NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY

Luận văn thạc sỹ Hóa hữu cơ 2017

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ DIỆU NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ DIỆU NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ TỰ HẢI Đà Nẵng - Năm 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả luận văn VÕ THỊ DIỆU MỤC LỤC Mục lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT danh mục bảng DANH MỤC CÁC hình MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài .1 Mục tiêu nghiên cứu .2 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu Nội dung phương pháp nghiên cứu ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 KHÁI QUÁT VỀ CÂY CHÙM NGÂY .5 1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật .6 1.1.3 Phân bố .7 1.1.4 Trồng trọt 1.2 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY CHÙM NGÂY 1.2.1 Giá trị dinh dưỡng 1.2.2 Giá trị y học 1.3 MỘT SỐ CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÙM NGÂY .10 1.3.1 Vitamin E 10 1.3.2 Axit oleic 10 1.3.3 Axit n-hexadecanoic .11 1.3.4 Stigmasterol 12 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY CHÙM NGÂY 12 1.4.1 Trên giới 12 1.4.2 Tại Việt Nam 15 1.5 KHÁI QUÁT VỀ VI KHUẨN 17 1.5.1 Vi khuẩn Bacillus subtilis 17 1.5.2 Vi khuẩn Escherichia coli 18 CHƯƠNG 21 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Thu gom nguyên liệu 21 2.1.2 Xử lý nguyên liệu 21 2.1.3 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu .22 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .26 2.2.1 Xác định thông số vật lý 26 2.2.2 Phương pháp chiết mẫu thực vật 29 2.2.3 Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 32 2.2.4 Sắc ký, sắc ký khí (GC), sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 36 2.2.5 Phương pháp thăm dò khả kháng vi sinh vật 42 2.3 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM .44 CHƯƠNG 45 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .45 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ VÀ ĐIỀU KIỆN CHIẾT XUẤT 45 3.1.1 Xác định thông số hóa lý nguyên liệu .45 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố thời gian đến trình chiết tách phương pháp chiết soxhlet định danh thành phần hóa học từ dịch chiết .48 3.2 KẾT QUẢ TỔNG HỢP VỀ HIỆU SUẤT CHIẾT VÀ ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC 73 3.2.1 Kết tổng hợp hiệu suất chiết .73 3.2.2 Kết định danh thành phần hóa học 74 3.3 KẾT QUẢ THĂM DÒ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT 77 3.3.1 Dịch chiết chùm ngây 77 3.3.2 Dịch chiết hạt chùm ngây .79 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO .1 Phụ lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AAS : Atomic Absorption Spectrophotometric CFU : Colony Formation Unit : đơn vị hình thành lạc khuẩn DNA : Axit Deoxyribo Nucleic EtOH : Ethanol FAO : Food and Agriculture Organization of the United Nations GC-MS : Gas chromatography–mass spectrometry LDL : low densisty lipoprotein NTU : Nepholometric turbidity units: đơn vị đo độ đục STT : Số Thứ Tự TSA : Tryptone Soya Agar TSB : Tryptone Soya Broth VLDL : very low densisty lipoprotein WHO : World Health Organization DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các dung môi có độ phân cực tăng dần tùy vào số điện môi độ nhớt .23 Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm bột bột hạt chùm ngây .45 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro bột bột hạt chùm ngây 46 Bảng 3.3 Hàm lượng số kim loại nặng mẫu bột tro .47 bột tro hạt chùm ngây 47 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột chùm ngây dung môi n-hexan 49 Bảng 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột hạt chùm ngây dung môi n-hexan 50 Bảng 3.6 Thành phần hóa học dịch chiết bột chùm ngây với 51 Bảng 3.7 Thành phần hóa học dịch chiết bột hạt chùm ngây với 53 dung môi n-hexan 53 Bảng 3.8 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột chùm ngây dung môi diclometan 55 Bảng 3.9 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột hạt chùm ngây dung môi diclometan 56 Bảng 3.10 Thành phần hóa học dịch chiết bột chùm ngây với .58 dung môi diclometan 58 Bảng 3.11 Thành phần hóa học dịch chiết bột hạt chùm ngây với59 dung môi diclometan 59 Bảng 3.12 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột chùm ngây dung môi etyl axetat 61 Bảng 3.13 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột hạt chùm ngây dung môi etyl axetat 62 Bảng 3.14 Thành phần hóa học dịch chiết bột chùm ngây với .64 etyl axetat 64 Bảng 3.15 Thành phần hóa học dịch chiết bột hạt chùm ngây với dung môi etyl axetat 65 Bảng 3.16 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột chùm ngây dung môi ethanol 67 Bảng 3.17 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu suất chiết bột hạt chùm ngây dung môi ethanol 68 Bảng 3.18 Thành phần hóa học dịch chiết bột chùm ngây với dung môi ethanol 69 Bảng 3.19 Thành phần hóa học dịch chiết bột hạt chùm ngây với dung môi ethanol 71 Bảng 3.20 Kết tổng hợp thời gian tối ưu hiệu suất chiết định danh thành phần hóa học 73 Bảng 3.21 Thành phần hóa học dịch chiết bột chùm ngây 74 Bảng 3.22 Thành phần hóa học dịch chiết bột hạt chùm ngây 76 Bảng 3.23 Kết thử hoạt tính kháng vi khuẩn dịch chiết chùm ngây 78 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây chùm ngây Hình 1.2 Lá chùm ngây Hình 1.3 Hoa chùm ngây Hình 1.4 Quả chùm ngây Hình 1.5 Hạt chùm ngây Hình 1.6 Công thức cấu tạo vitamin E 10 Hình 1.7 Công thức cấu tạo axit oleic 11 Hình 1.8 Công thức cấu tạo axit n-hexadecanoic .11 Hình 1.9 Công thức cấu tạo stigmasterol 12 Hình 1.10 Vi khuẩn Bacillus subtilis 17 Hình 1.11 Vi khuẩn Escherichia coli 19 Hình 2.1 Lá chùm ngây Hình 2.2 Hạt chùm ngây 21 Hình 2.3 Lá chùm ngây phơi khô Hình 2.4 Bột chùm ngây .22 Hình 2.5 Nhân hạt chùm ngây Hình 2.6 Bột hạt chùm ngây 22 Hình 2.7 Hệ thống sắc ký khí khối phổ GC-MS 25 Hình 2.8 Tủ sấy Hình 2.9 Lò nung 25 Hình 2.10 Bếp cách thủy Hình 2.11 Máy cô quay chân không 25 Hình 2.12 Bộ chiết soxhlet 30 Hình 2.13 Sơ đồ máy quang phổ hấp thụ nguyên tử .36 Hình 2.14 Sơ đồ thu gọn thiết bị sắc ký khí 39 Hình 2.15 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 44 Hình 3.1 Tro bột chùm ngây Hình 3.2 Tro bột hạt chùm ngây 46 Hình 3.3 Kháng sinh Bacillus subtilis Hình 3.4 Kháng sinh Escherichia coli 78 Hình 3.5 Dịch chiết chùm ngây hoạt tính kháng sinh.79 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Việt Nam nằm vành đai khí hậu nhiệt đới gió mùa, nhiệt độ trung bình năm khác địa phương…Nhờ yếu tố địa hình khí hậu đa dạng, nước ta có thảm thực vật phong phú nguồn cối với giá trị dinh dưỡng, làm thuốc dồi Việc sử dụng loại thuốc thảo dược theo cách cổ truyền hay từ hợp chất nguồn gốc tự nhiên có xu hướng ngày tăng chiếm vị trí quan trọng y học Chế phẩm thảo dược dù có loại dược liệu lại hỗn hợp nhiều hợp chất khác trường hợp hầu hết chưa xác định rõ hoạt chất chất Vì vậy, thuốc sử dụng thảo dược đối tượng nhà khoa học nghiên cứu cách đầy đủ chất hoạt chất có cỏ thiên nhiên Trên sở nhận thức tầm quan trọng công dụng làm thuốc cỏ có nước ta, chọn loài có nhiều giá trị kinh tế, đặc biệt làm thuốc, chùm ngây họ chùm ngây để nghiên cứu Cây chùm ngây có tên khoa học Moringa oleifera Lam, phân bố nhiều quốc gia nhiệt đới cận nhiệt đới, biết đến sử dụng hàng ngàn năm Hi Lạp, Ấn Độ, Ý… Các nghiên cứu giới cho thấy rằng, chùm ngây vừa thực phẩm, vừa dược liệu quý Các phận rễ, hạt, vỏ cây, hoa chùm ngây có hoạt tính kích thích hoạt động tim hệ thần kinh, chống u bướu, chống oxi hóa, bảo vệ gan, chống nám Dầu chùm ngây giàu vitamin A, C chất béo không bão hòa, có đặc tính khử trùng chống viêm, giúp chữa lành vết thương da vết cắt, vết bầm tím, bỏng, vết côn trùng cắn Lá chùm ngây hai tổ chức giới WHO FAO dùng giải pháp ưu việt cho PHỤ LỤC 37: PHỔ M/Z HỢP CHẤT TRIACONTANE, 11,20-DIECYL- PHỤ LỤC 38: PHỔ M/Z HỢP CHẤT HENEICOSANE PHỤ LỤC 39: PHỔ M/Z HỢP CHẤT TETRACOSANE PHỤ LỤC 40: PHỔ M/Z HỢP CHẤT OCTADECANE PHỤ LỤC 41: PHỔ M/Z HỢP CHẤT NONADECANE PHỤ LỤC 42: PHỔ M/Z HỢP CHẤT OXIRANE, TETRADECYL- PHỤ LỤC 43: PHỔ M/Z HỢP CHẤT VITAMIN E PHỤ LỤC 44: SẮC KÍ ĐỒ CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI N-HEXAN PHỤ LỤC 45: THỜI GIAN LƯU CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI N-HEXAN PHỤ LỤC 46: SẮC KÍ ĐỒ CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI DICLOMETAN PHỤ LỤC 47: THỜI GIAN LƯU CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI DICLOMETAN PHỤ LỤC 48: SẮC KÍ ĐỒ CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI ETYL AXETAT PHỤ LỤC 49: THỜI GIAN LƯU CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI ETYL AXETAT PHỤ LỤC 50: SẮC KÍ ĐỒ CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI ETHANOL PHỤ LỤC 51: THỜI GIAN LƯU CÁC CHẤT TRONG DỊCH CHIẾT HẠT CHÙM NGÂY VỚI DUNG MÔI ETHANOL