Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học và khả năng nhân giống in vitro hoa lily Lilium poilanei Gapnep
MỤC LỤC
Giới thiệu chung về hoa lily 1. Nguồn gốc và sự phân bố
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………4 2. Tổng quan tài liệu. Giới thiệu chung về hoa lily. distichum, hansonii, martagon, medeoloides, isingtauense 2. Nhóm American a) L.boladner, columbianum, kelloggii, umboldtii, rubescens,. b) L.maritimum, nevadense, occidentale, parryi, parvum, roezlii. c) L.canadense, grayi, iridollae, michauxii, michiganense, superbum. Chiều cao cõy ủược quyết ủịnh bởi số lỏ và chiều dài ủốt, số lỏ chịu ảnh hưởng bởi chất lượng củ giống, ủiều kiện và thời gian xử lý lạnh củ giống, thường thỡ số mầm lỏ ủược quyết ủịnh trước khi trồng vỡ vậy chiều cao cõy chủ yếu ủược quyết ủịnh bởi chiều dài ủốt.
Tình hình sản xuất hoa lily trên thế giới và Việt Nam 1. Tình hình sản xuất hoa lily trên thế giới
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………11 Toàn bộ củ giống, ước tính khoảng 152 triệu củ, dùng trong sản xuất hoa cắt ủược nhập khẩu chủ yếu từ Hà Lan, khoảng 70% là giống Lilium elegans, 20% là giống lai phương ủụng và 10% là giống Lilium longiflorum (Grassotti. Theo ủề ỏn phỏt triển rau quả và hoa cõy cảnh ủến năm 2010, tầm nhỡn 2020 thì nước ta sản xuất rau hoa quả phải trên cơ sở áp dụng công nghệ cao, trước hết phải thực hiện quy trình sản xuất theo hướng thực hành nông nghiệp tốt (GAP) bảo ủảm vệ sinh an toàn thực phẩm, cạnh tranh với hàng húa nhập khẩu ngay tại thị trường trong nước và ủẩy mạnh xuất khẩu.
Ứng dụng nuôi cấy in vitro trên cây hoa lily trên thế giới và Việt Nam
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………21 kiện và yếu tố mụi trường trong việc nhõn nhanh in vitro như mức ủộ gõy tổn thương cho mụ (Van Aartrijk và Blom-Barnhoorn, 1984), ủiều kiện nhiệt ủộ ánh sáng (Niimi và Onozawa, 1979), thành phần môi trường dinh dưỡng (Slimart và Ascher,1978) [14]. Nghiên cứu khác của Nguyễn Thái Hà và cộng sự (2003) [30] công bố kết quả nghiên cứu sự phát sinh củ in vitro các giống hoa Lilium và kết luận ủường saccaroze là thành phần quan trọng quyết ủịnh sự hỡnh thành củ in vitro, hàm lượng ủường từ 9-12% cho hệ số nhõn củ từ 1,8-4,1 lần tuỳ thuộc vào từng giống, mụi trường bỏn lỏng 12% ủường cú bổ sung 0,1 BA và 0,01 α-NAA trong ủiều kiện tối là tốt nhất cho quỏ trỡnh tạo củ từ vẩy và tăng cường kích thước củ.
Nghiên cứu ða dạng di truyền trên cây hoa lily 1. Khỏi niệm về ủa dạng di truyền
Tuy nhiên, việc sử dụng cỏc chỉ tiờu hỡnh thỏi trong phõn tớch ủa dạng di truyền cũng cú những hạn chế nhất ủịnh: số lượng cỏc chỉ tiờu hỡnh thỏi là cú hạn, chỳng bị ảnh hưởng bởi quá trình tương tác gen và các nhân tố môi trường, các chỉ tiêu hình thái chỉ thể hiện ở những giai ủoạn nhất ủịnh của quỏ trỡnh phỏt triển cỏ thể. Vớ dụ như: Nghiờn cứu tớnh ủa dạng di truyền của một số giống khoai tây bằng kỹ thuật RADP-PCR (Trịnh Thị Loan và cộng sự) [10]; Nghiờn cứu tớnh ủa hỡnh của giống vừng ủen bằng phương pháp RADP - PCR (Nguyễn Thị Thuý Mai, Nguyễn Văn Mùi) [10];.
Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu
Vật liệu nghiên cứu
- Cỏc mồi sử dụng trong phõn tớch ủa hỡnh ADN bằng kỹ thuật RAPD Bảng 3.2. - Vật liệu dùng trong nghiên cứu nội dung 3 là các củ giống, vẩy củ và lá từ các giống lily trong nước và nhập nội. Toàn bộ thớ nghiệm ủược tiến hành tại phũng thớ nghiệm JICA Bộ mụn công nghệ sinh học - Khoa nông học và khu ruộng thí nghiệm Viện sinh học Nông nghiệp, Trường ðại Học Nông nghiệp - Hà Nội.
Nội dung và phương pháp nghiên cứu 1. Nội dung nghiên cứu
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………38 - Tưới nước giữ ẩm và làm cỏ thường xuyên. Chiều cao cây cuối cùng (cm): Chiều cao cây cuối cùng lá chiều cao cõy ủược ủo sau khi cõy cú nụ từ sỏt mặt luống ủến ủỉnh của lỏ cuối cựng. Quỏ trỡnh nuụi cấy in vitro ủược tiến hành trong ủiều kiện nhõn tạo, cỏc ủiều kiện ỏnh sỏng, nhiệt ủộ, ẩm ủộ luụn ủược giữ ổn ủịnh.
+ Ánh sỏng: Cỏc mẫu ủều ủược nuụi cấy dưới ỏnh ủốn neon với cường ủộ chiếu sỏng 2000 lux, thời gian chiếu 16 giờ sỏng/8 giờ tối. Sau khi ủó tỏch ủược ADN tổng số với ủộ tinh sạch cao, tiến hành nhõn bản mẫu ADN ủó tỏch ủược bằng phản ứng PCR với mồi RAPD. Phản ứng PCR (Polymerase Chain Reaction) ủược chỳng tụi tiến hành với sản phẩm ADN tinh sạch theo nguyên lý của Kary Mullis và cộng sự (1980) với.
Nghiờn cứu về thời lượng xử lý nhiệt ủộ thấp 1. Phân loại củ Lilium poilanei Gapnep
Kết quả bước ủầu cho thấy rằng thời lượng xử lý lạnh 6 tuần và 8 tuần cho tỷ lệ nẩy mầm tốt hơn cả nờn trong ủợt thớ nghiệm này chỳng tụi chỉ tiến hành xử lý lạnh củ hoa Lilium poilanei Gapnep ở 2 thời lượng là 6 tuần và 8 tuần. Cũn ở CT1 thời gian mọc mầm kéo dài và tỷ lệ mọc mầm thấp hơn hẳn so với các công thức 2, 3 là do củ giống cú thời gian ngủ nghỉ kộo dài, bờn cạnh ủú củ nằm dưới ủất lõu cũn bị ảnh hưởng trực tiếp của cỏc ủiều kiện ngoại cảnh làm thối củ và khả năng nảy mầm của củ giảm. Ở thí nghiệm này số lá của công thức 1 luôn thấp hơn CT2 và CT3 có thể giải thớch là do sự nảy mầm của cỏc củ khụng ủược xử lý lạnh ở cụng thức 1 ủó chậm hơn cỏc củ ủược xử lý lạnh ở CT2 là 2 tuần và CT3 là 4 tuần.
Như vậy công thức xử lý lạnh 6 tuần sẽ cho tổng số lá hình thành trên cây cao nhất ủạt 73,45 lỏ/cõy, thời lượng xử lý lạnh này là thớch hợp cho củ giống sinh trưởng và ủạt ủược số lỏ tối ủa cao, ủõy sẽ là tiền ủề cho việc hỡnh thành hoa sau này. Quá trình này sẽ phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố khỏc nhau như: giống, ủiều kiện khớ hậu, chăm sóc…ðối với cây hoa Lilium poilanei Gapnep việc xử lý lạnh trước khi trồng cũng cú ảnh hưởng ủến cỏc thời kỳ sinh trưởng khỏc nhau trong chu kỳ sống của nú. Trong khi ủú ở cụng thức khụng xử lý lạnh thỡ tổng thời gian sinh trưởng kéo dài và nhiều cây có hiện tượng mù hoa, số cây có hoa nở nhỏ hơn 50%, ở công thức này khi cây nở hoa 10% thì thời gian sinh trưởng ủó là 192,3 ngày.
Nghiên cứu khả năng nhân in vitro hoa Lilium poilanei Gapnep
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………61 Như chỳng ta ủó biết ủể ủiều khiển sự phỏt sinh hỡnh thỏi của mụ nuụi cấy, người ta thường bổ sung vào mụi trường nuụi cấy hai nhúm chất ủiều tiết sinh trưởng thực vật là auxin và cytokinin. Trong thí nghiệm này chúng tôi tiến hành bổ sung BA là một loại cytokinin tổng hợp nhân tạo có hoạt tính mạnh vào môi trường nuôi cấy nhằm xỏc ủịnh ảnh hưởng của nú ủến khả năng phỏt sinh hỡnh thỏi của mẫu cấy. Theo nguyên lý chung của nuôi cấy mô tế bào thực vật khi sử dụng phối hợp giữa cytokinin và auxin với nồng ủộ và tỷ lệ thớch hợp thỡ khụng những làm tăng hệ số nhân chồi mà còn ảnh hưởng tích cực tới sinh trưởng của chồi.
Ở Việt Nam tỏc giả Dương Tấn Nhựt (1998) [27] ủó cụng bố kết quả nghiờn cứu cho thấy việc bổ sung 1g/l than hoạt tính có tác dụng tốt cho sự phát triển bộ rễ và cho tỷ lệ chồi tạo rễ cao của cây hoa loa kèn (Lilium longiflorum). Về cơ chế tác dụng của than hoạt tính thì có nhiều ý kiến khác nhau, có nhiều tỏc giả cho rằng than hoạt tớnh cú khả năng hấp thụ cỏc chất ủộc sản sinh trong môi trường nuôi mô và hấp thụ bớt lượng cytokinin dư thừa không có lợi cho quá trình ra rễ. Kết luận: Bổ sung than hoạt tính tỏ ra thích hợp cho việc tạo rễ cho chồi tái sinh, cú thể sử dụng nồng ủộ 1g/l than hoạt tớnh ủể tạo rễ cho chồi tỏi sinh từ mụ vẩy củ Lilium poilanei Gapnep.
Thiết bị và hoá chất
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………86 Phụ lục.
Quy trình tách chiết DNA tổng số theo quy trình của Nubuo kobayashi ủược cải tiến
* Chú ý: Trong quá trình tách chiết DNA tổng số cây hoa ly bằng qui trỡnh trờn cú thể lặp lại từ bước 2 ủến bước 4, và lặp lai từ bước 7 ủến bước 9, ủể tăng chất lượng của DNA tỏch chiết ủược.
Chu trình nhiệt của phản ứng PCR
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………89 tổng hợp ủược.
Thành phần dinh dưỡng MS (Musahige and Skoog, 1962) Lượng pha cho một lít dung dịch mẹ
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………91. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………92. --- :PAGE 1 anh huong cua BA va NAA den kha nang phat sinh hinh thai cua mo vay cu.
--- :PAGE 2 anh huong cua BA va NAA den kha nang phat sinh hinh thai cua mo vay cu. --- :PAGE 3 anh huong cua BA va NAA den kha nang phat sinh hinh thai cua mo vay cu. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………100 SỐ LIỆU KHÍ TƯỢNG.