hiện bất thường nhiễm sắc thể  và gen trong   91 bệnh lý huyết học tại bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố  Hồ  Chí  Minh”. Tạp Chí Y Học Thực Hành, tập 545, tr. 73­79 21 Phan Nguyễn Thanh Vân (2013), Ứng dụng kỹ thuật khuếch đại gen khảo sát   các tổ hợp gen thường gặp trong bệnh lý bạch cầu cấp, Luận án Tiến sỹ Y  học, Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh 22 Nguyễn Triệu Vân và cộng sự (2004), “Giá trị của một số dấu ấn miễn dịch   (marker) trong chẩn đốn phân loại lơ xê mi cấp dòng lympho người lớn tại  Viện Huyết học truyền máu”, Tạp Chí Y học Thực hành, tập 497, tr.27­29.  23 Nguyễn Triệu Vân (2014), “Một số hiểu biết hiện nay về bệnh nguyên, bệnh   sinh, điều trị  và tiên lượng bệnh lơ  xê mi cấp”,  Một số  chuyên đề  Huyết   học­Truyền máu, Tập 5, NXB Y học, tr. 225­244 24 Phạm Quang Vinh (2003), Các biến đổi nhiễm sắc thể trong bệnh nhân lơ xê   mi cấp tại Viện Huyết học­ Truyền máu, bệnh viện Bạch Mai, Luận án Tiến  sỹ Y học.  25 Trần Ngọc Vũ, Nguyễn Duy Thăng, Phan Thị  Thu Hoa, Trần Thị  Phương  Túy, Phan Hồng Duy, Ngơ Tứ Cương, Hồng Thị  Thanh Trang, Tơn Nữ Trà  Mai (2014), “Nghiên cứu ứng dụng của hóa học tế bào và giá trị bổ sung của  dấu  ấn miễn dịch trong chẩn đốn, phân loại lơ  xê mi cấp”, Tạp chí Y học   Việt Nam, Tập 423, tr. 189­195 Tiếng Anh 26 Barnes   A   (1994),  Acute   leukemias:   The   F.A.B   classification   and   more,  Resource exchange intern'l­Vietnam 27 Bennett J. M. and et al. (1976), "Proposals for the classification of the acute  leukaemias   French­American­British   (FAB)   co­operative   group",  Br   J   Haematol, 33 (4), pp.451­458 28 Brennan   M   L.,   Penn   M   S.,   Van   Lente   F.,   Nambi   V.,   Shishehbor   M   H.,  Aviles R. J., Goormastic M., Pepoy M. L., McErlean E. S., Topol E. J., Nissen  S. E., Hazen S. L. (2003), "Prognostic value of myeloPeroxidaza in patients  with chest pain", N. Engl. J. Med. 349 (17), pp. 1595­604 92 29 Burstone, M. S. (1957), “Esteraza activity of developing bones and teeth”,  A   M. A. Arch. Path. Vol 60, pp. 164 ­ 167 30  Chayen J., Bitensky L. (1994), Practical histochemistry, Wiley, London 31 Connor J. R. , Dodds R. A. , James I. E. , Gowen M. (1995), “Human osteoclast  and giant cell differentiation, The apparent switch from nonspecific esteraza to  tartrate resistant acid photphataza activity coincides with the in situ expression  of   osteopontin   mRNA”,  J   Histochemistry   and   Cytochemistry  Vol   43   (12),  pp. 1193­1201 32 Craig   F   E.,   Foon   K   A   (2008),   "Flow   cytometric   immunophenotyping   for  hematologic neoplasms", Blood, 111 (8), pp. 3941­67 33 Dacie J. V., Lewis S. M. (1994), Practical Haematology, Longman Group Ltd,  Hong Kong 34 David Swirsky and Barbara J. Bain (2006), Practical Haematology, Churchill  Livingstone, Hong kong 35 Dissing   J.,   Svensmark   O   (1990),   "Human   red   cell   acid   photphataza:  purification and properties of A, B and C isozymes", Biochim Biophys Acta Vol  1041,          pp. 232­42 36 Drexler H. G. (1987). "Classification of acute myeloid leukemias­a comparison  of  FAB and immunophenotyping", Leukemia, 1 (10),   pp. 697­705 37 Estey E. , Dohner H. (2006), "Acute myeloid leukaemia". Lancet, 368 (9550),  pp. 1894­907 38 Gignac S. M., Hu Z. B., Denkmann S. A., Uphoff C. C., Drexler H. G. (1996),  “Esteraza  isoenzyme  profiles  of  255  leukemia­lymphoma  cell  lines  from  all  hematopoietic cell lineages”, Leuk  lymphoxítsm Vol 22, pp. 143­151.  39 Greer J. P., Foerster J., Rodgers G. M.,  Paraskevas F., Glader B., Arber D. A.,  Means   Jr   T   R   (2009),  Wintrobe’s   clinical   hematology  Vol   1,   Lippincott  Williams & Wilkins, Philadelphia, USA.  40 Hann I. M. ; Smith O. P  (2006),  Pediatric  hematology, Wiley­Blackwell,  USA 93 41 Hayhoe F. G. J., Quaglino D. (1994), Haematological cytochemistry, Edinburgh  Churchill Livingstone, London 42 Heslop C. L. , Frohlich J. J. , Hill J. S. (2010), "MyeloPeroxidaza and C­reactive  protein have combined utility for long­term prediction of cardiovascular mortality  after coronary angiography". J. Am. Coll. Cardiol. 55 (11), pp. 1102­9 43 Kantarjian H. M., Deisseroth A., Kurzrock R., Estrov Z., Talpaz M. (1993).  "Chronic myelogenous leukemia: a concise update", Blood, 82, pp. 691­703 44 Leong A. S­Y, Cooper K., Leong F. J. W­M (2003),  Manual of Diagnostic   Antibodies for Immunohistology, Greenwich Medical Media, London, pp. 325­ 326 45 Mathy­Hartert M., Bourgeois E., Grülke S., Deby­Dupont G., Caudron I., Deby  C., Lamy M., Serteyn D. (1998), "Purification of myeloPeroxidaza from equine  polymorphonuclear leucocytes", Can. J. Vet. Res, Vol 62 (2), pp. 127­132 46 Merck   (1995),   “Enzyme   cytochemistry   Leucognost /HematoGnost   Fe ;  Working intructions for simpified cytochemical staining for differentiation of  leukaemias and myelodysplastic syndromes”, E.Merck, D­64271 Darmstadt 47 Moe W. and et al (2008), “Diagnosis of acute myeloid leukemia according to  the   WHO   classification   in   the   Japan   adult   leukemia   study   group   AML­97  protocol”, International Journal of Hematology Vol 87 (2), pp. 144­151 48 Pui   C   H.,   Sallan   S.,   Relling   M   V.,   Masera   G.,   Evans   W   E   (2001),  “International Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia”,  Leukemia, 15, pp.  707­715 49 Pui C. H., Robinson L. L., Look A. T. (2008) “Acute lymphoblastic leukemia”,  Lancet, 371 (9617), pp. 1030­1072 50 Rybo E. and  Bengtsson C. (1985), "Sideroblast count and examination of bone  marrow   reticuloendothelial   iron   in   the   diagnosis   of   iron   deficiency",  Scandinavian Journal of Haematology, Vol 34(S43), pp 77­85 51 Siegel M. P. H. R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal DVM,  PhD (2013), Cancer statistics, Vol 63(1), pp. 11­30 94 52 Siegel M. P. H. R., Deepa Naishadham MA, MS and Ahmedin Jemal D. V. M.,  PhD (2015), Cancer statistics, CA Cancer J Clin, vol 65(1), pp. 5­29 53 Sigma   (2006),   Accustain   iron   stain,  Procedure   No   HT20,   Revised   2014­09,  United Kingdom 54 Sigma­Aldrich (2008), Hematology & Histiology, Product guide, USA 55 Sigma   (2014),  Lymphocyte   enzyme,  Procedure   No   181,  Revised   2014­09,  USA 56 Stok J. E.,  Goloshchapov A., Cheng Song,  Wheelock C.  E., M. B. H. Derbel,   C. Morisseau, Hammock B. D. (2004), “Investigation of the role of a second  conserved serine in carboxylesterazas via site­directed mutagenesis”, Archives   of Biochemistry and Biophysics Vol 430, pp. 247­255 57 William  H.  E   (1941),  Stain  technique,  The   Science   press   printing   company  lancaster.  95 ... của ba phương pháp: Hình thái học hóa học tế bào,  marker CD, di truyền để phân   loại dòng tế bào lympho và thể bệnh theo tiêu chuẩn FAB (1986) 21 Bang 1.3.  ̉ Phân loại tế bào lympho và thể bệnh theo FAB có bổ sung thêm Marker và di truyền [26]... và đặc biệt trong chun ngành Huyết học Truyền máu. Trong bệnh bạch cầu cấp,  kết quả  của phương pháp hình thái học nhuộm hóa học tế bào,  phương   pháp marker và di truyền là tiêu chuẩn để phân loại dòng tế bào bệnh bạch cầu ... phân loại bệnh bạch cầu cấp theo tiêu chuẩn FAB  là đề  tài  có ý nghĩa khoa học,  thực tiễn, kinh tế ­ xã hội cấp thiết Mục tiêu của đề tài là: Đánh giá sự phù hợp của bộ kít nhuộm hóa học tế bào trong phân loại dòng tế bào so với phương pháp hình thái học,  miễn dịch học