Mối liên quan giữa kháng thể kháng nhân và kháng chuỗi kép DNA với mức độ nặng của bệnh Lupus ban đỏ hệ thống

Bài viết đánh giá mối liên quan của các kháng thể kháng nhân phát hiện bằng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào Hep-2 và kháng thể kháng chuỗi kép DNA sử dụng kỹ thuật ELISA với mức độ nặng của bệnh nhân Lupus ban đỏ hệ thống.

TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 MỐI LIÊN QUAN GIỮA KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN VÀ KHÁNG CHUỖI KÉP DNA VỚI MỨC ĐỘ NẶNG CỦA BỆNH LUPUS BAN ĐỎ HỆ THỐNG Lê Hữu Doanh, Đào Thị Trang Trư ng h YH N C t h ng th tr n tr ng tr ng h n n t n ng nh n h th ng Ngh n nh g n n h ng th h ng nh n ( N ) h t h n ng n h h nh ng g n t tr n t H -2( H TH - 2) h ng th h ng h N ( N ) ụng th t n ng nh nh n n h th ng Ngh n tr n nh nh n h n n nh n h th ng t h ng h nh n Tr ng ương N ương t nh h ng th h ng N nh nh n ương t nh N ng H TH -2t th n t h n h n n n h th ng r 05 nh nh nh n t n thương th n n ng h ng th h ng N ương t nh ngh th ng nh nh nh n h ng t n thương th n (1 0 94 45 0 ) Ngh n t n r ng h t h n N ng H TH -2 h ng th h ng N ng g tr t n ng n ng t n thương th n nh nh n n h th ng Từ khóa: lupus ban đỏ hệ thống, ANA, dsDNA, miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, HEp - I ĐẶT VẤN ĐỀ Lupus ban đỏ hệ thống – lupus ban đỏ hệ thống (Systemic Lupus Erythematosus) bệnh tự miễn, tế bào tổ chức bị tổn thương lắng đọng tự kháng thể bệnh lý phức hợp miễn dịch Cho đến nay, nguyên nhân cụ thể bệnh chưa biết rõ Tuy nhiên, nghiên cứu vai trò quan trọng yếu tố gen, hormone sinh dục, môi trường với rối loạn đáp ứng miễn dịch chế bệnh sinh [1] Biểu lâm sàng lupus ban đỏ hệ thống đa dạng Triệu chứng hay gặp đau khớp, ban đỏ cánh bướm mặt, sốt, rụng tóc…kháng thể kháng nhân dương tính, kháng thể kháng chuỗi kép DNA dương tính Ở Việt Nam, lupus ban đỏ hệ thống đề cập từ năm 70 Cho tới nay, lupus ban đỏ hệ thống đánh giá bệnh hay gặp hàng đầu bệnh tổ chức liên kết tự miễn hệ thống Tổn thương da, niêm mạc biểu hay gặp lupus ban đỏ hệ thống có tính chất đa dạng, phong phú [2; 3; 4] Do đó, đánh giá phân tích tổn thương da kết hợp với biểu lâm sàng khác có vai trò quan trọng, giúp cho chẩn đốn, điều trị theo dõi bệnh Các tổn thương nội tạng lupus ban đỏ hệ thống đề cập đến từ lâu, có tính chất h nh H nh YH N nh h h Ng nh n 24 2014 Ng h th n 11 2014 h n trư ng định đến mức độ nặng nhẹ bệnh, việc theo dõi đánh giá số cận lâm sàng, xét nghiệm miễn dịch cần thiết giúp người thầy thuốc phân loại thể bệnh lupus, mức độ hoạt động đáp ứng điều trị bệnh nhân [5] Nghiên cứu nhằm mục tiêu: 1) Xác định mối tương quan kết phát kháng thể kháng nhân (ANA) miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - với mức độ nặng bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống; 2) Đánh giá mức độ dương tính kháng thể kháng chuỗi kép DNA (dsDNA) với tổn thương thận bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống đến khám phòng khám ngoại trú bệnh viện Da liễu Trung ương từ tháng 5/2013 đến 11/2013 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng: 172 bệnh nhân chẩn đoán xác định lupus ban đỏ hệ thống có ≥ 4/11 tiêu chuẩn chẩn đoán theo ACR 1997 Bệnh nhân điều trị ngoại trú bệnh viện Da Liễu Trung ương từ 01/05/2013 đến 30/11/2013 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân: bệnh nhân chẩn đoán xác định lupus ban đỏ hệ thống, không phân biệt tuổi, giới đồng ý tham gia nghiên cứu Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân: bệnh nhân có biểu lâm sàng xét nghiệm thể phối hợp nhiều bệnh hệ thống Phương pháp: tiến cứu, mô tả cắt ngang - Xét nghiệm phát ANA kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang tế bào HEp - ELISA Xét nghiệm phát kháng thể kháng dsDNA kỹ thuật ELISA 47 TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 Sinh phẩm xét nghiệm từ hãng MBL, Nhật Bản Tỷ lệ tiểu chuẩn xuất ANA cao tiêu chuẩn chẩn đoán lupus ban đỏ hệ thống Xử lý số liệu: sử dụng phần mềm SPSS 16.0 Đạo đức nghiên cứu: Bệnh nhân tự nguyện tham gia có quyền rút lui khỏi nghiên cứu thời điểm thông tin bệnh nhân mã hóa, giữ bí mật Trong số 172 bệnh nhân đủ tiêu chuẩn chẩn đoán lupus ban đỏ hệ thống, có 108 (62,8%) bệnh nhân làm ELISA 172 (100%) bệnh nhân làm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - để phát ANA III KẾT QUẢ Bảng Kết phát kháng thể kháng nhân TT Phương pháp phát ANA Kết (dương tính / tổng số) % ELISA 83/108 76,9% MDHQGT / HEp - 164/172 95,3% Cả phương pháp 166/172 96,5% Kết cho thấy 76,9% bệnh nhân dương tính với kháng thể kháng nhân kỹ thuật ELISA 95,3% bệnh nhân dương tính với kháng thể kháng nhân kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - Khi kết hợp phương pháp có 166 bệnh nhân có ANA dương tính chiếm 96,5% số bệnh nhân nghiên cứu Kháng thể kháng dsDNA xuất cao bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống Kháng thể kháng chuyển kép DNA (dsDNA) có giá trị chẩn đốn mức độ nặng bệnh Nghiên cứu tiến hành xét nghiệm phát kháng thể kháng dsDNA cho 102 bệnh nhân kỹ thuật ELISA Bảng Kết xét nghiệm kháng thể kháng dsDNA TT Xét nghiệm kháng thể kháng dsDNA Kết Dương tính/ Tổng số (n = 102) 60/102 (58,82%) ± SD (n = 60) 138,02 ± 64,32 (UI/ml) Trong số 102 bệnh nhân làm xét nghiệm kháng thể kháng dsDNA có 60 bệnh nhân cho kết dương tính, chiếm 58,8% Giá trị kháng thể kháng dsDNA trung bình nhóm bệnh nhân dương tính 138,02 ± 64,32 UL/ml Mức độ dương tính ANA có mối liên quan đồng biến với số tiêu chuẩn chẩn đoán lupus ban đỏ hệ thống Biểu đồ Sự tương quan tuyến tính mức độ dương tính ANA số tiêu chuẩn chẩn đoán lupus ban đỏ hệ thống 48 TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 Khi xác định mối liên quan mức độ dương tính ANA kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - với số tiêu chuẩn chẩn đốn lupus ban đỏ hệ thống, chúng tơi đánh giá 172 bệnh nhân chẩn đoán lupus ban đỏ hệ thống Mức độ dương tính ANA (phương pháp miễn dịch huỳnh quang tế bào HEp - 2) có tương quan tuyến tính đồng biến chặt chẽ với r = 0,582 Phương trình tuyến tính: Mức độ dương tính ANA = 0,69* số tiêu chuẩn chẩn đoán – 1,13 Kháng thể kháng dsDNA tăng cao bệnh nhân có tổn thương thận Khi so sánh mối liên quan tổn thương thận kháng thể kháng dsDNA dương tính, kết bệnh nhân có tổn thương thận nhóm có kháng thể kháng dsDNA dương tính 30% cao có ý nghĩa thống kê so với bệnh nhân có tổn thương thận nhóm âm tính với kháng thể kháng dsDNA 14,3% với p = 0,047 Bảng Giá trị trung bình kháng thể kháng dsDNA nhóm dương tính bệnh nhân có khơng có tổn thương thận Giá trị kháng thể kháng dsDNA (UI/ml) Trung bình Tổn thương thận Có (n1 = 18) Khơng (n2 = 42) 131,03 ± 60,75 94,23 ± 45,62 p 0,03 Giá trị trung bình kháng thể kháng dsDNA nhóm dương tính bệnh nhân có tổn thương thận cao có ý nghĩa thống kê so với bệnh nhân khơng có tổn thương thận IV BÀN LUẬN Trong nhiên cứu, ANA phát kỹ thuật ELISA miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - Nghiên cứu phát 96,5% bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống có ANA dương tính, kết tương tự với nghiên cứu Cerovec năm 2012 95,7% [6] Trần Thúy Hạnh (2006) 94,3% [7] Độ nhạy phương pháp xét nghiệm ANA miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - 95,3%, cao so với phương pháp phát ANA ELISA (76,9%) Kết phù hợp với nghiên cứu tác giả Hoàng Thị Phượng (2014) [8] El-Chennawi (2009) [9] Độ nhạy xét nghiệm ANA phương pháp MDHQ gián tiếp cho lupus ban đỏ hệ thống cao, 95%, ANA âm tính có giá trị tốt để loại trừ lupus ban đỏ hệ thống không cần thiết để xét nghiệm kháng thể kháng lại thành phần nhân đặc hiệu dsDNA, Sm,…Nhìn chung, nhiều bệnh lý tự miễn có kháng thể kháng nhân nên độ đặc hiệu ANA không cao Trong số 102 bệnh nhân làm xét nghiệm kháng thể kháng dsDNA có 60 bệnh nhân cho kết dương tính, chiếm 58,8% Tỷ lệ nghiên cứu Phạm Văn Thức 60,92%, Nguyễn Quốc Tuấn 60%, Nguyễn Thị Vân 41,8% [10] Kháng thể kháng dsDNA xuất lupus ban đỏ hệ thống (khoảng 60 - 80%) xuất bệnh khác người bình thường khỏe mạnh, có thường với hiệu giá thấp Độ đặc hiệu kháng thể kháng dsDNA cho lupus ban đỏ hệ thống cao (97 - 100%), kháng thể kháng dsDNA dương tính có vai trò quan trọng cho chẩn đốn lupus ban đỏ hệ thống Tuy nhiên, nồng độ kháng thể kháng dsDNA thay đổi theo thời gian, vài nghiên cứu nhóm bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống rằng, nồng độ kháng thể kháng dsDNA có tương quan với biểu lâm sàng đợt cấp tính bệnh, hầu hết bệnh nhân có hiệu giá kháng thể cao thường đến trước xuất đồng thời với đợt cấp bệnh [11; 12] Tổng số nghiên cứu cặp tương quan 172 bệnh nhân, thấy mức độ dương tính ANA số tiêu chuẩn chẩn đốn có tương quan tuyến tính đồng biến chặt chẽ với r = 0,571 Giá trị trung bình mức độ dương tính ANA (theo phương pháp MDHQ gián tiếp tế bào HEp - 2) nhóm bệnh nhân có tiêu chuẩn chẩn đốn cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh nhân có từ tiêu chuẩn chẩn đoán trở xuống Tỷ lệ tổn thương thận nhóm bệnh nhân có kháng thể kháng dsDNA dương tính cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh nhân có kháng thể kháng dsDNA âm tính Giá trị trung bình kháng thể kháng dsDNA nhóm dương tính bệnh nhân có tổn thương thận cao có ý nghĩa thống kê so với bệnh nhân khơng có tổn thương thận Trong nghiên cứu Nguyễn Quốc Tuấn (1991) Kosaraju K (2010), 100% bệnh nhân có tổn thương thận có kháng thể kháng ds49 TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 DNA dương tính hiệu giá kháng thể/ nồng độ kháng thể kháng dsDNA bệnh nhân có protein niệu cao nhiều so với bệnh nhân khơng có protein niệu [13] Nghiên cứu P Alba cộng (2003) cho thấy tỷ lệ cao kháng thể kháng dsDNA dương tính nhóm có viêm thận (với p = 0,002) [14] Như vậy, kết nghiên cứu chúng tơi phù hợp góp phần khẳng định kháng thể kháng chuỗi kép DNA đặc trưng có mối liên quan chặt chẽ với tổn thương thận V KẾT LUẬN Phát kháng kháng thể kháng nhân miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp - có giá trị tiên lượng mức độ nặng thơng qua số tiêu chuẩn chẩn đốn bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống Trong đó, phát kháng thể kháng dsDNA kỹ thuật ELISA giúp đánh giá mức độ tổn thương thận bệnh nhân Lời cảm ơn Chúng tơi cám ơn phòng khám khoa xét nghiệm bệnh viện Da liễu Trung ương hỗ trợ hoàn thành đề tài referral center n n r t 54, 132 - 136 Kaposi MH (1872) Neue Beitrage zur Keantiss des lupus erythematosus r h r t h 4, 36 Cerovec, M., Anic, B., Padjen, I., and Cikes, N (2012) Prevalence of the American College of Rheumatology classification criteria in a group of 162 systemic lupus erythematosus patients from Croatia Cr t 53, 149 - 154 Trần Thúy Hạnh (2006) Tìm hiểu vai trò kháng thể kháng chuỗi kép DNA kháng thể kháng nhân bệnh lupus ban đỏ hệ thống T h h h ng 85, 69 - 72 Phuong, H.T., My, L.H., Minh, V.N., et al (2014) Antinuclear antibody detection by hep-2 immunofluorescence test in diagnosis of systemic lupus erythematosus tn rn r t g n n r g 15, 67 - 72 El-Chennawi F.A (2009) Comparative study of nuclear antibody detection by indirect immunofluorescence and enzyme immunoassay in lupus patients n n t 38, 839 - 850 10 Nguyễn Thị Vân (2004) Biểu lâm sàng xét nghiệm bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống T h Yh tN 379, 51 - 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 11 Nguyễn Văn Đĩnh, Nguyễn Hữu Trường (2013) Một số tự kháng thể thường gặp bệnh hệ thống Y h ng (70), 29 - 36 Kalden J.R (1996) Pathhogenic aspects of systemic lupus erythematosus 32, - 12 Karsten Conrad, W.S (2007) Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference, nd ed Marc CH (2000) The history of lupus erythematosus 9, - 10 Obermoser, G., Sontheimer, R.D., and Zelger, B (2010) Overview of common, rare and atypical manifestations of cutaneous lupus erythematosus and histopathological correlates 19, 1050 - 1070 Kole, A.K., and Ghosh, A (2009) Cutaneous manifestations of systemic lupus erythematosus in a tertiary 13 Kosaraju K, and Shenoy S, S.U (2010) A crosssectional hospital-based study of autoantibody profile and clinical manifestations of systemic lupus erythematosus in south Indian patients n n r 28, 245 - 247 14 P Alba, L.B., M J Cuadrado, et al (2003) Anti-dsDNA, anti-Sm antibodies, and the lupus anticoagulant: significant factors associated with lupus nephritis nn h 62, 556 - 560 Summary THE CORRELATION BETWEEN ANTI NUCLEAR ANTIBODIES (ANA) AND ANTI DOUBLE STRANDED DNA (dsDNA) ANTIBODIES WITH SEVERITY OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS Auto - antibodies have important roles in diagnosis and progress of systemic lupus erythematosus (SLE) The study investigated the correlation of anti-nuclear antibodies (ANA) detected by HEp-2 based indirect immunofluorence (HEp-2/IDF) and anti double-stranded DNA antibody (dsDNA) by ELISA with severity of SLE patients In 172 SLE 50 TCNCYH Phụ trương 91 (5) - 2014 out - patients from Vietnam National Hospital of Dermatology – Venereology, ANA positive and anti - dsDNA positive were 96.5% and 58.8%, respectively The degree of ANA positive detected by HEp-2/IDFhad positive relationship with numbers of SLE criteria with r=0,582 The level of anti-dsDNA antibodies in renal involved SLE group is significantly higher when compared with non-renal involved SLE group (131,03 ± 60,75 UI vesus 94,23 ± 45,62 UI, with p = 0.03) This study conclude that HEp-2/IDF positive ANA and ELISA positive anti-dsDNA have positively indicated the severity of SLE and renal involvement Key words: SLE, ANA, dsDNA Indirect Immunofluorecence, HEp-2 51 ... tính chiếm 96,5% số bệnh nhân nghiên cứu Kháng thể kháng dsDNA xuất cao bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống Kháng thể kháng chuyển kép DNA (dsDNA) có giá trị chẩn đoán mức độ nặng bệnh Nghiên cứu tiến... Kháng thể kháng dsDNA xuất lupus ban đỏ hệ thống (khoảng 60 - 80%) xuất bệnh khác người bình thường khỏe mạnh, có thường với hiệu giá thấp Độ đặc hiệu kháng thể kháng dsDNA cho lupus ban đỏ hệ. .. nhóm bệnh nhân có kháng thể kháng dsDNA dương tính cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh nhân có kháng thể kháng dsDNA âm tính Giá trị trung bình kháng thể kháng dsDNA nhóm dương tính bệnh nhân