4. kết quả và thảo luận
4.3. Kết quả chẩn đoán phát hiện virút
Với mục tiêu xác định hiệu giá kháng thể mà đàn lợn có đ−ợc do tiêm vắc xin, b−ớc đầu chúng tôi tiến hành kiểm tra sự l−u hành của vi rút trên đàn lợn. Vì tiêm phòng th−ờng xuyên nên có thể có hiện t−ợng mang trùng hoặc là
Tỷ lệ mắc một số bệnh th−ờng gặp trên đàn lợn nái 2% 17% 18% 8% 9% 13% 3% 10% 18% 2% Tụ huyết trùng Viêm phổi Viêm tử cung Viêm khớp Viêm tiết niệu Đẻ khó Thời tiết Liệt yếu Không năng suất Không rõ
có mang kháng thể tự nhiên do đã bị nhiễm tr−ớc đây.
Ph−ơng pháp ELISA phát hiện kháng thể cho phép xác định các type gây bệnh LMLM. Đối với ph−ơng pháp này, khi chẩn đoán cho kết quả d−ơng tính thì ch−a thể kết luận ngay đ−ợc gia súc đó bị bệnh LMLM. Ph−ơng pháp này không thể xác định đ−ợc kháng thể đ−ợc hình thành là do gia súc bị nhiễm bệnh tự nhiên hay do gia súc đã đ−ợc tiêm phòng. Để kiểm tra hiệu giá kháng thể trên đ−ợc sinh ra do tiêm vắc xin, do mẹ truyền cho hay do vi rút tồn tại trong môi tr−ờng chúng tôi thực hiện ph−ơng pháp ELISA phát hiện kháng thể bằng bộ kit 3 - ABC.
Vắc xin chống LMLM là một chế phẩm vô hoạt, không có sự nhân lên của vi rút trên động vật đã đ−ợc tiêm phòng và không làm xuất hiện các protein không phải cấu trúc của vi rút. Do đó, về mặt lý thuyết động vật không sản sinh kháng thể kháng lại các kháng nguyên không phải cấu trúc. Tuy nhiên trong thực tế có một l−ợng nhỏ men polymerase của vi rút, gọi là protein 3D hoặc VIAA trong virion; và một l−ợng nào đó trong vắc xin vô hoạt, phụ thuộc vào kháng nguyên đó đ−ợc tinh khiết và cô đặc nh− thế nào bởi nhà sản xuất tr−ớc khi trộn với tá chất, đủ để tạo ra hiệu giá kháng thể sau khi dùng vắc xin đối với protein không cấu trúc này. Sau khi con vật khỏi bệnh, có thể phát hiện đ−ợc kháng thể kháng các protein không phải cấu trúc khác (L, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C) trong mẫu huyết thanh. Do có tính kháng nguyên rất cao nên kháng nguyên 3 - ABC sẽ kích thích gia súc tạo ra kháng thể với số l−ợng lớn và tồn tại nhiều tháng trong huyết thanh trâu bò đã bị nhiễm bệnh. Sự có mặt của những protein này có thể đ−ợc sử dụng trong thực nghiệm để phân biệt giữa huyết thanh của động vật đ−ợc tiêm phòng và của động vật khỏi bệnh tự nhiên. Vì vậy việc phát hiện kháng thể đặc hiệu 3 - ABC cho phép kết luận gia súc đang bị nhiễm vi rút LMLM.
diễn ra. Trong quá trình này, vi rút vừa tạo ra các thành phần để tái tạo thành các hạt vi rút mới, vừa tạo ra các thành phần không tham gia kết hợp thành các hạt vi rút mới mà chỉ đóng vai trò các men giúp cho quá trình nhân lên. Các thành phần kết hợp thành bản thân vi rút có tính kháng nguyên gọi là kháng nguyên cấu trúc. Các thành phần không tham gia kết hợp thành các hạt vi rút mới và có tính kháng nguyên gọi là kháng nguyên không cấu trúc. Trong các kháng nguyên không cấu trúc của vi rút LMLM thì kháng nguyên 3- ABC đ−ợc các nhà nghiên cứu đặc biệt quan tâm. Do có tính kháng nguyên rất cao nên kháng nguyên 3-ABC sẽ kích thích gia súc tạo ra kháng thể với số l−ợng lớn và tồn tại nhiều tháng trong huyết thanh trâu bò đã bị nhiễm bệnh. Vì vậy việc phát hiện kháng thể đặc hiệu 3- ABC cho phép kết luận gia súc đang bị nhiễm vi rút LMLM.
Hiện nay, n−ớc ta nhập vắc xin LMLM từ hãng Pfizer, Merial và Intervet. Đây là những vắc xin vô hoạt và đã đ−ợc loại bỏ những kháng nguyên không cấu trúc, do đó sau khi tiêm gia súc chỉ sản sinh kháng thể không đặc hiệu chống vi rút LMLM chứ không có kháng thể kháng lại kháng nguyên không cấu trúc 3-ABC. Bởi vậy, ph−ơng pháp này sẽ phát hiện đ−ợc lợn bị nhiễm vi rút LMLM, kể cả những con đã đ−ợc tiêm phòng.
Bộ kit này chỉ cho phép chúng ta phát hiện đ−ợc những lợn mắc bệnh LMLM do nhiễm tự nhiên trong một thời gian ngắn nh−ng không xác định đ−ợc đó là type nào. Ngoài ra bộ kit này có khả năng phát hiện kháng thể 3- ABC ở lợn bị nhiễm vi rút LMLM sau 10 - 16 ngày và kéo dài 6 - 8 tháng. Vì vậy, khi kết quả (+) tính (OD ≥ 30%), có thể kết luận lợn bị nhiễm vi rút LMLM.
Lấy ngẫu nhiên 20 mẫu huyết thanh lợn nái, 20 mẫu huyết thanh lợn con và 30 mẫu huyết thanh lợn choai. Chúng tôi thực hiện phản ứng ELISA với bộ kít 3- ABC.
Kết quả đ−ợc thể hiện ở bảng 4.5.
Bảng 4.5 Kết quả chẩn đoán phát hiện kháng thể bằng ph−ơng pháp ELISA – 3ABC
Kết quả kiểm tra bằng ELISA – 3ABC
Số l−ợng
D−ơng tính Âm tính
Lợn nái 20 0 20
Lợn con 20 0 20
Lợn choai 30 0 30
Kết quả cho thấy toàn bộ số mẫu đem thử đều âm tính. Điều này chỉ ra rằng đàn lợn tr−ớc đó không bị nhiễm vi rút LMLM, kháng thể đàn lợn có là do tiêm phòng vắc xin hoặc là do mẹ truyền cho con qua sữa đầu.
Sau đó chúng tôi tiến hành các phản ứng ELISA khảo sát hiệu giá kháng thể của đàn lợn đ−ợc tiêm phòng.