Đánh giá hiệu quả vắc xin lở mồm long móng trong công tác phòng chống bệnh lở mồm long móng trên đàn lợn nái ông bà tại xí nghiệp giống gia súc thuận thành

Đánh giá hiệu quả vắc xin lở mồm long móng trong công tác phòng chống bệnh lở mồm long móng trên đàn lợn nái ông bà tại xí nghiệp giống gia súc thuận thành

Bộ giáo dục và đào tạo trường đại học nông nghiệp I

-

lê thị minh thu

Đánh giá hiệu quả vắc xin Lở mồm long móng trong

công tác phòng chống bệnh Lở mồm long móng

trên đàn lợn nái ông bà tại xí nghiệp

giống gia súc Thuận Thành

Luận văn thạc sĩ nông nghiệp

Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50

Người hướng dẫn khoa học: TS tô long thành

Hà Nội, 2006

lời cam đoan

Tôi xin cam đoan, số liệu và kết quả nghiên cứu trình bày trong luận văn này là trung thực và ch−a đ−ợc sử dụng để bảo vệ một học vị nào

Tôi xin cam đoan, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã

đ−ợc cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã đ−ợc chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả luận văn

Lê Thị Minh Thu

Lời cảm ơn

Trong suốt 2 năm học tập và hoàn thành luận văn, với nỗ lực của bản thân, tôi đã nhận được sự giúp đỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, cho phép tôi được tỏ lòng biết ơn và cảm ơn chân thành tới:

Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông nghiệp I, khoa Sau Đại học, khoa Chăn nuôi - Thú y, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương, các thầy cô giáo đã giúp đỡ, tạo điều kiện để tôi học tập, tiếp thu kiến thức của chương trình học

Các thầy cô giáo trong bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Bệnh lý khoa Chăn nuôi - Thú y Trường Đại học Nông nghiệp I; các cán bộ thuộc bộ môn Vi rút, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương

Trực tiếp là thầy hướng dẫn TS Tô Long Thành, Phó giám đốc Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương

Ban Lãnh đạo công ty, Ban lãnh đạo xí nghiệp và toàn thể cán bộ công nhân xí nghiệp lợn giống Thuận Thành

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân cùng bạn bè đã động viên giúp đỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu, thực hiện đề tài

Một lần nữa tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành chương trình học tập.

Tác giả luận văn

Lê Thị Minh Thu

Mục lục

1 Mở đầu i

1.1 Tính cấp thiết của đề tài 10

1.2 ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 12

1.3 mục tiêu của đề tài 12

2 Tổng quan tài liệu 13

2.1 Lịch sử bệnh Lở mồm Long móng 13

2.1.1 Định nghĩa 13

2.1.2 Lịch sử bệnh Lở mồm Long móng 13

2.2 Tình hình dịch bệnh Lở mồm Long móng trên thế giới và

Đông Nam á 14

2.2.1 Tình hình dịch bệnh Lở mồm Long móng trên thế giới 14

2.2.2 Tình hình dịch LMLM ở Đông Nam á 16

2.2.3 Tình hình dịch Lở mồm Long móng ở Việt Nam 18

2.3 Vi rút Lở mồm Long móng 21

2.3.1 Hình thái, cấu trúc 21

2.3.2 Phân loại và biến chủng của vi rút 24

2.3.3 Đặc tính nuôi cấy 26

2.3.4 Sức đề kháng 27

Trang

2.3.5 Độc lực, tính gây bệnh 28

2.3.6 Nguồn dịch và cách lây lan 29

2.3.7 Triệu chứng 31

2.3.8 Bệnh tích 32

2.3.9 Chẩn đoán 33

2.3.10 Đáp ứng miễn dịch 41

2.4 Vắc xin 45

2.4.1 Vắc xin nhược độc formol keo phèn 46

2.4.2 Vắc xin vô hoạt nuôi cấy trên môi trường tế bào 46

2.4.3 Vắc xin sản xuất theo công nghệ gen 47

3 đối tượng, nội dung, nguyên liệu

và phương pháp nghiên cứu 48

3.1 Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu 48

3.2 Nội dung nghiên cứu 48

3.2.1 Đánh giá tình hình dịch LMLM năm 2006 48

3.2.2 Tình hình dịch bệnh tại xí nghiệp 48

3.2.3 Khảo sát diễn biến đáp ứng miễn dịch của đàn lợn sau khi tiêm vắc xin LMLM (Phương pháp Elisa phát hiện kháng thể) 48

3.2.4 Đánh giá hiệu quả của việc sử dụng vắc xin phòng bệnh LMLM, so sánh với biện pháp tổng thể 48

3.3 Địa điểm nghiên cứu 49

3.4 Nguyên liệu 49

3.4.1 Dụng cụ 49

3.4.2 Máy móc thiết bị: 49

3.4.3 Nguyên liệu làm thí nghiệm 50

3.5 Phương pháp nghiên cứu 50

3.5.1 Bố trí thí nghiêm 50

3.5.2 Phương pháp thu thập, vận chuyển và bảo quản bệnh phẩm 51

3.5.3 Phương pháp ELISA - 3ABC để phân biệt miễn dịch tự nhiên và

miễn dịch bị động tự nhiên 52

3.5.4 Phương pháp ELISA để đánh giá đáp ứng miễn dịch

(Phát hiện kháng thể) 54

3.5.5 Phương pháp ELISA để phát hiện kháng nguyên 58

3.5.6 Phương pháp xử lý số liệu 59

4 kết quả và thảo luận 60

4.1 Tình hình dịch bệnh LMLM trong năm 2006 60

4.2 Tình hình dịch bệnh tại xí nghiệp 62

4.3 Kết quả chẩn đoán phát hiện vi rút 66

4.4 Khảo sát đáp ứng miễn dịch của nái mẹ sau khi tiêm vắc xin 69

4.5 Miễn dịch thụ động ở lợn con sinh ra từ đàn nái mẹ đã tiêm phòng 72

4.6 Đáp ứng miễn dịch ở đàn lợn choai sau khi tiêm phòng 1 lần 75

4.7 Đáp ứng miễn dịch ở đàn lợn choai sau khi tiêm liều tăng cường 77

4.8 Đánh giá biện pháp phòng bệnh bằng vắc xin trong biện pháp

tổng thể 79

5 Kết luận và đề nghị 83

5.1 Kết luận 83

5.2 Đề nghị 83

tài liệu tham khảo 85

Phụ lục

Danh môc c¸c ch÷ viÕt t¾t

ARN : AxÝt ribo nucleotit

ELIZA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay

FAO : Food and Argricultural Organization

OIE : Office Internationale des Epizooties

PI : PhÇn tr¨m øc chÕ mÉu (Percentage Inhibition) RT- PCR : Reverse Transcriptase Polyme Chain Reaction

TCID : Tissue Culture Infectious Degree

Danh mục các bảng

Bảng 4.1 Tình hình dịch bệnh LMLM tại Việt Nam trong năm 2006 61

Bảng 4.2 Một số chỉ tiêu kỹ thuật của xí nghiệp trong 4 năm qua 63

Bảng 4.3 Tỷ lệ chết và loại thải đàn nái của xí nghiệp 64

Bảng 4.4 Một số bệnh thường gặp trên đàn nái tại xí nghiệp 65

Bảng 4.5 Kết quả chẩn đoán phát hiện kháng thể bằng phương pháp

Bảng 4.6 Kết quả xét nghiệm phát hiện kháng thể FMD ở đàn lợn nái

Bảng 4.7 Kết quả theo dõi đáp ứng miễn dịch của đàn lợn nái tại

Bảng 4.8 Kết quả xét nghiệm phát hiện kháng thể FMD ở đàn lợn con

Bảng 4.9 Kết quả theo dõi đáp ứng miễn dịch của đàn lợn con theo mẹ

Bảng 4.10 Kết quả xét nghiệm phát hiện kháng thể FMD ở đàn lợn

Bảng 4.11 Kết quả theo dõi đáp ứng miễn dịch của đàn lợn choai tại xí

nghiệp 76 Bảng 4 12 Kết quả xét nghiệm phát hiện kháng thể FMD ở đàn lợn

Bảng 4.13 Kết quả theo dõi đáp ứng miễn dịch của đàn lợn choai sau

Danh mục biểu đồ

ảnh 1: Phân bố vùng dịch LMLM trên thế giới năm 2005 15

ảnh 2: Bệnh tích do Vi rút LMLM gây ra ở môi và chân lợn 33

Hình 2.1: Biểu đồ biểu diễn số gia súc nhiễm bệnh LMLM qua các năm ở Việt Nam 18

Hình 4.1 Biểu đồ biểu diễn tình hình dịch bệnh LMLM trong năm 2006 61

Hình 4.2 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ một số bệnh thường gặp rên đàn lợn nái của xí nghiệp 66

Hình 4.3: Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ bảo hộ của đàn lợn nái

sau khi tiêm vắc xin LMLM 71

Hình 4.4: Biểu đồ biểu diễn diễn biến kháng thể thụ động của

đàn lợn con sinh ra từ đàn nái đã tiêm phòng vắc xin 74

Hình 4 5: Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ bảo hộ của đàn lợn choai sau khi tiêm phòng vắc xin 1 lần 76

Hình 4.6: Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ bảo hộ của đàn lợn choai sau khi tiêm phòng vắc xin liều tăng cường 79

1 Mở đầu

1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Bệnh Lở mồm Long móng (LMLM) là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm do vi rút gây ra cho ngành chăn nuôi trên thế giới Bệnh lây lan nhanh, mạnh, gây thiệt hại nặng đối với động vật thuộc loài móng guốc chẵn: trâu, bò,

dê, lợn, cừu, hươu, nai Bệnh thường xảy ra ở thể cấp tính, có thể lây lan trong phạm vi một nước hoặc nhiều nước, sự lây lan không chỉ do tiếp xúc mà còn qua nhiều đường, kể cả qua không khí Vì vậy, bệnh thường phát thành đại dịch gây thiệt hại cho ngành chăn nuôi Bệnh gây nên hậu quả nghiêm trọng về mặt kinh

tế, xã hội và bảo vệ môi trường Bệnh LMLM có tính chất bệnh dịch địa phương

ở nhiều nước, nhưng vi rút có phân bố trên thế giới rất khác nhau

Bệnh LMLM được Tổ chức Dịch tễ thế giới (OIE - Office Internationale des Epizooties) xếp đầu tiên trong danh mục bảng A gồm 15 bệnh truyền nhiễm nguy hiểm của gia súc, gia cầm Bệnh gây thiệt hại nghiêm trọng về kinh tế và ảnh hưởng đến thương mại, đặc biệt là việc buôn bán động vật và sản phẩm có nguồn gốc động vật Việc phòng chống bệnh LMLM ở nhiều nước trở nên một chính sách rất quan trọng, nhất là trong nền kinh tế thị trường Có hay không bệnh LMLM là một tiêu chí trong quan hệ buôn bán quốc tế và mọi quốc gia đều sử dụng nó như một vũ khí thương mại [14]

Vi rút gây bệnh LMLM thuộc họ Picornaviridae được chia thành 7 type

huyết thanh là A, O, C, Asia-1, SAT-1, SAT-2 và SAT-3 Trong một type có các dưới type (sub-type) và theo cách phân loại cũ có hơn 70 dưới type [28] Giữa 7 type nêu trên không có miễn dịch chéo, chúng gây bệnh với mức độ và diễn biến khác nhau nhưng về triệu chứng lâm sàng lại hoàn toàn giống nhau Chính vì vậy, chương trình phòng chống bệnh bằng vắc xin gặp nhiều khó khăn do có sự thay đổi cấu trúc kháng nguyên của vi rút, nhiều khi ổ dịch đã tiêm phòng vẫn mắc đi, mắc lại [29]

ở Việt Nam, bệnh LMLM xuất hiện từ năm 1898 [22], từ đó đến nay bệnh liên tục xảy ra khi rải rác khi bùng phát dữ dội Năm 1995 bệnh xảy ra liên tiếp trên địa bàn 107 huyện thuộc 26 tỉnh thành có 2.351 trâu bò, 11.000 lợn mắc bệnh Đợt dịch lớn gần đây nhất là năm 1999-2000, 60 tỉnh thành

phố có gia súc mắc bệnh Trong quý III năm 2006 cả nước có 31 tỉnh, thành

phố có dịch, tổng số gia súc mắc bệnh là 1.602 trâu, bò và 205 lợn

Tỉnh Bắc Ninh dịch xảy ra nhanh và mạnh nhất vào thời điểm tháng 6

đến tháng 10 năm 1999 trên 6 huyện với 1.416 trâu, bò; 556 lợn mắc bệnh Sau đó bệnh vẫn xảy ra lẻ tẻ, trong 6 tháng đầu năm 2006 dịch xuất hiện tại 2 huyện Từ Sơn và Gia Bình

Phòng chống bệnh LMLM ở bất kỳ nước nào cũng phải là chính sách quốc gia Mỗi quốc gia đều phải đưa ra chiến lược phòng chống bệnh của riêng nước mình Chiến lược phòng chống bệnh LMLM phụ thuộc vào các mục tiêu cần đạt được, có 3 chiến lược phòng chống bệnh đang được áp dụng là:

- Tiêu huỷ toàn bộ gia súc nhiễm bệnh (áp dụng ở các nước phát triển)

- Tiêm phòng vắc xin cho gia súc từ 5 đến 10 năm và không tiêu huỷ

- Vừa tiêm phòng vừa tiêu huỷ đàn gia súc mắc bệnh

Chủ trương áp dụng phòng chống dịch của nước ta hiện nay là tiêu huỷ

số lượng gia súc nhỏ nhiễm bệnh, đồng thời với việc tiêm phòng

Xí nghiệp giống gia súc Thuận Thành là cơ sở sản xuất lợn giống hướng nạc của tỉnh Bắc Ninh Trong tình trạng bệnh LMLM đang bùng phát và là trở ngại hàng đầu cho ngành chăn nuôi thì công tác phòng chống bệnh càng trở nên đặc biệt quan trọng không chỉ đối với phạm vi cả nước mà cả phạm vi tỉnh, thậm chí phạm vi một trại chăn nuôi Xuất phát từ thực tế này, chúng tôi

thực hiện đề tài “Đánh giá hiệu quả vắc xin Lở mồm Long móng trong công

tác phòng chống bệnh Lở mồm Long móng trên đàn lợn nái ông bà tại xí nghiệp giống gia súc Thuận Thành”

1.2 ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

Đánh giá đ−ợc hiệu quả của vắc xin phòng bệnh LMLM thông qua đáp ứng miễn dịch đặc hiệu, đáp ứng miễn dịch bảo hộ và độ dài miễn dịch Những số liệu thu đ−ợc có thể làm tài liệu tham khảo cho công tác giảng dạy

và hoạch định các chiến l−ợc thanh toán bệnh

Với kết quả nghiên cứu thu đ−ợc có thể kiểm chứng lại tính đúng đắn của qui trình sử dụng vắc xin đang đ−ợc áp dụng tại Việt Nam

1.3 mục tiêu của đề tài

- Xác định thời gian xuất hiện kháng thể và thời gian có bảo hộ sau khi tiêm phòng

- Xác định hàm l−ợng kháng thể và thời gian có bảo hộ của đàn con

đ−ợc sinh ra từ đàn nái mẹ đã tiêm phòng

- Đánh giá hiệu quả sử dụng vắc xin trong công tác phòng chống bệnh LMLM

2 Tổng quan tài liệu

2.1 Lịch sử bệnh lở mồm long móng

2.1.1 Định nghĩa

Bệnh Lở mồm Long móng (LMLM) là bệnh truyền nhiễm cấp tính lây lan rất nhanh Bệnh thường xảy ra dưới dạng dịch đại lưu hành đối với các loài móng guốc chẵn (trâu bò, lợn dê, cừu ) Bệnh do một loài vi rút hướng thượng bì gây ra Gia súc mắc bệnh có đặc điểm sốt, có mụn nước và vết loét

ở niêm mạc miệng, kẽ móng, gờ móng, trên bầu vú, đầu vú

2.1.2 Lịch sử bệnh lở mồm long móng

Bệnh LMLM được Frascastorius mô tả lần đầu tiên trên thế giới ở Italia vào năm 1514 Sau đó, năm 1897, Loeffler và Frosch đã xác định rằng bệnh là do vi rút gây ra Tuy nhiên, phải đến những năm đầu thế kỷ 19 người ta mới công nhận tính truyền nhiễm mạnh mẽ của nó và mãi đến năm 1920 bệnh LMLM mới được nghiên cứu một cách chi tiết (Andersen, 1980) [32]

Cuối thế kỷ 19, chỉ trong vòng vài tháng bệnh đã lây lan nhanh chóng khắp châu Âu từ Nga sang Đức, Hà Lan, Thuỵ Sỹ, Bỉ, Hungari, Đan Mạch, Pháp và Italia làm hàng chục triệu trâu bò mắc bệnh, kéo dài đến hàng chục năm không tắt (Nguyễn Vĩnh Phước, 1980) [16]

Trong những năm từ năm 1870 đến năm 1929, xuất hiện các ổ dịch LMLM ở Mỹ, do nhập khẩu trâu bò nhiễm bệnh từ các nước khác Bệnh xuất hiện ở nhiều bang như New England, Porland, Maine (1880), Boston, New England (1884)…Tại khu vực Bắc Mỹ, bệnh LMLM nổ ra ở Canada năm

1870, xuất hiện lần cuối vào năm 1952 Dịch phát ra tại Mexico năm

1946-1954

Từ đầu thế kỷ 20 trở đi, dịch phát ra ở nhiều nước trên thế giới:

Năm 1902-1914: dịch nổ ra ở Mỹ

Năm 1929: dịch phát ở ấn Độ

Năm 1946: dịch nổ ra ở Mehico

Năm 1948: dịch phát ra tại Myanma , Thái Lan, Indonesia

Năm 1951: ở châu á dịch phát ra ở Trung Quốc

ở châu Âu dịch phát ra từ Tây Đức, sau đó dịch lan sang Hà Lan, Bỉ, Luxemburg, Pháp, Anh, Italia, áo, Đan Mạch, Thuỵ Điển, Na Uy, Ba Lan và kéo dài đến năm 1953, 1954 [16]

Dịch cũng phát ra ở nhiều nước Nam Mỹ như Argentina

Từ năm 1981 đến 1985: dịch LMLM đã xảy ra ở 80 nước trên thế giới Năm 1989: dịch đã xảy ra trên 50 nước ở khắp các châu lục

Năm 1997: bùng nổ đại dịch huỷ diệt ngành chăn nuôi lợn của Đài Loan Năm 2001: tình hình dịch LMLM trên thế giới lây lan rộng và gây thiệt hại lớn cho các nước châu Âu và Nam Mỹ như Anh, Argentina và Braxin

Năm 2004, Liên Bang Nga và các nước khác thuộc khu vực Đông Nam

á là Mông Cổ và Trung Quốc báo cáo có dịch

Từ đầu năm 2005, đã xuất hiện type vi rút Asia-1 tại Trung Quốc, sau

đó là Myanma Trong năm 2005 và đầu năm 2006, các nước trước đây có các vùng được công bố là sạch bệnh như Brazil, Argentina và Bostwana thì nay lại báo cáo là có dịch xảy ra [30]

có Việt Nam), type A (ở 6 quốc gia), type Asia-1 (ở Thái Lan, Iran, Thổ Nhĩ Kỳ, Grudia), type SAT-2 (ở Arabsaudi, Kuwait), một số quốc gia khác chưa định type

(Armenia, Azerbaijan, UAE, India) [43] Những type khác nhau của LMLM phân bố khắp thế giới theo địa hình ở Nam Mỹ chỉ có type O, A, C, trong đó type O và A phổ biến hơn ở Bắc phi, những ổ dịch thường do type O ở Tây, Trung và Đông Phi tìm thấy có type SAT-1, SAT-2, O, A và C Những vùng Nam Phi có type SAT-1, SAT-2 và SAT-3 nhưng không có type O, A, C ở châu á type O trội hơn mặc dù cũng có type Asia-1 và A, type C ít thấy [1]

Trong những năm gần đây tình hình bệnh LMLM trên thế giới như sau:

Châu âu Từ khi ngừng việc dùng vắc xin ở các nước thuộc Liên hiệp châu Âu

(EU) vào năm 1991, đã có những ổ dịch LMLM xảy ra ở Italia vào năm 1993, ở Hylạp vào năm 1994 và 1996 Các ổ bệnh xuất hiện ở Bungari vào năm 1991, 1993 và 1996, ở Nga năm 1995 và ở Anbani, Cộng hoà Macedonia, Kosovo vào năm 1996 Có thể nói rằng châu Âu chưa bao giờ hoàn toàn không có bệnh LMLM Các ổ dịch nổ ra lặp đi lặp lại Phân tích chuỗi nucleotit cho thấy chủng vi rút LMLM thuộc type O Cũng vào năm 1993, 57 ổ dịch đã nổ ra ở Italia Tháng 5 năm 1996, ở Hylạp được thông báo có

39 ổ dịch có cùng vi rút thuộc type O gây ra Cũng vào năm 1996, vi rút LMLM type A

đã xuất hiện ở phía đông nam Anbani (Kitching R.P., 1998) [47]

ảnh 1: Phân bố vùng dịch LMLM trên thế giới năm 2005

Phân bố vùng dịch LMLM trên thế giới

Nam Mỹ Chilê, Guyana, Surinam không có bệnh LMLM trong thập

kỷ này Khoảng 8 năm trở lại đây đã có những tiến bộ đáng kể về hiệu quả của các chương trình khống chế bệnh LMLM ở Achentina, Paraguay, Uruguay và các bang phía nam của Braxin Bolivia, Peru, Colombia, Equado và phần còn lại của Braxin mặc dù kém thành công hơn Achentina, Paraguay song cũng rất

cố gắng khống chế bệnh LMLM nên kết quả đã giảm số lượng ổ dịch được công bố (Kitching, 1998) [47]

Châu Phi Năm 1989, vi rút LMLM type O đã thâm nhập vào Tuynidi

(trước đây không có bệnh) Trước khi các biện pháp phòng chống được triển khai, bệnh đã lan toả qua Angiêri và sau đó là Marốc Vi rút LMLM type O cũng đang lưu hành ở Ai Cập và Libi (Kitching, 1998) [47]

2.2.2 Tình hình dịch Lở mồm Long móng ở Đông Nam á

Châu á là một lục địa có 22 quốc gia chính thức công bố có bệnh LMLM (Lombard và Schermbucker, 2000) [17] Các ổ dịch lớn đã được thông báo tại Đài Loan (1997) và Trung Quốc (1999) Năm 2000, dịch lây lan đến các nước Đông Bắc á (Nhật Bản và Hàn Quốc) Năm 2004, Liên Bang Nga và các nước khác thuộc khu vực Đông á là Mông Cổ và Trung Quốc báo cáo có dịch Từ đầu năm 2005, đã xuất hiện type vi rút Asia-1 tại Trung Quốc, sau đó là Myanmar, đã làm cho diễn biến dịch LMLM trong khu vực đã phức tạp lại càng phức tạp hơn Trong các năm

2005 và đầu năm 2006, các nước trước đây có các vùng được công nhận

là sạch bệnh LMLM có hoặc không áp dụng biện pháp tiêm phòng như Brazil, Argentina và Bostwana thì nay lại báo cáo là có dịch xảy ra Tình hình dịch LMLM tại khu vực Đông Nam á diễn ra theo chiều hướng gia tăng và phức tạp hơn Các nước có dịch là Thái Lan, Myanmar, Lào, Cămpuchia, Malaysia, Philippines và Việt Nam (Tô Long Thành và cs, 2006)[30]

Nghiên cứu về dịch tễ học của bệnh LMLM cho thấy vi rút đã có nhiều thay đổi bằng cách sử dụng các kỹ thuật phân tử để xác định các chủng vi rút (Kitching, 1992)

Vi rút LMLM type O ở các nước trong khu vực: Những năm gần đây

có một số subtype thuộc type O lưu hành trong khu vực Đông Nam châu á: chủng SEA (South East Asia) được phát hiện ở Việt Nam năm 1997, Căm Pu Chia năm 1998 và Đài Loan năm 1999 Chủng ME-SA có mặt tại Irắc và Thổ Nhĩ Kỳ Chủng vi rút Cathay phát hiện ở Hồng Kông 1982, ở Philippine năm

1996 và ở Đài Loan năm 1997 Năm 1997, chủng Cathay xuất hiện ở Việt Nam Từ năm 1998, chủng Pan-Asia bắt đầu xuất hiện và lây lan trong vùng

Đông Nam Châu á Năm 1999, vi rút xuất ở Việt Nam do lây lan từ Trung Quốc qua buôn bán động vật qua biên giới Việt Trung Vi rút cũng xuất hiện ở Thái Lan do trâu nhập từ Lào nhưng về nguồn gốc lại nghi ngờ từ Vân Nam, Trung Quốc Năm 2000, chủng vi rút này cũng xuất hiện tại Nhật và nguồn gốc ổ dịch bị nghi ngờ là do nhập khẩu từ Trung Quốc (Tô Long Thành và cs, 2006) [30]

Vi rút LMLM type A ở các nước trong khu vực: Theo các tài liệu tham

khảo, vi rút LMLM lưu hành tại ấn Độ và Trung Đông Vi rút tạo thành dịch địa phương ở Thái Lan và được lây từ Malaysia thông qua việc nhập khẩu trâu bò

Đặc điểm dịch tễ nổi bật là từ tháng 7/2003 đến nay, số ổ dịch do vi rút LMLM type A gây ra chiếm đa số; Lào cũng báo cáo phát hiện được vi rút type A [30]

Vi rút LMLM type Asia-1 ở các nước trong khu vực: Vi rút LMLM

type Asia-1 được thông báo ở châu á, Nam á, Đông á và Trung á Người ta cho rằng vi rút Asia-1 lưu hành trên thế giới có nguồn gốc từ các nước ASEAN Vi rút Asia-1 gây nên dịch địa phương ở Thái Lan, Myanmar Tuy nhiên, đặc điểm dịch tễ của các ổ dịch do vi rút Asia-1 chưa được nghiên cứu chi tiết (Tô Long Thành và cs, 2006) [30]

2.2.3 Tình hình dịch Lở mồm Long móng ở Việt Nam

ở Việt Nam, dịch LMLM đã được phát hiện từ năm 1898 tại Nha Trang

Từ đó đến nay, bệnh phát ra nhiều vùng trong cả nước Có thời kỳ bệnh phát ra

lẻ tẻ nhưng cũng có những năm bệnh lây rộng trong một tỉnh hoặc nhiều tỉnh

gây thiệt hại đáng kể về kinh tế (Phan Đình Đỗ và Trịnh Văn Thịnh, 1958) [22]

Hình 2.1: Biểu đồ biểu diễn số gia súc nhiễm bệnh LMLM

qua các năm ở Việt nam

ở miền Bắc, trong 2 năm 1921 – 1922, đã xảy ra 690 ổ dịch làm 13.018 con trâu bò và lợn bị bệnh trong đó có 446 con chết Năm 1937 – 1940, một ổ dịch lan tràn khắp tỉnh Quảng Ngãi, ở phía Bắc bệnh rải rác ở Sơn Tây và Thanh Hoá

Năm 1952 bệnh xuất hiện ở Thừa Thiên Huế, đến năm 1953 bệnh lan vào nam Trung Bộ và tiếp theo lan ra khu IV, khu Tả Ngạn, Việt Bắc, Tây Bắc

và đến năm 1954, bệnh lây lan khắp miền Bắc với 179 ổ dịch Tháng 4-1955, bệnh lại bùng phát trở lại ở liên khu III rồi lan sang khu Tả Ngạn, Việt Bắc, liên khu IV, Hà Nội, Nam Định, Hải Phòng cho đến cuối năm 1955 về căn bản dịch mới được dập tắt (Phan Đình Đỗ, Trịnh Văn Thịnh, 1958) [22]

Năm 1960, dịch phát ra 9 xã thuộc huyện Quỳnh Lưu (Nghệ An) Nhờ các biện pháp phòng, chống dịch triệt để, bệnh hầu như đã bị tiêu diệt ở các tỉnh phía Bắc

Năm 1969 – 1970, ở miền Nam dịch bệnh lại xảy ra nghiêm trọng trên

đàn trâu khu vực Sài Gòn – Chợ Lớn và từ đó lây lan ra các tỉnh lân cận và tấn công vào 5 trại lợn công nghiệp ở Nam Bộ (Hồ Đình Chúc và cs, 1978) [9]

Năm 1978, dịch xảy ra liên tiếp ở 17 tỉnh phía Nam từ Quảng Nam - Đà Nẵng trở vào tới các tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long

Từ năm 1976 đến năm 1983 theo các số liệu thống kê của Cục Thú y,

đã có 98 ổ dịch xảy ra ở các tỉnh phía Nam làm 26.648 con trâu, bò; 2.919 con lợn mắc bệnh

Riêng năm 1983 các ổ dịch trâu, bò đã lan sang một số trại lợn thuộc huyện Thống Nhất tỉnh Đồng Nai làm 2.200 con lợn bị bệnh

Dịch LMLM thường xuyên xảy ra rải rác ở một số tỉnh biên giới Tây Nam do lây từ Campuchia sang Cuối những năm 1980, một số tỉnh như An Giang, Tây Ninh, Đồng Tháp thường xuyên bị dịch LMLM Năm 1989, ba

huyện Long Đất, Long Thành, Xuyên Mộc của Đồng Nai bị dịch kéo dài từ

tháng 5 đến giữa tháng 10 làm 3.514 con trâu, bò và lợn bị bệnh Năm 1990, dịch cũng xuất hiện tại một số huyện thuộc tỉnh Thuận Hải (cũ) làm hơn 7.500 trâu bò bị mắc bệnh, đồng thời tại huyện Lộc Ninh tỉnh Sông Bé dịch cũng xảy ra làm 100 con trâu, bò ốm không cày kéo được Tháng 4 năm 1995, dịch LMLM đã xảy ra với tốc độ nhanh và lây ra hầu hết các tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long, một số tỉnh Duyên Hải miền Trung Năm 1996 – 1997, dịch xảy ra nặng ở một số tỉnh Duyên Hải miền Trung và Tây Nguyên; năm 1998 dịch xảy ra ở Bình Thuận Đầu năm 1999, Tp Hồ Chí Minh, Kiên Giang, Tiền Giang, Đồng Nai dịch LMLM cũng đã nổ ra Tính từ 6 tháng cuối năm 1999

đến năm 2000 có 60 tỉnh, 439 huyện, 3.773 xã có gia súc mắc LMLM; 472.273 trâu, bò; 74.800 lợn mắc bệnh

Năm 2001, nhờ Chính phủ chỉ đạo quyết liệt bằng các biện pháp hành chính và cấp 15 tỷ đồng cho các địa phương mua vắc xin tiêm phòng, trong năm 2001 dịch có phần được khống chế: 11 tỉnh, 23 huyện, 35 xã có dịch LMLM, tập trung chủ yếu vào các tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long làm 2.072 con trâu, bò và 3.311 lợn bị mắc bệnh

Năm 2002, dịch xảy ra trên 26 tỉnh thành làm 10.287 trâu, bò mắc bệnh Năm 2003, dịch bùng nổ trên 38 tỉnh với 25.014 trâu, bò và lợn mắc bệnh Năm 2004, số tỉnh có dịch LMLM là 24 tỉnh

Về các type vi rút đ∙ được phát hiện tại Việt Nam : Đặc điểm của các

chủng vi rút gây bệnh LMLM thay đổi theo từng giai đoạn: giai đoạn từ năm

1985 trở về trước, Cục Thú y không có khả năng chẩn đoán xác định type vi rút gây bệnh LMLM nên không có số liệu lưu trữ, việc chẩn đoán trong thời

kỳ này hoàn toàn dựa trên triệu chứng lâm sàng Từ năm 1985, với sự trợ giúp của các tổ chức quốc tế, Cục Thú y bắt đầu xác định được type vi rút gây bệnh LMLM Năm 1992, sau 32 năm vắng mặt, bệnh LMLM đã tái xuất hiện ở miền Bắc và miền Trung nước ta (ổ dịch LMLM cuối cùng là năm 1960) Nguyên nhân là do việc vận chuyển bất hợp pháp động vật, sản phẩm của

động vật bị bệnh từ nước ngoài vào sau khi mở cửa biên giới buôn bán với

Trung Quốc và Lào Các kết quả ghi nhận cho đến năm 1999 cho thấy có 3 type vi rút gây bệnh LMLM ở Việt Nam là type O, A và Asia-1 Trong đợt dịch lớn năm 1999-2000, kết quả chẩn đoán các ổ dịch đều là vi rút type O có quan hệ cấu trúc gen rất gần với vi rút type O gây bệnh ở Hồng Kông năm

1997 Việc biến mất type A và Asia-1 trong giai đoạn này chưa được khẳng

định một cách đầy đủ để xác định rằng hai chủng này không tồn tại ở Việt Nam trong giai đoạn đó Năm 2004: Trong số 24 tỉnh có dịch LMLM có 9 tỉnh do

vi rút LMLM type A (phát hiện lần đầu tiên tại Ninh Thuận và Bình Định vào tháng 9/2004), 12 tỉnh do vi rút LMLM type O và 3 tỉnh do cả hai vi rút LMLM type O và A Năm 2005, type A lại xuất hiện ở Ninh Thuận và sau đó phát hiện

được một số tỉnh khác ở phía Nam như Bình Định, Bình Thuận, Long An… Cùng năm này, vi rút Asia-1 xuất hiện lần đầu tiên ở Khánh Hòa và sau đó là Lao Cai Tháng 5 năm 2006, vi rút Asia-1 được phát hiện ở Hà Giang, Lao Cai, Khánh Hoà Từ đầu năm 2006 tới nay, trong số 27 tỉnh có dịch LMLM thì có

26 tỉnh là do vi rút type O và vi rút type A (Tô Long Thành và cs, 2006) [30]

Hiện tại, chưa có chứng cứ khoa học xác định mối liên quan giữa các vi rút type Asia-1 lưu hành ở hai miền nhưng có thể dự đoán nguồn gốc ổ dịch là do đưa

từ nước ngoài vào theo gia súc mắc bệnh hoặc sản phẩm của gia súc mắc bệnh

2.3 Vi rút lở mồm long móng

2.3.1 Hình thái, cấu trúc

Vi rút LMLM thuộc họ Picornaviridae giống Apthovirus (Nguyễn Tiến

Dũng, 2000), [14] Theo nghĩa đen Pico: nhỏ, rna có nghĩa là axit ribonucleic, viridae là họ vi rút) Họ này bao gồm một vài loài vi rút rất quan trọng trong y

học, đó là các loài gây bệnh bại liệt trẻ em (Poliomyelitis), bệnh viêm gan truyền nhiễm (Hepatitis A) [53]

Vi rút gồm có một nhân ARN chuỗi đơn nằm trong vỏ protein gồm 60

đơn vị gọi là capsome tạo nên một khối 30 mặt đối xứng với Chúng có kích thước rất nhỏ, đường kính vi rút khoảng 23nm (Bachrach, 1968) [33] Vi rút qua được các màng lọc Seitz, Chamberland và Berkefeld Chuỗi protein tách

ra làm 12 loại protein nhỏ chúng được gọi tên là L, VP4, VP3, VP2, VP1, 2A, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C và 3D [53]

Cấu trúc hệ gen của vi rút LMLM đ−ợc xác định bởi phòng thí nghiệm tham chiếu Pirbright nh− sau:

3 protein L pro, 2A, và 3C làm trung gian trong hầu hết các sự kiện phân giải protein tạo ra các sản phẩm thành thục

Vỏ capxit của vi rút có hơn 60 đơn vị (capxôme) Mỗi đơn vị này có chứa 4 loại protein là VP1, VP2, VP3 và VP4 có trọng l−ợng phân tử lần l−ợt

là 34, 30, 26 và 8 x 103 Kdal Các protein VP1, VP2 và VP3 tạo nên bề mặt của khối 20 mặt đối xứng, còn VP4 là protein ở bên trong capxit, kết dính ARN vi rút với mặt trong của capxít VP1 ở ngoài cùng tham gia vào việc cố

định vi rút trên những tế bào, đóng vai trò quan trọng nhất trong việc gây bệnh đồng thời nó là kháng nguyên chính tạo nên kháng thể chống lại bệnh LMLM

Một hạt vi rút cũng có thể chứa 1 tới 2 chuỗi 5-polypeptit (VP0), đây chính là tiền thân của VP1 và VP4 Tính gây miễn dịch thực sự của vi rút LMLM là do một polypeptit mẫn cảm với trypsin, chịu trách nhiệm đó chính

là VP1 (Burroughs và cs, 1971) [35]

Vùng cấu trúc Vùng không cấu trúc

Hạt vi rút hoàn chỉnh (virion) có hằng số lắng 140S, phần vỏ capxít không có ARN có hằng số lắng 75S, mảnh protein của capxít là 12S và kháng nguyên VIA (Virus Infection Associated) là 5S (Bachrach, 1968) [33]

Cấu trúc kháng nguyên và sự liên kết với recepter:

Vi rút LMLM có cấu trúc kháng nguyên không đồng nhất, có nhiều type và subtype mà mỗi type có thể có các biến chủng của nó Sự khác nhau

về hệ gen là nguyên nhân gây ra các biến chủng đặc biệt thông qua sự đa dạng của phân tử VP1

Những nghiên cứu ban đầu về cấu trúc kháng nguyên của vi rút LMLM chỉ với mục đích để tìm hiểu hiệu quả của vắc xin và phát triển vắc

xin mới Những nghiên cứu này chỉ ra rằng các kháng thể trung hoà kháng

lại kháng nguyên VP1 tinh chế có thể để bảo vệ động vật tránh khỏi vi rút công cường độc Mảnh VP1 bao gồm 1 mạch dễ biến đổi giữa thành phần βG

và βH của VP1 (mạch G-H), là phần lồi ra trên bề mặt vi rút Điều đó cũng

có nghĩa là mạch G-H VP1 bao hàm phần lớn vị trí kháng nguyên quan

Mạch tripeptide Arg - Gly - Asp trong mạch G-H của VP1 chịu trách nhiệm của fibronectin kết nối, như 1 tế bào tiếp nhận Jackson (1996) phát hiện ra rằng glycosaminoglycan và heparan sulfate (HS) có thể đáp ứng như Corecepter cho subtype của vi rút LMLM týp O Điều đáng quan tâm là vi rút týp O có thể sử dụng những recepter tăng thêm mà không chia sẻ điều đó với

vi rút typ A [53]

2.3.2 Phân loại và biến chủng của vi rút

Vi rút LMLM biến dị rất mạnh, ở châu Âu, tại một số ổ dịch vào thời

kỳ cuối người ta thấy xuất hiện các type vi rút mới hoặc các biến chủng mới

và chúng có nguồn gốc ngay trong ổ dịch chứ không phải đưa từ ổ dịch khác vào Các biến chủng như vậy xuất hiện có lẽ là do kết quả của việc dùng vắc xin nhưng không gây được miễn dịch đầy đủ cho con vật đã thúc đẩy quá trình

đột biến ở các chủng thực địa (Tô LongThành, 2000) [29]

Vi rút LMLM có 2 đặc tính đặc biệt liên quan đến dịch tễ học, đó là tính có đa type và tính dễ biến đổi kháng nguyên, các type tuy gây ra những triệu chứng bệnh tích giống nhau, nhưng lại không gây miễn dịch chéo (Phan

Đình Đỗ, Trịnh Văn Thịnh, 1958) [22] Điều đầu tiên người ta nhận thấy là nhiều con bị bệnh đã lành vẫn có thể lại bị mắc bệnh nhiều lần Lý do của

hiện tượng này được Vallée và Carre khám phá và nghiên cứu (1921, 1922,

1924) đó không phải khác nhau về độc lực mà do khác nhau về cấu trúc kháng nguyên Đầu tiên hai tác giả trên đã gặp 2 chủng mà họ đặt tên là chủng A (Allemand là từ của Pháp có nghĩa là Đức) và chủng O (để chỉ Oise Valley, là nơi phân lập được virút) Với sự phân lập của nhiều chủng khác Vallée và

Carré chia thành 2 nhóm vi rút nhóm O và nhóm A Đến năm 1926, hai nhà

khoa học Đức là Waldman và Trautwein lại tìm thêm 1 nhóm nữa đặt tên là nhóm C Từ năm 1952, các nhà khoa học trên thế giới đã thống nhất chấp nhận các nhóm O, A, C (thay cho 1 thời kỳ gọi là các nhóm A, B, C) Vi rút

LMLM đã được xếp cùng nhóm với vi rút bệnh cúm, bệnh bại liệt, bệnh viêm não ngựa châu Mỹ và bệnh viêm miệng mụn nước Cho đến năm 1965, ngoài

3 type đó, còn phát hiện được 3 type virút LMLM khác ở miền Nam châu Phi

và được đặt tên là SAT-1, SAT-2 và SAT-3 (SAT, South Africa Territory)

Tiếp theo, các phòng thí nghiệm virút LMLM của Anh thông báo đã phân lập

được type vi rút thứ 7 ở tại nhiều nước của châu á và đặt tên là type Asia-1 Cho đến nay người ta chưa phát hiện thêm type nào khác, nhưng các chủng vi rút LMLM do có cấu tạo ARN nên liên tục biến đổi tạo ra các subtype mới (Tô Long Thành, 2000) [28]

Các type chính nói trên phổ biến trong vùng nhất định, theo tài liệu định loại năm 1962 (FAO) ở châu Âu chỉ có các type O, A, C Type C có nhiều ở lợn, type O có nhiều ở trâu bò, type A tương đối phổ biến ở các loài, các type SAT chỉ có ở châu Phi (Nam, Trung, Đông Phi, Xu Đăng và Ai Cập) Phổ biến nhất là SAT-1 mới đây cũng thấy SAT-1 ở Trung Cận Đông (Irắc, Israel, Xy ri,…) Type Asia-1 gặp ở cận đông ấn Độ, Pakistan, Thái Lan, Trung Quốc, Lào, Hồng Kông Type O thấy phổ biến ở Đông á và Nam á (OIE SEA FMD RCU, 2000) [55] Ngoài 7 type cơ bản trên, người ta thừa nhận có hơn 70 subtype của vi rút LMLM

Các type và subtype của vi rút LMLM rất khác nhau về dịch tễ học và

đáp ứng miễn dịch Những ổ dịch âm ỉ vẫn tiếp tục xảy ra có thể là do tiêm phòng không đều đặn

Theo tài liệu của FAO vi rút mới đây được khám phá ở Anh được gọi là kiểu huyết thanh O của dòng Liên á Nó được xác định đầu tiên ở Bắc ấn độ vào năm 1990, lan truyền về hướng tây vào ả Rập năm 1994 và rồi lan khắp cận Đông, lan sang châu Âu Năm 1993 nó xuất hiện ở Nepal và về sau ở Băngladesh và Bhutan Cuối năm 1999 và 2000 nó đã ảnh hưởng đến phần lớn

Đông Nam á Khả năng lan truyền bệnh dịch qua những khoảng cách lớn đã

được minh chứng khi mà tháng 9 năm 2001 nhóm Liên á đã đến tận Nam phi

Đó là lần đầu dòng vi rút này được phát hiện ra trên lục địa châu Phi

ở Việt Nam trước đây xảy ra dịch ở cả 2 miền Nam và Bắc, việc xác

định type của vi rút không được thực hiện nên không thể xác định được sự biến đổi về type hay subtype trong các ổ dịch (Phạm Gia Ninh và cộng sự 1993) [23] Hiện nay ở Việt Nam, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương và Trung tâm Thú y Vùng Thành phố Hồ Chí Minh có thể xác định được type vi rút bằng phản ứng ELISA Các ổ dịch xảy ra trong những năm gần đây được xác định là do type O, phòng thí nghiệm đã xác định được subtype O Manisa,

O Philipin và O 3039 Điều này được xác nhận bởi phòng thí nghiệm tham chiếu ở Pirbright

2.3.3 Đặc tính nuôi cấy

Ngay sau khi phát hiện vi rút LMLM đầu tiên, Loeffer và Frosch, 1897

đã nghiên cứu nuôi cấy vi rút này tìm hiểu đặc tính của nó và tạo ra những chủng vi rút có tính kháng nguyên cao

Nhiều tác giả đã nuôi cấy vi rút LMLM trên da của thai lợn, thai bò còn sống (giữ thai sống bằng phương pháp nhân tạo) hoặc tiêm vi rút LMLM vào xoang phúc mạc chuột nhắt con thì thấy kháng nguyên của vi rút không thay

đổi, khả năng gây bệnh và cho miễn dịch đối với bò khi đã tiếp đời qua chuột nhắt con thường dùng để chế vắc xin nhược độc

Tổ chức thích hợp nhất với vi rút LMLM là thượng bì lưỡi bò trưởng thành, lưỡi phải lấy ngay sau khi mổ bò và giữ ngay trong lạnh 2 – 3oC và chỉ dùng trong phạm vi 8 ngày Sau đó lột mảnh thượng bì lưỡi có mụn nước đem pha chế Phương pháp này cho kết quả tốt là độc lực vi rút sau mấy chục lần tiếp đời vẫn cao đối với bò, chuột lang

Môi trường tế bào tốt nhất là lấy từ tuyến yên của bò, tuyến yên của lợn, thận bê, thận cừu non hoặc các dòng tế bào có độ mẫn cảm

Theo Geoffrey W (1989) [43], phòng thí nghiệm Pirbright trong năm

1973 đã nuôi cấy 140 vi rút LMLM, gần 120 chủng này đã sinh trưởng phù hợp trong môi trường BHK-21 (Baby Hamster Kidney-21) hiện nay môi trường BHK

- 21 được áp dụng thường xuyên nhất trong việc nuôi cấy phân lập vi rút LMLM

2.3.4 Sức đề kháng

Theo nhiều tác giả, sức đề kháng của vi rút đối với ngoại cảnh tương đối mạnh (Phan Đình Đỗ và Trịnh Văn Thịnh, 1958) [22]; (Nguyễn Vĩnh Phước, 1980) [16]; (Merchant và Barner, 1981) [52]; (Swan, 1994) [60]

Dựa trên cấu trúc của virion LMLM (kích thước nhỏ, không có vỏ bọc) sức đề kháng của vi rút rất cao, tạo điều kiện cho sự lan truyền âm ỉ, xa và gián tiếp, cần đòi hỏi việc tiêu độc nghiêm khắc

Các yếu tố vật lý tự nhiên thường tỏ ra không có khả năng tiêu diệt

được vi rút LMLM (lạnh, làm khô, nhiệt, cách ly)

Các yếu tố hoá học làm vô hoạt vi rút được chọn là NaOH (80%, pH = 12) được sử dụng ở các cơ sở công nghiệp, viện nghiên cứu, lò mổ Các đồ dùng dễ vỡ được khử độc bằng vôi và axít lactic 10%

Các yếu tố sinh học phá huỷ tự nhiên hoặc dùng vô hoạt bằng nhiệt (phương pháp nhiệt sinh học ở giữa đống phân ủ) hoặc dùng phương pháp axít hoá (làm chín thịt bằng axít lactic) Độ tin cậy vào các phương pháp trên cũng

có mức hạn chế

Sự sống sót của vi rút LMLM trong điều kiện tự nhiên phụ thuộc vào các tia tử ngoại và độ ẩm Như vậy khí tượng tạo điều kiện tồn tại của vi rút LMLM trong môi trường bên ngoài

ánh sáng tác động yếu: trên bề mặt đồng cỏ vi rút sống ít nhất 2 tháng về mùa đông hoặc 3 ngày về mùa hè, trên lông bò vi rút có hoạt lực sau 4 tuần lễ

Trong đất ẩm, vi rút có thể duy trì độc lực tới 42 ngày về mùa hè hoặc

tới 146 – 163 ngày về mùa đông, và 39 – 75 ngày về mùa xuân

Sức đề kháng của vi rút phụ thuộc rất lớn vào chất chứa, vi rút có sức đề kháng tương đối mạnh khi nó dính vào những chất khô hay protein [23]

Các chất kiềm tiêu diệt vi rút nhanh chóng: NaOH 0,5 – 1%; NH4OH trong nước tiểu có tác dụng tiêu độc trong vài giờ Chất toan cũng có tác dụng song không đều Sự toan hoá tự nhiên xảy ra trong thịt, sữa có thể tiêu diệt

được mầm bệnh nhanh chóng Thịt để 48 giờ ở nhiệt độ thường sẽ không còn mầm bệnh nữa Vôi, nước vôi 5%, formol 1%, axít phênic 3% phải sau 6 giờ mới tiêu diệt được vi rút Các chất anitol, quinosol, chloroform có tác dụng mạnh Vi rút đề kháng với các chất tẩy trắng Nếu vi rút lẫn với các chất hữu cơ khác thì tác dụng của thuốc sát trùng kém đi Trong thực tế người ta thường dùng NaOH 0,5% để sát trùng cho cơ thể gia súc và cho người, còn dung dịch 1% dùng để sát trùng dụng cụ, khi dùng nên cho thêm nước vôi 5%

Vi rút có thể tồn tại được trong vòng 5 – 10 tuần ở những nơi thời tiết mát, đặc biệt là ở những mô bào hoặc ở tổ chức ngoài cơ thể với điều kiện

độ pH không thấp hơn 6,5 Những nơi khô ráo, lạnh và tập trung ở nồng độ muối cao không gây ảnh hưởng cho vi rút và nó có thể sống lâu hơn ở những nơi đóng băng Tại chuồng trâu bò vi rút có thể duy trì khoảng 14 ngày, ở trong phế thải của động vật được 39 ngày, ở trên bề mặt của phân ở mùa hè được 28 ngày và ở mùa đông được 67 ngày, vi rút có thể sống lâu hơn trong thức ăn được 15 tuần, ở lông trâu bò được 4 tuần, ở trong nước thải được trên 130 ngày, vi rút nhạy cảm có thể bị tiêu diệt bởi axit xitric và axit axêtic Do sự tồn tại dai dẳng của vi rút, các chất tẩy uế thông thường không có hiệu quả

2.3.5 Độc lực, tính gây bệnh

Độc lực của vi rút có thể định nghĩa là khả năng gây bệnh lâm sàng của

vi rút Nói cách khác độc lực là mức độ gây bệnh của vi rút Mọi chủng vi rút LMLM đều được coi là cường độc (Nguyễn Tiến Dũng, 2000) [14], vật chủ

nhiễm vi rút có thể biểu hiện dưới nhiều mức độ khác nhau từ dạng rất nghiêm trọng đến dạng lâm sàng thể ẩn Ngay trong một ổ dịch ta cũng có thể thấy nhiều dạng bệnh khác nhau

Tính kháng nguyên và độc lực của vi rút LMLM là hai phạm trù hoàn toàn độc lập nhau Đối với một vi rút khác khi bị nhược độc thì tính kháng nguyên có khả năng giảm đi, hoặc khả năng gây bệnh cho một loài độngvật này có thể gắn liền với một tính kháng nguyên riêng biệt Vi rút LMLM không có các đặc điểm trên

Trong tự nhiên, vi rút LMLM gây bệnh chủ yếu trên trâu, bò, dê, cừu, lợn và các động vật hoang dã như bò rừng, trâu rừng, lợn rừng, lạc đà, ở loài

ăn thịt ít mắc hơn và thường mắc ở thể nhẹ Loài động vật một móng như ngựa, lừa, gia cầm, chim không mắc bệnh nhưng cũng có thể gây bệnh thí nghiệm cho vịt

Trong phòng thí nghiệm chuột lang, chuột nhắt trắng dễ cảm nhiễm bệnh Khía da bàn chân chuột rồi xát bệnh phẩm có chứa vi rút lên sau 12 – 24 giờ chỗ chà xát có nổi mụn nhỏ màu đỏ, thuỷ thũng, đau, sau 2 – 3 ngày có thể nhiễm trùng toàn thân và có nhiều mụn ở niêm mạc mồm, lưỡi, lợi

Bê sơ sinh chưa bú sữa mẹ có thể chết sau 36 – 48 giờ nếu tiêm vi rút LMLM

2.3.6 Nguồn dịch và cách lây lan

ở động vật mắc bệnh, dịch và vẩy mụn nước chứa rất nhiều vi rút Vi rút có nhiều nhất trong dịch mụn tiên phát, mụn mới mọc (khoảng 2 ngày) và

có độc lực rất mạnh Trước khi có triệu chứng, các chất bài tiết đã truyền được bệnh nhất là khi cơn sốt cao nhất với vai trò chính là nước bọt Trước khi có triệu chứng, trong nước bọt của bò có tới 102 – 103 ID50/ml cho chuột nhắt con còn khi triệu chứng xuất hiện thì tăng lên tới 104,5 – 106ID50/ml Khả năng nhiễm và tồn tại trong nước bọt lên tới 11 ngày Hàm lượng vi rút cao nhất là

trong nước mụn và thành mụn ở lợn, vi rút khu trú rất nhiều ở vùng hầu họng chính vì vậy mà khả năng thải vi rút qua đường hô hấp ở lợn là rất lớn (lớn hơn từ 1000 đến 3000 lần so với bò) Từ những chất chứa trên mà vi rút có thể truyền trực tiếp từ con vật bị bệnh sang con khoẻ khi nhốt chung hoặc chăn thả chung trên đồng cỏ hay ở các nơi tập trung gia súc như chợ, triển lãm

Vi rút LMLM được thải ra ngoài qua nước bọt lẫn nước mụn và các mảnh thượng bì của mụn bị vỡ ra trên niêm mạc lưỡi và miệng Các mụn khác

ở chân, vú cũng như trong sữa, phân, nước tiểu chứa ít vi rút hơn Vi rút có thể

tồn tại trong một thời gian dài đáng kể và bệnh có thể lây lan sang các vật môi

giới trung gian truyền bệnh là các sản phẩm động vật như da, lông, sừng, móng, sữa và từ các sản phẩm này mà nguồn bệnh bị phát tán đi xa

Tường, máng ăn, chất độn chuồng, các dụng cụ chăn nuôi đều có thể là nguồn vi rút Do vậy, một nguyên nhân chính dẫn tới tái phát dịch là do tiêu

độc không kỹ các ổ dịch cũ nên vi rút tồn tại trong chuồng và gây bệnh cho gia súc mới nhập

Một yếu tố tự nhiên cũng có thể làm lây lan dịch bệnh đó là gió Gió có thể mang mầm bệnh đi xa hàng trăm cây số

Tại Việt Nam, nguồn dịch được xác định từ một số nguồn chủ yếu sau:

- Nguồn dịch từ nước ngoài xâm nhập (3,6%): do nước ta có đường biên giới chung với Trung Quốc, Lào, Campuchia mà các nước này thường xuyên

có dịch LMLM Việc buôn bán, trao đổi động vật, sản phẩm động vật của nhân dân vùng biên theo con đường tiểu ngạch rất khó kiểm soát dẫn đến làm lây lan dịch bệnh

- Nguồn dịch do vận chuyển trái phép động vật và sản phẩm động vật từ vùng có dịch đến các vùng khác (75,7%)

- Nguồn dịch thiên nhiên: trong những năm gần đây, những ổ dịch LMLM vẫn còn lưu cữu ở tỉnh Quảng Ninh, một số tỉnh Duyên Hải miền

Trung, Tây Nguyên và Nam Bộ, những ổ dịch này vẫn chưa được tiêu diệt hoàn toàn nên bệnh LMLM vẫn có thể xảy ra bất cứ lúc nào Theo số liệu của Cục Thú y, nguồn dịch này chiếm 19,9%

2.3.7 Triệu chứng

2.3.7.1 Dạng điển hình

* Loài nhai lại:

- Sốt cao 40 – 41oC trong thời gian ngắn ở thời kỳ ủ bệnh (3 – 6 ngày)

- Miệng: Mụn nước và các vết trợt có thể mọc ở môi, vòm khẩu cái, lợi, lưỡi, hầu, họng trâu, bò chảy nhiều nước rãi dính quánh Con vật đau, nhai chóp chép và không ăn được

- Chân: mụn nước ở chân xuất hiện đặc biệt là ở vùng viền móng, kẽ móng Khi mụn nước vỡ con vật đi lại khập khiễng, hay nằm và thường không muốn đặt chân xuống đất Vết loét do mụn nước vỡ ra có thể bị nhiễm trùng

kế phát và dẫn đến loãng móng

- Mụn có thể xuất hiện ở vú con cái, các vùng da không có lông như âm

hộ, bìu,

* Lợn: Thời gian nung bệnh 2 – 12 ngày Triệu chứng lâm sàng gần

giống như loài nhai lại Con vật sốt cao, bỏ ăn, các mụn nước thường xuất hiện trên mõm, tổn thương ở miệng ít hơn, không chảy nước rãi, xuất hiện mụn ở viền móng, kẽ móng Mụn nước phát triển ở vành móng làm lợn loãng móng,

có thể loãng một hoặc hai móng, con vật đi khập khiễng Lợn nái nuôi con cũng có mụn nước (Baillrrèe Tindal, 1985) [34]

Trên lợn, các triệu chứng lâm sàng của LMLM không thể phân biệt

được với các bệnh có mụn nước khác như bệnh viêm miệng mụn nước; bệnh ngoại ban có mụn nước và bệnh mụn nước ở lợn (Callis, Kercher, 1986) [47]

2.3.7.2 Dạng không điển hình

- Thể hiện ở đường tiêu hoá: chủ yếu xảy ra ở gia súc non, con vật bị tiêu chảy và chết

- Thể hiện ở đường hô hấp: thường xảy ra ở cừu nhất là cừu non Bắc

Âu, Trung Cận Đông Con vật sốt cao 41,5 – 42oC da đen sạm, miệng chẩy nước rãi chết trong vòng 3 – 5 ngày

- Nhiễm trùng huyết: xảy ra ở gia súc non, vi rút có độc lực cao

- Xẩy thai (cần phân biệt với các bệnh khác cũng gây xẩy thai)

2.3.7.3 Dạng tiềm ẩn

Không biểu hiện triệu chứng lâm sàng, phải lấy niêm mạc hầu để tìm vi rút, trường hợp thấy có kháng thể cao và giữ lâu không giảm thì khẳng định là

vi rút tồn tại và phải xem là con vật mang trùng Lợn ít mang trùng, ngược lại

dê, cừu là loài mang trùng và là nguồn làm lây lan bệnh cao

Các bệnh tích đặc trưng ở giai đoạn đầu thường là vi thể và giới hạn ở các vùng biểu mô, ban đầu là thoái hoá các tế bào ở vùng giữa lớp gai có biểu mô Tế bào biểu mô co tròn và bong tách Tương bào trở lên ái toan, nhân của chúng phình to dịch phù chứa những mảnh fibrin tích tụ ở gian bào và tách

ra Bạch cầu trung tính thâm nhiễm các biểu mô Hoại tử ướt và tích tụ huyết thanh, bạch cầu tạo nên các mụn nước, lớp hạ bì bị xung huyết nặng các mụn nước nhỏ hợp lại thành các lớp mỏng làm cho cả một vùng biểu mô lớn bị tách

ra và vỡ, các bệnh tích ở vùng da và kẽ móng cũng tương tự

Biểu mô thường bong tróc trên bề mặt của hai phần ba phía trước lưỡi

bò để lại bề mặt lưỡi đỏ rỉ máu Hiện tượng này giải thích cho triệu chứng chán ăn Các thương tổn ở miệng và lưỡi được hàn gắn nhanh chóng và

thường liền sẹo trong vòng một tuần Bệnh tích của vùng móng thường bị nhiễm trùng kế phát gây nên hoại tử và chảy mủ Móng bong ra tạo nên sự

dị hình ở móng và què

ảnh 2: Bệnh tích do Vi rút LMLM gây ra ở môi và chân lợn

Bệnh tích ở tim thường thấy ở gia súc non bị chết Bệnh tích thường là những điểm màu ghi nhỏ hoặc kích thước đa dạng, làm cho cơ tim có các vết sọc (tim vằn hổ) Về vi thể, sự thoái hoá kính và hoại tử của sợi cơ tim kết hợp thâm nhiễm lympho và bạch cầu trung tính Bệnh tích cơ tim không phải thực sự là điển hình của bệnh LMLM nhưng nó được tin là một nguyên nhân gây chết gia súc mới sinh

Các bệnh tích cơ tim tương tự nhưng trầm trọng hơn thường sẩy ra ở chuột con đang bú được gây nhiễm thực nghiệm với vi rút LMLM (Andersen,

1980 ) [32]

2.3.9 Chẩn đoán

Việc xác định chính xác bệnh LMLM là quan trọng bậc nhất ở tất cả các nước, ngay cả những nước có dịch địa phương hoặc những nước, những vùng thực tế không có bệnh Phát hiện sớm bệnh LMLM có tầm quan trọng trong việc

đưa ra các biện pháp khống chế và tiêu diệt bệnh, giảm các thiệt hại do bệnh gây nên Việc xác định type, subtype vi rút LMLM gây bệnh ở các vùng, địa phương

có ý nghĩa quyết định trong chương trình phòng chống bệnh bằng vắc xin

Theo các tác giả Callis và Mc Kercher,1986 [47]; Kitching, 1989 [49]; Brooksby, 1982 [46]; Dimitradis I,1991 [37]; Have và Jensen 1983 [44]; và nhiều tác giả khác thì chẩn đoán xác định bệnh LMLM bằng các phương pháp sau:

2.3.9.1 Chẩn đoán dựa trên triệu chứng lâm sàng và bệnh tích

Việc chẩn đoán lâm sàng bệnh LMLM có thể thực hiện trong trường hợp bệnh xẩy ra tại khu vực đã được xác định là có dịch LMLM (Nguyễn Tiến Dũng, 2000) [14] Căn cứ các đặc điểm dịch tễ: Bệnh đại lưu hành, tốc

độ lây lan nhanh, tỷ lệ mắc cao, tỷ lệ chết thấp, động vật guốc chẵn đều mắc bệnh

Các triệu chứng: Sốt cao, chảy nước bọt nhiều, con vật có biểu hiện què, có các mụn nước ở niêm mạc miệng, lợi, chân răng, lưỡi, kẽ móng, gờ móng, ở vú Những con mới khỏi bệnh thì trên niêm mạc miệng, lợi, chân răng, lưỡi, kẽ móng có các vết sẹo Đối với lợn da trắng, có thể xuất hiện các vệt đen trên móng chân màu trắng, lợn con theo mẹ bị chết nhiều Thông thường lợn mắc bệnh dễ bị tụt móng chân hơn bò

Tuy nhiên việc chẩn đoán lâm sàng cần phải chẩn đoán phân biệt với các bệnh khác như: viêm miệng mụn nước (VS), bệnh mụn nước lợn (SVD), bệnh ngoại ban có mụn nước (VES), bệnh do vi rút sư tử biển san Migual gây

lên (SMSV) (Kitching và Donalson, 1987) [48]

Chẩn đoán phân biệt chính xác phải dựa trên chẩn đoán phòng thí nghiệm

2.3.9.2 Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm

+ Lấy mẫu bệnh phẩm: Bệnh phẩm thích hợp nhất để phân lập vi rút LMLM là biểu mô và dịch tiết ở các mụn nước chưa hoặc mới vỡ Lượng mẫu tối thiểu phải từ 3 đến 5 g tổ chức tươi Để phát hiện kháng thể, thường dùng bệnh phẩm là máu của những con nghi mắc bệnh

Bệnh phẩm được lấy sạch, chưa bị hoại tử, được bảo quản trong dung dịch PBS 0,04M với một lượng tương đương glycerin (pH: 7,2 – 7,6), bảo quản và vận chuyển trong điều kiện nhiệt độ lạnh

Bệnh phẩm là máu phải được lấy vô trùng với một lượng tối thiểu 3 – 5

ml Để máu đông, ly tâm chắt lấy huyết thanh và bảo quản ở nhiệt độ mát (4oC) và đưa đến phòng thí nghiệm

a Tiêm truyền vi rút

Huyễn dịch bệnh phẩm nghi có chứa vi rút LMLM cần phải li tâm trước khi cấy vào môi trường tế bào nuôi hoặc tiêm cho động vật thí nghiệm Các tế bào nhạy cảm với vi rút LMLM bao gồm: Tế bào tuyến giáp trạng bò sơ cấp,

tế bào thận cừu, thận lợn sơ cấp; các tế bào dòng như tế bào thận chuột Hamster non (BHK-21)

Dùng bệnh phẩm trên tiêm vào nội bì lưỡi bò, bò không nằm trong phạm vi ổ dịch chưa được tiêm phòng vắc xin LMLM, sau khi tiêm 24-48 giờ, xuất hiện các mụn nước ở các chỗ tiêm, dần dần mụn vỡ thành vết loét

Có thể dùng chuột lang để tiêm truyền gây bệnh bằng cách khía da bàn chân rồi xát bệnh phẩm lên, sau 12-24 giờ các chỗ khía da nổi mụn nhỏ, màu đỏ, có thuỷ thũng, sau đó có thể nhiễm trùng toàn thân và chết (Nguyễn Như Thanh, 1997) [12]

b Phát hiện kháng nguyên

* Phản ứng kết hợp bổ thể (CFT- Complement Fixation Test)

Phản ứng kết hợp bổ thể là phản ứng thường được dùng để phát hiện bệnh LMLM, vì đơn giản, cho kết quả nhanh, chính xác và ít tốn kém Trong phương pháp này người ta sử dụng kháng huyết thanh chuẩn đã biết để phát hiện type vi rút

Nguyên lý: dùng các type huyết thanh đã biết để phát hiện type vi rút gây bệnh (Nguyễn Như Thanh, 2001) [13] Phản ứng kết hợp bổ thể được thực hiện nhờ hai hệ thống: hệ thống dung huyết và hệ thống dung trùng với sự tham gia của bổ thể

- Huyết thanh miễn dịch của từng type vi rút được chế trên chuột lang bằng phương pháp gây tối miễn dịch: tiêm vắc xin LMLM của các type khác nhau vào trong da dưới gan bàn chân từng nhóm chuột lang hai lần, mỗi lần cách nhau một tháng, sau đó lấy máu chắt huyết thanh có chứa kháng thể

- Kháng nguyên là máu gia súc nghi mắc bệnh LMLM hoặc dùng bệnh phẩm cấy vào môi trường tế bào tổ chức lấy từ tuyến yên của bò hoặc của lợn,

tế bào thận bê non hoặc dòng tế bào có độ nhạy tương đương, khi tế bào nuôi xuất hiện các biến đổi tế bào thì lấy dịch làm phản ứng kết hợp bổ thể

Theo Tô Long Thành [28] tóm tắt nguyên lý phản ứng: kháng huyết thanh của một trong 7 type vi rút LMLM được pha loãng trong dung dịch đệm veronal theo bậc 1,5; bắt đầu từ độ pha loãng 1/16, thể tích dùng trong phản ứng là 25 àl Thêm vào 50 àl có chứa 3 đơn vị bổ thể, sau đó thêm 25 àl huyễn dịch bệnh phẩm cần chẩn đoán Cuối cùng thêm 25 àl dung dịch hồng cầu đã pha loãng Hiệu giá của phản ứng kết hợp bổ thể là nghịch đảo độ pha loãng của huyết thanh tạo nên dung huyết 50% Hiệu giá của phản ứng kết hợp bổ thể >36 được coi là phản ứng dương tính

Phản ứng kết hợp bổ thể cũng đã được hoàn thiện rất kỹ, khi sử dụng thành thục nó sẽ là một phương tiện hữu hiệu để chẩn đoán phân biệt giữa vi rút LMLM và các vi rút gây viêm miệng mụn nước khác Tuy vậy một số tác giả cho rằng, dùng phản ứng kết hợp bổ thể để phân biệt các type với nhau kém hiệu quả

*Phản ứng ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

- Phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên: trong chẩn đoán bệnh LMLM hiện nay, phương pháp ELISA là một phương pháp có độ chính xác cao và rất nhạy (Crowther, Abu Elzein, 1979 [36]; Have và cs, 1983 [44]; Hamblin và cs, 1987 [45] Phản ứng ELISA thường được dùng hơn so với phản ứng KHBT vì nó đặc hiệu và nhạy hơn, cũng như nó không bị ảnh hưởng

của các yếu tố tăng cường hoặc ức chế bộ thể (Tô Long Thành, 2000) [28] So

với phương pháp kết hợp bổ thể, ELISA có ưu điểm rõ rệt về mặt thời gian

Nguyên lý: dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym, rồi cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, sau đó cho cơ chất vào, cơ chất bị enzym phân huỷ tạo màu Và khi so màu trong quang phổ kế sẽ định lượng được mức độ phản ứng

Bước 1: cố định kháng thể đặc hiệu lên phiến chất dẻo, rửa nước để loại

bỏ kháng thể không gắn

Bước 2: cho huyễn dịch bệnh phẩm đã chiết xuất hoà tan (kháng

nguyên) lên Nếu có kháng nguyên tương ứng, chúng sẽ gắn với kháng thể đặc

hiệu Rửa nước để loại bỏ kháng thể thừa

Bước 3: cho kháng thể đã gắn enzym vào

Nếu trong bước 2 đã có kết hợp giữa kháng nguyên với kháng thể đặc hiệu, thì trong bước 3 sẽ xẩy ra kết hợp lần thứ hai của kháng nguyên với kháng thể đánh dấu enzym Rửa nước loại bỏ kháng thể đánh dấu thừa

Bước 4: tiếp tục cho cơ chất tương ứng với enzym vào

Trong trường hợp giám định type vi rút: phản ứng sử dụng kháng thể thỏ kháng vi rút LMLM hấp phụ lên đĩa nhựa 96 lỗ để bẫy kháng nguyên vi rút trong mẫu bệnh phẩm Sau đó 1 kháng thể thứ hai (kháng thể chuột lang kháng vi rút LMLM) được dùng để định type kháng nguyên vi rút đã bẫy được Phương pháp này đang được áp dụng thường quy tại nhiều phòng thí nghiệm trên thế giới

Hiện nay phản ứng ELISA là một phản ứng chẩn đoán nhanh dùng cho bệnh LMLM cũng như trong giám định type của vi rút Phản ứng này có những thuận lợi hơn hẳn các phản ứng thông thường khác Đây là một phản ứng có tính đặc hiệu cao và khi dùng với một kháng thể đơn dòng, có thể đây

là một kỹ thuật nhạy nhất với mục đích chẩn đoán và định type (Tô Long Thành, 2000) [28] Theo quy định của phòng thí nghiệm chuẩn về LMLM của OIE, phương pháp thích hợp nhất để phát hiện kháng nguyên của vi rút LMLM và định type vi rút LMLM là phản ứng ELISA

*Chẩn đoán bằng kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction)

Để chẩn đoán khẳng định bệnh LMLM trong phòng thí nghiệm, ngoài các phương pháp kinh điển như phản ứng kết hợp bộ thể, phản ứng ELISA người ta còn sử dụng phương pháp PCR (Reid và cs,1999 [60]; Oleksiewicz và cs, 2001 [57]; đây là phương pháp mới đang được nghiên cứu ứng dụng trong chẩn đoán LMLM Kỹ thuật PCR được sử dụng khi sử dụng phương pháp ELISA và phân lập vi rút trên môi trường tế bào không thể phát hiện được vi rút

Kỹ thuật PCR được Kary Mullis và cộng sự phát minh ra vào năm 1985 (Reid và cs, 1999) [60] Kỹ thuật PCR là một phương pháp tạo dòng Invitro cho phép khuếch đại một vùng AND (deoxyribonucleic) đặc hiệu từ một hệ gen phức tạp và khổng lồ mà không cần đến việc tách và nhân dòng (cloning) Với những vi rút thuộc loại ARN vi rút thì phải tiến hành thêm phản ứng sao chép ngược nhờ men sao chép ngược RT (Reverse Transcriptase) để chuyển ARN thành AND Sau đó tiến hành phương pháp PCR như các quy trình thông thường (Kitching, 1989) [50]

Do tính chất đa dạng của vi rút LMLM, những phương pháp chẩn đoán như: Phương pháp cố định bổ thể, phương pháp trung hoà vi rút và phương pháp ELISA chỉ có ý nghĩa xác định type huyết thanh của vi rút chứ không phân biệt được các subtype với nhau, cũng như phát hiện kháng thể kháng các protein cấu trúc của vi rút chứ không phân biệt được kháng thể đó là do con

vật tiêm phòng hay do bị nhiễm bệnh tự nhiên mà có Chính vì vậy, người ta

sử dụng phương pháp chẩn đoán RT- PCR để tách dòng và giải trình trình tự Nucleotid để chẩn đoán, phân lập, định type vi rút LMLM (Pearson và Lipman, 1988 [58]; Reid và cs, 2001 [60]

c Phát hiện kháng thể Lở mồm Long móng

* Phản ứng trung hoà vi rút

Phản ứng này rất đặc hiệu và nhạy, chỉ cần từ 2 đến 3 ngày là cho kết quả Việc tìm ra kháng thể đặc hiệu ở gia súc chưa được tiêm phòng vắc xin LMLM đủ kết luận là con vật có bệnh

Nguyên lý: vi rút LMLM có khả năng kích thích cơ thể sản sinh ra kháng thể dịch thể đặc hiệu, sự kết hợp giữa vi rút và kháng thể dịch thể đặc hiệu làm cho vi rút mất tác dụng, không còn khả năng gây bệnh

Phản ứng này dùng chẩn đoán các trường hợp bị bệnh nhẹ, không điển hình, người ta lấy máu chắt huyết thanh tìm kháng thể

Kháng nguyên là vi rút LMLM chuẩn nuôi cấy trên môi trường BHK-21

để kháng nguyên và kháng thể tác động với nhau Sau đó dùng hỗn dịch của từng ống nghiệm cấy vào các dãy lỗ nhựa đã nuôi cấy tế bào, đồng thời các lỗ đối chứng âm không cấy hỗn dịch mà để tế bào tiếp tục phát triển và các lỗ đối chứng dương cấy các type vi rút LMLM tiếp tục để tủ ấm 37ºC trong vòng từ 2 đến 3 ngày

Đọc kết quả, nếu lỗ đĩa nhựa nào không có sự huỷ hoại tế bào (tương

đương với lỗ đối chứng âm), chứng tỏ lỗ đó có kháng thể tương đương với type

vi rút LMLM, nên vi rút bị kháng thể trung hoà nên không còn khả năng huỷ hoại tế bào Ngược lại, nếu lỗ đĩa nào có hiện tượng huỷ hoại tế bào, tức là ở đó vẫn còn vi rút (tương đương lỗ đối chứng dương) chứng tỏ kháng thể không tương ứng với type vi rút đó hoặc trong huyết thanh không có kháng thể

Sau khi đã định type vi rút gây bệnh, người ta pha loãng huyết thanh nghi theo cơ số 2, tức ở các nồng độ 1/2, 1/4, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128… Lấy từng độ pha loãng huyết thanh này trộn với type vi rút đã xác định một lượng tương đương, để tủ ấm 37ºC trong 1 giờ Sau đó lấy hỗn dịch của từng độ pha loãng cho vào các dãy lỗ đĩa nhựa đã nuôi cấy tế bào, để tủ ấm 37ºC trong 2 -3 ngày và đọc kết quả, cần có các lỗ đối chứng âm và dương để so sánh Hiệu giá kháng thể tương ứng với độ pha loãng lớn nhất mà ở đó tế bào nuôi không

bị huỷ hoại

Phản ứng trung hoà vi rút vừa có tính chất định tính vừa có tính chất

định lượng nhưng thường có hiện tượng ngưng kết giả

* Phản ứng LPB-ELISA (Liquid Phase Blocking-ELISA)

Phản ứng LPB-ELIS phát hiện kháng thể là một phản ứng nhanh nhạy

và đặc hiệu có thể cho ta kết quả trong vòng 24 giờ Phản ứng cũng có nguyên tắc như phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên, nhưng cách tiến hành có khác chút ít: sử dụng kháng nguyên chuẩn và kháng kháng thể để phát hiện kháng thể chống lại bệnh LMLM Khi gắn kháng nguyên chuẩn lên đĩa 96 lỗ

và cho huyết thanh cần chẩn đoán lên, nếu có kháng thể tương ứng thì sẽ có sự kết hợp kháng nguyên – kháng thể và sau đó khi cho kháng kháng thể có gắn enzym vào thì tiếp tục có sự kết hợp kháng nguyên – kháng thể – kháng kháng thể (có gắn enzym) không bị trôi đi khi ta rửa nước Như vậy khi cho cơ chất tương ứng với enzym vào thì enzym sẽ phân huỷ cơ chất tạo thành sản phẩm

có màu