Nghiên cứu xác định hàm lượng Axit Folic trong dược phẩm bằng phương pháp Von-Ampe hòa tan hấp thụ trên điện cực giọt Hg treo : Đề tài NCKH. QT.07.26

Đại học Quốc gia Hà nội Trường Đại học Khoa học Tự nhiên H : ỉ K N ỉ Tên đề tài: N G H IÊ N CỨU XÁC ĐỊNH H ÀM LƯỢNG AXIT FOLIC T R O N G DƯỢC P H Ẩ M BANG PHƯƠNG P H Á P V O N -A M P E HÒA T A N H ẤP PHỤ TRÊN ĐIỆN cực G IỌ T Hg T RE O Mã sơ: Mã sị: Q T 07-26 Chủ trì dẽ tài: T h s Lê Thị Hương Giang Các cán tham gia: CN Nguyen Thị Lan í-\ n C C Q U O C GIA HA N O ^JNG TÂV TUỎ N G TIN THƯ VIÊN Di Hà nội - 2007 / 15L Báo cáo tóm tắt T ên đ ề tài: “ N g h iê n u xác đ ịn h hàm lư ợng a x it F o lic tr o n g dược p h ẩ m b ằ n g p h n g p h p v o n -a m p e hòa tan h ấp p h ụ đ iện cực g iọ t H g tr e o ” C h ủ trì đ é tài: T h s L ê T h ị H ơn g G ia n g C c cá n th a m gia: C N N g u y ễn T h ị Lan M ụ c tiê u nội d u n g n g h ỉcn u - Nghiên cứu xây dựng quy trình xác định axit Folic phưưng pháp von-am pe hòa tan catot điện cực giọt Hg treo - Áp dụng phân lích axil Folic số mẫu dược phẩm C c kết q u ả đạt đư ợc 5.1 Đ ã tìm đicu kiện tối ưu xác định axit Folic phương pháp von-am pe hòa lan catot diện cực giọt Hg treo 5.2 Xây dựng quy trình xác clịnh axit Folic số mau dược phám 5.3 Ung dụng phân lích hàm lưựng axit Folic mội số mẫu dược phám T ìn h h ìn h k in h p h í củ a đ c tài Kinh phí cấp: 20.000.()00đ (Hai mươi triệu dồng) Th khốn chun mơn: 8.000.000đ (Tủm triệu dồng) Chi phí vậl tư: 9.40 0.OOOđ (Chín triệu bon ĩrăm nghìn cỉốtỉịỊ) Chi phí hội nghị : l.OOO.OOOđ (Một triệu dồng) Thanh tốn dịch vụ cơng cộng: l.óOO.OOOđ (Mội triệu sáu trăm nghìn dồng) Khoa quân lý 1HỈS.TS Ngu vỏn Văn Nội Chú trì đẽ tài T h s Lé Thị Hưong (ỉiang / r Báo cáo tóm tắt D e te r m in a tio n o f F o lic a cid in d ru g u sin g A d s o r p tiv e str ip p in g v o lta m m e tr ic Folic acid N|4|[(2- amino- 1.4-dihydro-4-oxo-6-pteridinyl)methyl]amino]benzoylJ- glutamic acid, has long been recognized as a part of the vitamin B complex and is administered in the prophylaxis and treatment of megaloblastic anaemia and other diseases Voltammetric measurements of analytes previously preconcentrated by adsorption on the electrode surface provides a suitable technique for quantitation of a large variety of organic molecules at ultratrace levels |1| The extremely high sensitivity and good precision attained by this technique, touether with its instrumental simplicity, make it an attractive analytical tool for therapeutic monitoring purposes The development of this kind of application needs to overcome problems arising from the presence of large excesses of naturally occurring surfactants in biological matrices such as serum Competitive coverage o f the electrode surface by matrix surfactants can hinder the adsorptive preconcentration process and even suppress the stripping signal Recently, these problems have received important attention, and some methods have been proposed Cor trace drug monitorirm in serum and urine samples In this research Folic acid was voltammetrically measured after preconcentration by adsorption at the static mercury drop electrode Squavvave voltammetrv provided the most sensitive strippiim simial The opptimized conditions arc pH 8.5 (borratc buffer), deposition potential -0.2V The inflect of some metals, vitamins, surface active compounds was in\estiaatcd The detection limit of the method was 0.0155ppb the coefficient of variation is 0.58%: 0.18%: 1.24% at the Folic concentration 0.882: 2.646: 4.41 ppb respect!veil) The linear rarmc is 0.882-4.41 pph and 8.82-44.1 ppb NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT FOLIC TRONG DƯỢC PHẨM BANG PHƯƠNG PHÁP VON-AMPE HÒA TAN HẤP PHỤ TRÊN ĐIỆN c ự c GIỌT Hg TREO I Mử đầu Axit folic dược gọi vitamin I3r B4 vitamin M folacin folat sinh tố tan nước, thuộc nhóm B [1,2] Trong thổ Axit folic dược khử thành tetrahvdrofolat coenzim nhiéu q trình chuyển hố có tổng hợp nucleotid có nhân purin pyrimidin: ảnh hướng lên tống hợp DNA Khi có vitamin c axit folic chuvên thành leucovorin chất cần thiết cho long hợp DNA RNA Axit folic yếu tố không the thiếu dược cho lổng hợp nucleoprotein tạo hồng cầu bình thường Axit folic cịn giúp cho người giám hớt ti lệ u nang giám nguy bệnh lật bệnh não SUV, báo vệ ngăn ngừa quái thai, gia tăng sinh sữa cho phụ nữ vừa sinh con, háo vệ ngăn ngừa kí sinh trùng dường ruột ngộ độc thực phấin ngồi nỏ cịn giúp cho da tươi mịn klioc dẹp , có tác dụng chất giam đau chống mỏi Có thê làm chậm q trình hạc tóc dược sử dụng kết hợp axil Folic với axit pantothenic axil paraaminobenzoic, giúp ngăn ngừa bệnh viêm loét miệng bệnh thiếu máu người Thiếu axit folic gây thiếu máu nguyên hồng cầu khống lổ giống thiếu máu thiếu vitamin B|, Axil Folic tham gia vào số biến dổi axit amin; vào tạo thành sử dụng format Ngoài nêu thiếu axit folic nồng dộ homocysterin máu tăng cao dó chất gây chứng não suv Thiếu axit folic dề “ ày xơ vữa dộng mạch hênh lim Uống axit Folic lieu cao làm lượng vitamin đào thải qua nước tiêu tãng lên ti lệ thuận: liổu lớn axit folic có thê gây chứng co giật người bệnh dơng kinhl 1.2| I liộn dã có nhiều phương pháp nghiên cứu xác định axit Folic xác định phương pháp sác kí lỏng hiệu cao (HPLC)[3 10 11 12 13] phương pháp diộn di mao quán (CK)|8| : pliưong pháp huỳnh quang [14] : phương pháp dicn hoá (cực phổ Von-Ampe hoà tun hấp phụ)I 15 16 17 IX 19 20 21 22] Viơc phân lích axit I;olic thường gặp khó khăn vổ dỏ nhạv dó lăp lại thời gian phân tích kéo dài Phương pháp von-ampe hồ tan hấp phụ xác định vitamin nói riêng chất hữu nói chung hướng phát triển nhóm phương pháp điện hố Trong đề tài này, chúng tơi nghiên cứu tính chất điện hố axil Folic từ ứng dụng xác định axit Folic bàng phương pháp von-ampe hoà tan catot (CSV) diện cực giọt thuỷ ngân treo (IIMDE) I Cấu tạo, tính chất axit Folic 1.1 Công thức câu tạo axit folic cooh n n f n II * c ' * ] k* N '■ -n ỉ , -— cH2- N C H ? o —ờ C H —C —N— CH H H O H h H rcoo" n M Axit I;olic-N-(4-((2,4-diainino-6-Pretidinyl)Methyl)Amino)Benzoyl)-L-Glutamic axil N H , C H C » , - — C H C O O H Glutamtc ncio : > o X x > pfBfin-»-cart)OKHic acxl *■*' _ c t- ĩ „ C O t ỉM T.B - s V "■ H 7} 7>6 (III) ;> ò ọ V ' rH| r - x ỊIV Ì ộ piifip {IVI c S e j f M a t r a i 'Y i l 'o d 'f n e t t ’yl p t e n n r \ j _ C H - C H | - C Hj OOOl I ftoan pl 1=8.3: sóne khử trường hop tương tự sóng khử -0.5V trường liợp p l l = x nhiên có dịch chuyên pic dốn -0.8V anh hướng plỉ 1.3 Dược lý, chc tác dun« sử dụng axit Folic Trong the Axil folic khử thành tctrahyđrololat coen/im cua nhiêu trình chuvcn hố irons: dó cỏ lổng hợp nuclcotid có nhân purin pvriíiiidin; anh hưỡiiíi len lõng hạp D \ A Kill có viiamin c axil lolic dược chuyến thành leucovorin chất cán thiết cho tong hợp DNA RNA Axil folic -Ị ,1 yếu tố thiếu cho tổng hợp nucleoprotein lạo hồng cầu bình thường Axit folic cịn giúp cho người giảm bớt tỉ lệ u nang giảm nguy bệnh tật, bệnh não suy, bảo vệ ngăn ngừa quái thai, gia tăng sinh sữa cho phụ nữ vừa sinh con, hảo vệ ngãn ngừa kí sinh trùng đường ruột ngộ dộc thực phấm, ngồi cịn giúp cho da tươi mịn, khoẻ đẹp , có tác dụng chất giảm dau chống mệt mỏi Có làm chậm q trình bạc tóc sử dụng kết hợp axit Folic với axit pantothenic a.xit paraaminobenzoic giúp ngăn ngừa bệnh viêm loét miệng bệnh thiếu máu người Thiếu axit folic gáy thiếu máu nguyên hồng cầu khổng lồgiống thiếu máu thiếu vitamin Bl2 Axit Folic tham gia vào số biến dổi a.xit amin; vào tạo thành sử dụng format Ngoài thiếu a.xit folic nồng độ homocvstcrin máu tăng cao dó chất gâv chứng não suy Thiếu axit folic de gãy xư vữa dộng mạch bệnh tim Uổng axit l;olic lieu cao làm lượng vitamin thải qua nước tiêu tăng lên tí lệ Ihuận: lieu lớn axit folic có the gây chứng co giật người bệnh dộng kinh [ 1,2] Trên thực tố axit Folic thường dưực bố xung cho người thiếu axit Folic chế độ ãn: thiếu máu nguvên hồng cầu khổng lổ; Iiíỉưừi dang mang thai; ngưừi bệnh dang diéu trị băng thuốc kháng axi Folic methotrexat: người dang diổu trị dộng kinh hãng hydantoin Tuy nhiên không dược dùng axit Folic riêng biệt hay dùng phôi hợp với vitamin B|2 \’ứi lieu không dù dê diéu trị thiếu máu nguyên hổng cầu khổng lồ chưa chán đoán dược chán Các chế phẩm da vitamin có chứa axit Folic gây nguy hiểm che lãp mức độ thiêu thực vitamin Bịi tronc hênh thiếu máu nguyên hổng cáu thiêu vitamin B12 Trong trường hợp thê thiếu vitamin Iỉ|2 tránh không sứ dụng chi axit Folic cỏ thúc đẩv thoái lioá tuý sống bán cấp Đối với người dang mang thai, người dang đicu trị động kinh hay sốt rét cần bổ xung axit Folic (200 đến 400|ug ngày) II T ổ n g q u a n tìn h h ìn h n gh icn cứu tro n g n g o i nước / / / Tóm tăt CĨHỊỈ trình xác dinh axit Ịù tỉicỊỉ5-23Ị H.Jacopsen cộng xác định axit I;olic tron Si phain sứ dụng phưưng pháp cực phổ xoay chiều chọn pha Cực phổ dược ghi vó'] dung dịch có pH 5.5 từ 0.4 iióc pha ()" biên độ xoay chiêu 28mV Khống tuyốn tính từ 2.10 XM đen r’M Mẫu thuốc xử lý dung dịch DTPA (lOnil DTPA 0.15M pH với khoảng 30-60fig axit Polic>[22] C.M.G Van den Berg cộng xác dịnh hàm lượng axit F;oIic nước hién phương pháp von-ampc hoà tan hấp phụ theo pic khứ -0.75V Các điếu kiện tối ưu gồm: diện phân -0.25V; plỉ dung dịch 8.5 hồ tan theo chế dợ sóng vng với tần số - 10()Hz Khoảng tuyến tính cúa phương pháp 0 õ 0 n M (với tliừi gian diện phân 60s)Ị 19] Dcn-Bai Luo 118J xác dịnh axit folic băng phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ irên diện cực giọt Hg tĩnh Điều kiện tối ưu gồm: non axit H,S()j 0.1 M thố diện phân -0.3V xác định theo pic khứ -0.75V Ghi dường hoà tan theo kỹ thuật xung vi phân cho dộ nhạy cao xung thường Với thời gian làm giàu phút, giới hạn phát cúa phương pháp 10 "'M; RSD 1.217( với nồng dộ 5.10 XM Gielatin Br ánh hướng đốn phép xác dinh M.J.F Villamil cộng xác dịnli dồng thời ribollavin axit folic chuán hị niulli vitamin phương pháp von-ampe hấp phụ xoav chiều chọn pha Trong nén tlộm acctal 0.1M (pH =5), pic hoà tan cúa axit lolic xuất ớ-().55V(so với diện cực Ag/AgCI) Các diêu kiện tối ưu xác dịnh axit l-olic thơ diện phân -0 IV; gill đường hồ tan theo kv thuật xoav chiều với tán sô 7511/, thê xoay chiếu 20mV; tốc dộ quét 10mV/s Độ lệch chuán 0.74% ứ nồng dộ axit Folic 1.10 XM Các kết dược phán tích so sánh với phưưng pháp sắc kí lỏng pha dáo cho kết qú phù hợp [2 Cũng sử dụng phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ dòng xoay chiéu 116) Jilin Hail cộng áp dụng vào hệ dòng cháy xác định hàm lượng axit Folic khoáng nồng dộ 10 *-10 " M với hệ số tương quan 0.998 J.Aime/ del Pozo I 15 20] xác dinh axit Folic VI diện cực màng Hg trôn nen than Các diều kiên lao lối ưu dê tạo màng tliuý ngân nhu dế phán tích axil folic dã dược ntihicii cứu Khống tuyến tính cua phương pháp 1.10 "M clẽn 5.0 XM giới hạn pliál 9.10 "'M RSD 1.44r/r ứ nồng độ XM (n=10) III Lựa ch ọn dối tượng nghicn cứu Qua tham kháo tài liệu C Ũ I12 nhu cẩu lliực tế với V tướng xây dựng phương pháp làm pinion” pháp dối clúrniỉ phán lícli hàm lương axit ỉ-olic dược phấm ch lì nil lơi imliiơn cún xác dịnli hàm lượniỉ axil l-olic tronti số mẫu llniốc hăng plnrơim pỉp von-ampe hịa tail calol IICII diC'11 cực tiiol ill! treo IV Nội dung nghiên cứu IV ỉ N guyên tắc chung phương pháp von-ampe hoà tan Quá trình phân tích theo phương pháp von-ampe gồm giai đoạn: Giai đoạn làm giàu, giai đoạn dừng giai đoạn hồ tan Giai cĩoạn làm giùir Là q trình điện phân đế làm giàu chất phân tích lên bề mặt điện cực hoạt động dạng kim loại hợp chất khỏ tan Điện cực làm việc thường điẹn cực lỉg treo (IIMDh) có kích thước nhỏ cực đĩa quav vật liệu trơ (như than thuý tinh, than nhão , than ngâm tám, platin ): cực màng Ilg bề mặt cực rắn trơ; điện cực màng Bi (điểu chế chỗ hay diều chê trước) Quá trình điện phân thường tiến hành máv cực phổ thịng thường khơng dổi khuấv dung dịch với tốc độ Nếu dùng cực dạng đĩa dùng cực quay quanh trục nó, dùng cực thuy ngân tĩnh khuấy dung dịch bang máy khuấy từ Cỉiưi doạn củỉì hảỉìỊị' Thường 15-30 giây, dung dịch dê vên đê phân bố deu chất phân tích bé mặt diện cực Giai doạiì ỈÌÓ ỉan: Là q trinh hồ tan chất phân tích irên bề mặt điện cực làm việc bàng cách quét theo chicu xấc định (anot catot) sau dỏ ghi dường von-ampe hoà lan băng mội kĩ thuật diện hố dỏ Nêu q trình liồ tan trình anot phương pháp dược gọi von-ampe hồ tan anot (ASV) ngược lại q trình hồ tan quấ trình catot phương pháp dược gọi von-ampe hoà tan catot (CSV) Đại lượng điên hố ghi q trình hồ tan điểu kiện thích hợp tỉ lệ thuận với lượng chất dà kết tủa bể mặt điên cưc nồng dộ chất phân lích dung dịch IV Nguyên ỉý phép Ghép nối potentiostat với hệ ba điện cực: diên cực hoạt dộng (điện cực HMDIÍ) diện cực so sánh Ag/AgCl diện cực phù trợ Glas\ cacbon Giai doạn làm giàu: trình hấp phu axit iolic lên điện cực hoạt dộng Giai đoan hòa tan: quét thố từ -0.2V dốn -IV: LỊIIá trình khử cua axil folic PoMc actd (iy -dlhydrofolk: ackJ (II) ỈV.3 Đường von-ampe vòng axỉt Folic Trước nghicn cứu tính chất diện hố axit Folic khả ứng dụng phân tích đế hiểu rõ chế trình điện cực chúng tơi tiến hành ghi đường Von- Ampe vịng (CV) axit Folic Điều kiện ghi dường c v sau: rốc dộ quét 100 mV/s, quét từ -200 dến -1000 mV theo chiều phân cực catoi -1000 mV dến -200 mV theo chiều phân cực anổt Qua dường Von-Àmpe vòng (CV) ta thấy: 25Oa Khi ghi dường von-ampe vòng ỡ plỉ = 8.5: Khỉ phân cực theo chiều catot xuất pic -SOOmV, phân cực 0fi theo chiêu anot có xuất I pic khoảng -780mV ghi lặp lại nhiều vịng cường dộ dịng giảm dẩn có 75.On ị I chc phủ bề mặt diện cực 11MDH I I Qua dường von-ampc vòng, giá trị cường 100n độ dòng phân cực theo chiêu catot 200m ()0 m bU O m tìO D m u (V) uu anot, ta nhận thấy trình khứ diện cực cùa axil Folic Irong ncn pỉl 8.5 thuán pi I = 8.5 (đ ệ m borat) nghịch, dicu phù hợp với kết quã kháo sát ánh hướng kv thuật £hi dường von-ampe Hình Đường von-ampe vịng IV.4 Sụ xuất pic hồ tan axỉt Folic Đê xác định pic hịa tan axit folic dầu tiên diện phân dung dịch cỏ thành phẩn: Ncn borai có pl 1=8 1+ n\it ỉolic 8.82ppb 1+ axil folic 17.64pph Đuối () : hồ tan hăng N: tronìi 240 giây: điên phãn -0.3V (SOgiây: ghi dường hòa tan calôt tù -0.:o V tic'll -0.9V sú dụng kỳ thuât St|\v với tốc dô 10()mV/s, tốc dộ khuấ\ 2000 vịim/phút kích cỡ giọi Các đường von-ampc thu dược hình Bảng 16 Xác định hàm lượng axit Folic mảu thực tế STT Mâu Hàm lượna (mo Gateferone 0.55 Fevimin 0.23 Ferrotab 0.12 Ferrone 0.09 Gestiferro 0.55 V K ết lu ận kiến ngh ị Kết luận Đã nghiên cứu xác định pic hoà tan cúa axil folic -0.78 V Đã tìm dược diều kiện tối ưu xác dịnh axit tolic: - Chế dộ ghi pic hồ tan axit folic chế độ sóng vuông pH tối ưu 8.5 (đệm borat) Khoảng diện phân thích hợp -0.2V 'rốc dỏ quét lliố lliícli hợp 100mV/s Kích cỡ giọt II” 'riiời gian sục khí 180s 'rốc dơ khuấy 1ỎOOvịng/phút Đã khao sát ánh hướng số yếu tỏ cho phép xác chilli axil I’olic: chất hoạt dộng bồ mặt sô ion kim loại, vitamin Đã xây dựng dường chuẩn xác định axit folic irong khống nóng độ 0.8824.41ppb X.X2-44.1 pph giới hạn phát hit'll cua phép 0.01 ro pph: dộ lệc chuẩn từ 0.1X-1.24c/( Đã xác dịnli hàm lượng axil Folic sỏ mảu dược phẩm Kiên nghị Tiếp tục hướng phát tricn cua đồ tài, nghiên cứu phương pháp von-anipc hòa tan hấp phụ xác dịnh vitamin, chát kháng sinh 23 Tài liệu tham khảo A Tài liệu tiêng Việt Dược thư quốc gia, Bộ Y tế Nhà xuất Hà nội 2002 Tài liệu tìm kiếm trang \\ \\ u google.com/ (từ khoá axit folic) B Tài liệu tiêng Anh V Andrisano * M Bartolini c Bertucci, V Cavrini, B Luppi T Cerchiara Journal o f Pharmaceutical and Biomedical Analysis 32 (2003) 983- 989 Analytical methods i'or the determination o f folic acid in a polymeric micellar carrier Andrea Leporatia, Dante Catellania Michcle Sumana Roberta Andreolib Paola Maninib Wiliricd M.A Niessenc Analytica Chimica Acta 531 (2005) 87-95 Application oi' a liquid chromatograph) tandem mass spectrometry method to the analysis o f water-soluble vitamins in Italian pasta .1 Rodr Yguez Flores a (j Casta'neda Pc'nalvo a A Kspinosa Mansilla h M.J Rodr yguc/ G omezb Journal of Chromatoeraphv B 819 (2005) 141-147 Capillary electrophoretic determination o f methotrexate, eucovorin and folic acid in human urine Stcfania Ruggcri I.lisa Vahtcristo Altcro Auu/./.i Paul I-'inglas Hmilia ( ’arnovale Journal of Chromaloaraphv A 855 (1999) 237 245 Determination of folate vitamers in food and in Italian reference q diet by hieh-performance liquid c h r o m a t o r a p h y A Rodr yeuc/.-Bcrnaldo dc Quirós (' Castro de Ron .1 Lopex-Hernandez M.A Laue-Yusty Journal oi' Chromatography A Determination of folates in seaweeds by 1032 (2004) 135-139 high-performance liquid chromaUmraph\ Shulin Zhaoa.b I lonuvun Yuan a Chao Xic a Dan Xiao Journal OÍ' Chromatography A 1107 (2006) 290-293 Determination o f folic acid by capillary electrophoresis with chemilumincscence detection Dictmar Brcithaupt* Food Chemistry 74 (2001) 52] 525Analytical Nutritional and Clinical Methods Section Determination of folic acid b\ ionP'lir RP-IIPI c ill vitamin-lbrli.cd iVuil juiccs alter solid-phasc extraction 10 Solcdad Albalti-I lurtado Journal of C’hroniatoyraphN A 778 (1997) 247-253 ^'termination of water-soluble vitamins in infant milk by high-performance liciuid chromatography ll M - Jamil Akhtar a M Ataullah Khan a'* Iqbal Ahmad: Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 16 (1997) 95 99 High performance quid chromatographic determination of folic acid and its photodegradation products in the presence o f riboflavin / h i ( hen Bo c hai Shou/.huo Yao Anah tica Chimica Acta 569 (2006) 169175, High-perlormance liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry lor simultaneous determination of taurine and 10 water-soluble vitamins in multiv itamin tablets 13 Padmarajaiah Nagaraja.* Ramanathapura A Vasantha and Hemmige s Yathirajan: Analytical Biochemistry 307 (2002) 316 321 Spcctrophotometric dctcimination ol lolic acid in pharmaceutical preparations by coupling reactions with iminodiben/yl or 3- aminophenol or sodium molybdate pyrocatechol 14.RU1 A.S Lapaa** Josh L.F.C I.imaa Boavcntura F Rcish Jo5() I M Santosa Hlias A.G /a gattob Analytica Chimica Acta 351 (1997) hotochemical-fluorimetrii: determination of lolic acid ill a 223-228 ulticommutated flow system 15 J Amez del Pozo A Costa Garcia and IJ Tull&r Blanco Analytica Chimica Acta 273 (1993) 101-109, Adsorptive stripping voltammetry on mercur}-coated carbon fibre ultramicroclcctrodes 16 Jilin Han Ilongyuan C'hcn * and Honu Gao Anulytica Chintica Actn 252 (1991) -52, Alternating current adsorpthe stripping vohammetrv in a How system lor the determination of ultratracc amounts of folic acid 17 Sequoia s.A LYm sanne.Bioeledrochem isfrv and BiocncríỊctics 2~ V — Kỹ thuật đo -■'hp Tốc dộ phân cực *■hp V(mV/s) 100 77.5 82.4 40 20 100 91.6 125 150 86.8 80 60 - o -1 ô(ãằ I,: [FA]=8.82ppb Ị: [FA] = 1.323ppb E(V) - hoà tan 88.2 86.9 88.3 200 Độ bén cua phức l.Os Đệm acetat 40s 3.60s 4.80s 5.100s 6.120s 7.140s 8.160s nm OỮ1 ĩaom vm I (nA) 25 50 75 Đệm borat 180s pH 4,0 5,0 6,0 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 I(nA) Xuất pic 348 306 282 307 154 [borat]* 10-3(M) 1,25 I (nA) 19,6 2,5 44,2 5,0 67,7 7,5 51,4 10.200 t(phút) 1.10 7nA 2,69 2,60 2,72 2,66 2,44 10 2,72 30 2,56 60 2,49 75 2,49 80 lU z U U2,42 go - Bảng Tóm tắt điều kiện ưu xác định axil Folic K ết luận: C ác điều kiện tối ưu đ ể xác định axit fo lic phương pháp von-ampe hoà tan là: hấp phụ: -0.2V; thời gian hấp phụ 60s nồng độ axit folic khoảng lOppb 120-180s nồng độ axit folic khoảng lppb, đệm borat pH 8.5 phân cực theo chiều catot sử dụng kĩ thuật sóng vng với tốc độI00mV/s Định lửợngtheo pic Ep -0.8V Oxi hoà tan gây ảnh hưởng đến phép đo, cần loại trừ Độ bền cua axit folic giảm chút theo thời gian, cường độ dòng bắt đầu giảm khoảng 10% thời gian 80 phút ^ , A/ *■ *» I ■ _ 114 l K hảo sát ảnh hưởng chất hoạt động bê mặt Trong phương pháp von-ampe hồ tan hấp phụ có mặt cùa chất có khả hấp phụ ữên bé mặt gic* Hg gây ảnh hưởng đến phép xác định trình hấp» phụ cạnh ưanh Để khao sat anh hưởng cùa Gielatin tiến hành đo cường độ pic khử cùa 17.64ppb axit foUc chứa CO gielatin có mặt gielatin kết thu cho bảng sau: Bảng Khảo sát ảnh hường cua gielatin C(%) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0.012 I(nA ) 175 145 118 95,3 65,5 46,6 31,1 0.005 001 Nóngdủgirlalin 1%) Pic ảnh hưởng nồng độ Đường biểu diễn ảnh hưởng nồng độ gielatin gielatỉn Sự có mặt Gelatin có ảnh hưởng lớn tới cường độ pic hoà tan axit folic cường độ giảm dần nồng độ Gelatin tảng dan từ 0,002% nồng Gelatin băng 0.012 % cường độ píc giảm 82% cường độ pic ban đầu ĩĩ.4.2 Khảo sát ảnh hưởng môtị số io n vitamin Với điều kiện tối ưu II.3, khảo sát ảnh hưởng số ion (B r; Fe3+); vitamin B 12; vitamin c Các kết tóm tắt bảng _ Bảng Tóm tát yếu tỏ ảnh hưởng 0 _ 1000 2000 80 160 240 Ọ [Vitamin C] (ppm) [B ri (ppm) 64 128 [Vitamin B12] (ppt) Ũ.5 Độ lặp lạỉ, đường chuấn, giới hạn phát IL5.1* Đường chuẩn: Với điểu kiện tối ưu vừa khảo sát 11.3, xây dựng đường chuẩn xác định nồng độ axit folic khoảng nồng độ từ 0.882ppb đến 4.41ppb (thcri gian điện phân 180s 120s), nồng độ axit từ 8.82 ppb đến 44.1 ppb (thời gian điện phân 60s), đường chuẩn thu hình a a IP -GOOn Đ ãUXK ã1* K M f-J fr ẫ - -ICO* [ L M r* Jo b * « D - I - & n V Ui Q.882ppb đến 4.41ppb II.5.3 Độ lặp lại 8.82 ppb đến 44.1 ppb 0,882ppb 2,646ppb 18,9 18,8 18,7 18,9 18,7 18,9 18,9 18,8 18,7 18,6 18,79 55,4 55,3 55,2 55,2 55,3 55,4 55,4 55,1 55,3 55,2 55.27 s 0,11 0.1038 V(%) 0.58 0.18 srK 4,41 ppb 88.6 88,6 88,5 88,7 88,7 88,8 88,5 88,5 88,7 88,7 88.6 0.10 59 1.24 c \ 10 itb X íc định độ lặp lại phép đo đối V( i dung dịch có chứa với điều ki ện tối ưu lập đường chuẩn l 'ộ lệch chuẩn s V ( -V - 1> -tti )ng N số lần đo; H ì số biến đơng: V = —^-100% K thu bảng b( II.6 Áp dụng phản tích mẫu thực tế Với điều kiên tối ưu II.3 tiến hành xác định hàm lượng axit Folic số dược phẩm Quy trình phân tích sau: Mẫu phân tích nghiền mịn, hịa tan nước (đối với mẫu có vỏ bọc đường bỏ phần vỏ đường hịa tan phần thuốc trong), định mức đến 100ml, để lắng hút 10ml dung dịch đó, thêm dung dịch đệm borat pH 8,5, định mức 50ml ghi đường von-ampe hòa tan Xác định hàm lượng axit Folic mẫu thuốc theo I / V I â l * Gateferone ĩ' , _ * ' _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ |_ *_ _ _ _ _c J Đường chuẩn (hêm chuẩn Pic thêm chuẩn Mẫu T/ < b •iMk w 25 20 11 z 15 10 , / - -4 -2 F = 9987 STT Mầu Gateferone Fevimin Feưotab Ferrone Gestiferro Hàm lượng (mg/viẻn) 0,55 0,23 0,12 0,09 0,55 > m III.Kết luận Đã nghiên cứu xác định pic hoà tan axit folic -0,78V xác định điều kiên tối ưu xác định axit folic: Chế độ ghi pic hoà tan axit folic chế độ sóng vng; pH tối ưu 8,5 (đệm borat); khoảng điện phân thích hợp -0,2V; tốc độ quét thích hợp 100mV/s; kích cỡ giọt Hg 3; thời gian sục khí 180s; tốc độ khuấy 1600vịng/phút Đã khảo sát ảnh hưởng sô' yếu tố cho phép xác định axit folic: chất hoạt động bề mặt, số ion kim loại, vitamin xây dựng đường chuân xác đinh axit folic khoảng nồng độ 8 -4 lppb 8.82-44 lppb, giới hạn phát phép đo 0,0155 ppb; độ lệc chuẩn từ 0.18-1.24% Tài liệu tham khảo Jilin Han, Hongyuan Chen * and Hong Gao, Anulytica Chintica Acta, 252 (1991) 47-52, Alternating current adsorptive stripping voltammetry in a flow system for the determination o f ultratrace amounts o f folic acid Sequoia S.A., Lliusanne,Bioelectrochem isfry and Bioenergctics, 27 (1992) 46547JCarbon paste electrodes modified with palmitic acid and stearic acid for the determination o f folic acid (vitamin E9) in both aqueous and biological media DEN-BAI LUO, A nalytica Chimica Acta, 189 (1986) 277-283 DETERMINATION OF FOLIC ACID BY ADSORPTIVE STRIPPING VOLTAMMETRY AT THE STATIC M ERCURY DROP ELECTRODE Anne-Christine Le Gall and Constant M.G van den Berg; Analytica Chimica Acta, 282 (1993) 459-470; Determination o f folic acid in sea water using adsorptive cathodic stripping voltammetry Thomas J O ’Shea \ Agustin Costa Garcia and Paulino T&-km BlancO *J Electronnal Chem., 307 (1991) 63-71; Electrochemical pretreatment o f carbon fibre microelectrodes for the determination of folic acid Marta Plavsjic' * Environment International 30 (2004) 761- 767 Long-term variations o f folic acid concentrations in the Northern Adriatic E JACORSEN* and M JWESE BJORNSEN; Analytica Chimica Acta, 96 POLAROGRAPI-IIC DETERMINATION OF FOLIC ACID IN PHARM ACEUTICAL PREPARATIONS M J F Vdlanul, A J Mu-anda Ordleres, A Costa Garcia and p Tufi6n Blanco Analitica Chimica Acta, 273 (1993) 377-382 Simultaneous adsorptive stripping voltammetric determination o f riboflavin and folic acid in multivitamin preparations Cơng trình hồn thành từ hỗ trợ kinh phí đề tài QT 07-26 ĐẠI H Ọ C Q U Ố C GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN KHỎA HÓA HỌC NGUYỀN THỊ LAN NGHIÊN C Ứ U XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT FOLIC BẰNG PHƯƠNG PHAP V O N -A M P E HÒA TAN CATOT TRÊN ĐIỆN GIỌT THỦY NGÂN TREO (HMDE) cực K H Ó A LUẬN TĨ T N G H IỆ• P ĐẠI HỌC • • • Giao viên huóng dẫn: Th.s Lê rhị Hưong Giang Hà nội 2007 ... phương pháp điện hố Trong đề tài này, chúng tơi nghiên cứu tính chất điện hố axil Folic từ ứng dụng xác định axit Folic bàng phương pháp von-ampe hoà tan catot (CSV) diện cực giọt thuỷ ngân treo. .. Bao mật: a Phố hiến rộng rãi: b Phô hicn han ch? ?: c Bao mật: X óm tắt kết nghiên cứu: Đã tìm dược điều kiện tối ưu xác định axit Folic phương pháp von-ampe hòa tan catot diện cực giọt Hg treo Xây... điều kiện tối ưu xác định axit Folic phương pháp von-ampe hòa tan catot điện cực giọt Hg treo Xây dựng quy trình xác định axit Folic số mẫu dược phám ứ n g dụng phân tích số mẫu dược phấm Kiến