Luận văn nghiên cứu đặc điểm nông sinh học, khả năng nhân giống in vitro hoa lilium poilanei gapnep và đánh giá đa dạng di truyền n

Luận văn nghiên cứu đặc điểm nông sinh học, khả năng nhân giống in vitro hoa lilium poilanei gapnep và đánh giá đa dạng di truyền n

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ------------------ VŨ QUANG KHÁNH “NGHIÊN CỨU ðẶC ðIỂM NÔNG SINH HỌC, KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA LILIUM POILANEI GAPNEP VÀ ðÁNH GIÁ ðA DẠNG DI TRUYỀN NGUỒN GEN CHI LILIUM” LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: TRỒNG TRỌT Mã số: 60.62.01 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO HÀ NỘI - 2008 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa hề ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Vũ Quang Khánh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: TS. Nguyễn Thị Phương Thảo, người hướng dẫn khoa học ñã tận tình giúp ñỡ với tinh thần trách nhiệm cao và ñóng góp nhiều ý kiến quý báu giúp tôi hoàn thành luận văn này. Tập thể Thầy, Cô giáo khoa Nông Học, khoa Sau ñại học, ñặc biệt các Thầy, Cô giáo trong Bộ môn công nghệ sinh học trường ðại Học Nông nghiệp Hà Nội ñã trực tiếp hướng dẫn và ñóng góp nhiều ý kiến quý báu giúp tôi hoàn thành luận văn này. Tập thể cán bộ, công nhân viên viện sinh học nông nghiệp, các bạn học sinh K49 trường ðại học nông nghiệp Hà Nội ñã giúp ñỡ tôi rất nhiều trong quá trình làm ñề tài. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các bạn bè, ñồng nghiệp, gia ñình và người thân ñã nhiệt tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình tiến hành ñề tài. Hà Nội, ngày tháng năm 2008 Tác giả luận văn Vũ Quang Khánh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt vi Danh mục các bảng vii 1. Mở ñầu 1 1.1. ðặt vấn ñề 1 1.2. Mục ñích và yêu cầu 2 1.3. ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 3 2. Tổng quan tài liệu 4 2.1. Giới thiệu chung về hoa lily 4 2.2. Tình hình sản xuất hoa lily trên thế giới và Việt Nam 9 2.3. Tình hình nghiên cứu về xử lý nhiệt ñộ thấp ñối với cây hoa lily 14 2.4. ứng dụng nuôi cấy in vitro trên cây hoa lily trên thế giới và Việt Nam 20 2.5. Nghiên cứu ða dạng di truyền trên cây hoa lily 25 3. Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu 32 3.1. ðối tượng, vật liệu, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu 33 3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu 35 4. Kết quả nghiên cứu và thảo luận 41 4.1. Nghiên cứu về thời lượng xử lý nhiệt ñộ thấp 41 4.1.1. Phân loại củ Lilium poilanei Gapnep 41 4.1.2. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến tỷ lệ mọc mầm của củ hoa Lilium poilanei Gapnep 43 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 4.1.3. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái tăng trưởng chiều cao cây hoa Lilium poilanei Gapnep 46 4.1.4. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến thời gian ñạt chiều cao tối ña (khi cây ra nụ) cây hoa Lilium poilanei Gapnep 49 4.1.5. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái ra lá cây hoa Lilium poilanei Gapnep 50 4.1.6. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến thời gian ñạt số lá tối ña cây hoa Lilium poilanei Gapnep 52 4.1.7. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến các thời kỳ sinh trưởng cây hoa Lilium poilanei Gapnep 54 4.1.8. Một số ñặc ñiểm hình thái cây hoa Lilium poilanei Gapnep 57 4.2. Nghiên cứu khả năng nhân in vitro hoa Lilium poilanei Gapnep 59 4.2.1. Thí nghiệm 1. Nghiên cứu thời gian khử trùng thích hợp tạo mẫu sạch ñưa vào nuôi cấy 59 4.2.2. Thí nghiệm 2. Nghiên cứu ảnh hưởng của α-NAA ñến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ 60 4.2.3. Thí nghiệm 3. Nghiên cứu ảnh hưởng của BA ñến khả năng phát sinh hình thái của vẩy củ 62 4.2.4. Thí nghiệm 4. Nghiên cứu ảnh hưởng của BA và α-NAA ñến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ 63 4.2.5. Thí nghiệm 5. Nghiên cứu ảnh hưởng của BA và α-NAA ñến khả năng nhân nhanh của chồi 65 4.2.6. Thí nghiệm 6. ảnh hưởng của than hoạt tính ñến khả năng ra rễ của chồi Lilium poilanei Gapnep 68 4.3. ðánh giá ña dạng di truyền của một số giống/loài hoa lily bằng kỹ thuật RAPD 69 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v 4.3.1. Nghiên cứu ña dạng di truyền một số giống/loài hoa lily bằng chỉ thị phân tử RAPD 70 4.3.2. Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR của các giống/loài lily nghiên cứu với mồi RAPD 71 4.3.3. Số băng ADN thu ñược của 32 giống/loài lily với mồi RAPD 72 5. Kết luận và ñề nghị 76 5.1. Kết luận 76 5.2. ðề nghị 77 Tài liệu tham khảo 78 Phụ lục 86 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CT: Công thức TB: Trung bình THT: Than hoạt tính α -NAA: Axit α - naphtyl axetic BA: Benzyl adenin MS: Murashige & Skoog, 1962 ð/C: ðối Chứng NST: Nhiễm sắc thể Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1. Diện tích trồng hoa lily ở một số nước năm 2005-2006 10 3.1. Danh sách tên và ký hiệu các loài/ giống lily sử dụng phân tích RAPD 33 3.2. Các mồi sử dụng trong phân tích ña hình ADN bằng kỹ thuật RAPD 34 4.1. Phân loại theo hình thái củ Lilium poilanei Gapnep 42 4.2. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến tỷ lệ mọc mầm của củ Lilium poilanei Gapnep 44 4.3. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái tăng trưởng chiều cao cây hoa Lilium poilanei Gapnep 47 4.4. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến thời gian ñạt chiều cao tối ña cây hoa Lilium poilanei Gapnep 49 4.5. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái ra lá cây hoa Lilium poilanei Gapnep 51 4.6. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến thời gian ñạt số lá tối ña cây hoa Lilium poilanei Gapnep 53 4.7. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến các thời kỳ sinh trưởng cây hoa Lilium poilanei Gapnep 55 4.8. Một số ñặc ñiểm hình thái cây hoa Lilium poilanei Gapnep 57 4.9. ảnh hưởng của thời gian khử trùng tới khả năng tạo mẫu sạch của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep (sau 2 tuần nuôi cấy) 60 4.10. ảnh hưởng của α-NAA ñến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep (sau 8 tuần nuôi cấy) 61 4.11. ảnh hưởng của BA ñến khả năng tái sinh của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii 4.12. ảnh hưởng của BA và α-NAA ñến khả năng phát sinh hình thái của mô vẩy củ Lilium poilanei Gapnep 64 4.13. ảnh hưởng của BA và α-NAA ñến khả năng nhân nhanh của chồi hoa Lilium poilanei Gapnep tái sinh (sau 6 tuần nuôi cấy) 66 4.14. ảnh hưởng của than hoạt tính ñến khả năng ra rễ của chồi loài hoa Lilium poilanei Gapnep 69 4.15. Số băng ADN thu ñược của 32 giống/loài lily với 3 mồi RAPD 72 4.16. Hệ số tương ñồng di truyền của 27 giống/loài lily nghiên cứu 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1. Lilium poilanei Gapnep 4 2.2. Sự sắp xếp lá cây hoa lily 7 2.3. Hình dạng bông hoa lily 7 4.1. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến tỷ lệ mọc mầm của củ Lilium poilanei Gapnep 45 4.2. Sự nảy mầm của củ hoa Lilium poilanei Gapnep (CT3) 46 4.3. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái tăng trưởng chiều cao cây hoa Lilium poilanei Gapnep 48 4.4. ảnh hưởng của thời lượng xử lý lạnh ñến ñộng thái ra lá cây hoa Lilium poilanei Gapnep 52 4.5. Sinh trưởng của cây hoa Lilium poilanei Gapnep ở các thời lượng xử lý lạnh khác nhau (sau trồng 14 tuần) 57 4.6. Một số ảnh về hoa Lilium poilanei Gapnep 58 4.7. Sự phát sinh thái của mô vẩy củ hoa Lilium poilanei Gapnep 65 4.8. ảnh hưởng của BA và α -NAA ñến khả năng nhân nhanh của của chồi Lilium poilanei Gapnep tái sinh 67 4.9. ảnh hưởng của BA và α-NAA ñến khả năng nhân nhanh của của chồi Lilium poilanei Gapnep tái sinh 68 4.10. Kết quả ñiện di ADN tổng số tách chiết từ 32 giống/loài lily 70 4.11. ảnh ñiện di sản phẩm PCR với mồi OPA-10 71 4.12. ảnh ñiện di sản phẩm PCR với mồi P615 72 4.13. ảnh ñiện di sản phẩm PCR với mồi P650 72 4.14. Sơ ñồ cây biểu diễn mối quan hệ di truyền của 27giống/loài nghiên cứu 74 . nghi n cứu bảo t n và phát tri n hoa lily ở Việt Nam chúng tôi ti n hành nghi n cứu ñề tài: Nghi n cứu ñặc ñiểm n ng sinh học, khả n ng nh n giống in vitro. BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC N NG NGHIỆP HÀ N I ------------------ VŨ QUANG KHÁNH “NGHI N CỨU ðẶC ðIỂM N NG SINH HỌC, KHẢ N NG NH N GIỐNG IN VITRO