NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY

Luận văn thạc sỹ Hóa hữu cơ 2017

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG

VÕ THỊ DIỆU

NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH

THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Đà Nẵng - Năm 2016

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG

VÕ THỊ DIỆU

NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH

THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA LÁ VÀ HẠT CÂY CHÙM NGÂY

Chuyên ngành: Hóa hữu cơ

Mã số: 60 44 01 14

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ TỰ HẢI

Đà Nẵng - Năm 2016

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi.

Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công

bố trong bất kỳ một công trình nào khác.

Tác giả luận văn

VÕ THỊ DIỆU

MỞ ĐẦU 1

1 Lí do chọn đề tài 1

2 Mục tiêu nghiên cứu 2

3 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 2

4 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 3

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 3

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 5

1.1 KHÁI QUÁT VỀ CÂY CHÙM NGÂY 5

1.1.1 Phân loại khoa học 5

1.1.2 Đặc điểm thực vật 6

1.1.3 Phân bố 7

1.1.4 Trồng trọt 7

1.2 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY CHÙM NGÂY 7

1.2.1 Giá trị dinh dưỡng 7

1.2.2 Giá trị về y học 8

1.3 MỘT SỐ CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÙM NGÂY 10

1.3.1 Vitamin E 10

1.3.2 Axit oleic 10

1.3.3 Axit n-hexadecanoic 11

1.3.4 Stigmasterol 12

1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY CHÙM NGÂY 12

1.4.1 Trên thế giới 12

1.4.2 Tại Việt Nam 15

1.5 KHÁI QUÁT VỀ VI KHUẨN 17

1.5.1 Vi khuẩn Bacillus subtilis 17

CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21

2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 21

2.1.1 Thu gom nguyên liệu 21

2.1.2 Xử lý nguyên liệu 21

2.1.3 Hóa chất, dụng cụ và thiết bị nghiên cứu 22

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26

2.2.1 Xác định các thông số vật lý 26

2.2.2 Phương pháp chiết mẫu thực vật 29

2.2.3 Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 32

2.2.4 Sắc ký, sắc ký khí (GC), sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 36

2.2.5 Phương pháp thăm dò khả năng kháng vi sinh vật 42

2.3 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 44

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45

3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ VÀ ĐIỀU KIỆN CHIẾT XUẤT 45

3.1.1 Xác định các thông số hóa lý của nguyên liệu 45

3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố thời gian đến quá trình chiết tách bằng phương pháp chiết soxhlet và định danh thành phần hóa học từ các dịch chiết 48

3.2 KẾT QUẢ TỔNG HỢP VỀ HIỆU SUẤT CHIẾT VÀ ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC 73

3.2.1 Kết quả tổng hợp về hiệu suất chiết 73

3.2.2 Kết quả định danh thành phần hóa học 74

3.3 KẾT QUẢ THĂM DÒ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT 78

3.3.1 Dịch chiết lá chùm ngây 78

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI (bản sao)

PHỤ LỤC

AAS : Atomic Absorption Spectrophotometric

CFU : Colony Formation Unit : đơn vị hình thành lạc khuẩn DNA : Axit Deoxyribo Nucleic

EtOH : Ethanol

FAO : Food and Agriculture Organization of the United Nations

GC-MS : Gas chromatography–mass spectrometry

LDL : low densisty lipoprotein

NTU : Nepholometric turbidity units: đơn vị đo độ đục

STT : Số Thứ Tự

TSA : Tryptone Soya Agar

TSB : Tryptone Soya Broth

VLDL : very low densisty lipoprotein

WHO : World Health Organization

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột lá chùm ngây đối với dung môi

n-hexan

49

3.5.

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột hạt chùm ngây đối với dung môi

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột lá chùm ngây đối với dung môi

diclometan

55

3.9.

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột hạt chùm ngây đối với dung môi

diclometan

56

3.10. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột lá chùm ngây

3.11. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột hạt chùm ngây

3.12 Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột lá chùm ngây đối với dung môi etyl

61

3.13.

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột hạt chùm ngây đối với dung môi etyl

axetat

62

3.14. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột lá chùm ngây

3.15. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột hạt chùm ngây

3.16.

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột lá chùm ngây đối với dung môi

ethanol

67

3.17.

Kết quả khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến hiệu

suất chiết của bột hạt chùm ngây đối với dung môi

ethanol

68

3.18. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột lá chùm ngây

3.19. Thành phần hóa học trong dịch chiết bột hạt chùm ngây

3.20. Kết quả tổng hợp về thời gian tối ưu hiệu suất chiết và

3.21 Thành phần hóa học trong dịch chiết bột lá chùm ngây 75 3.22 Thành phần hóa học trong dịch chiết bột hạt chùm ngây 76 3.23. Kết quả thử hoạt tính kháng vi khuẩn đối với dịch chiết

1.8 Công thức cấu tạo của axit n-hexadecanoic 111.9 Công thức cấu tạo của stigmasterol 12

3.5 Dịch chiết lá chùm ngây không thể hiện hoạt tính

MỞ ĐẦU

1 Lí do chọn đề tài

Việt Nam nằm ở vành đai khí hậu nhiệt đới gió mùa, nhiệt độ trung bìnhnăm khác nhau giữa các địa phương…Nhờ yếu tố về địa hình và khí hậu đadạng, nước ta có thảm thực vật phong phú và nguồn cây cối với giá trị dinhdưỡng, làm thuốc dồi dào

Việc sử dụng các loại thuốc thảo dược theo cách cổ truyền hay từ cáchợp chất nguồn gốc tự nhiên có xu hướng ngày càng tăng đã chiếm một vị tríquan trọng trong nền y học Chế phẩm thảo dược dù chỉ có một loại dược liệunhưng lại là hỗn hợp của nhiều hợp chất khác nhau và trong mọi trường hợphầu hết đều chưa xác định rõ hoạt chất của từng chất Vì vậy, những bài thuốc

sử dụng thảo dược là đối tượng để cho các nhà khoa học nghiên cứu một cáchđầy đủ về bản chất các hoạt chất có trong cây cỏ thiên nhiên

Trên cơ sở nhận thức tầm quan trọng về công dụng làm thuốc của cáccây cỏ hiện có ở nước ta, tôi chọn một loài cây có nhiều giá trị kinh tế, đặcbiệt làm thuốc, là cây chùm ngây trong họ chùm ngây để nghiên cứu

Cây chùm ngây có tên khoa học là Moringa oleifera Lam, phân bố tạinhiều quốc gia nhiệt đới và cận nhiệt đới, được biết đến và sử dụng hàng ngànnăm nay ở Hi Lạp, Ấn Độ, Ý… Các nghiên cứu trên thế giới cho thấy rằng,chùm ngây vừa là một thực phẩm, vừa là một dược liệu quý Các bộ phận như

rễ, hạt, vỏ cây, quả và hoa của cây chùm ngây có hoạt tính kích thích sự hoạtđộng của tim và hệ thần kinh, chống u bướu, chống oxi hóa, bảo vệ gan,chống nám Dầu chùm ngây giàu vitamin A, C và các chất béo không bãohòa, có đặc tính khử trùng và chống viêm, giúp chữa lành các vết thươngngoài da như vết cắt, vết bầm tím, bỏng, vết côn trùng cắn Lá chùm ngâyđược hai tổ chức thế giới WHO và FAO dùng như một giải pháp ưu việt cho

các bà mẹ thiếu sữa và trẻ em suy dinh dưỡng, và là giải pháp lương thực chothế giới thứ ba Hiện nay có khoảng 80 quốc gia trên thế giới trồng chùmngây làm rau ăn

Ở Việt Nam, trước đây, cây chùm ngây được biết đến như một vị thuốcnam dùng để điều trị một số bệnh thông thường trong dân gian Thế nhưnggần đây, nhờ phát hiện của y học, hoa, quả và đặc biệt là lá cây chùm ngâycòn là món ăn bổ dưỡng cho cơ thể nên nhiều địa phương đã bắt đầu trồng,kinh doanh loại rau này

Với những tính năng đa dạng và phong phú như thế, nghiên cứu chiếttách, xác định thành phần hóa học, ứng dụng các phương pháp hiện đại để xácđịnh cấu trúc và nghiên cứu hoạt tính sinh học của một số hợp chất có trongcây chùm ngây ở Việt Nam là một hướng nghiên cứu có nhiều triển vọng, có

ý nghĩa khoa học và thực tiễn Vì vậy tôi chọn đề tài: “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học trong một số dịch chiết của lá và hạt cây chùm ngây ” làm đề tài luận văn tốt nghiệp của mình.

2 Mục tiêu nghiên cứu

- Tìm các điều kiện thích hợp chiết tách các chất trong lá và hạt chùm ngây

- Định danh, xác định thành phần hóa học dịch chiết từ lá và hạt chùmngây

- Thăm dò hoạt tính kháng sinh của một số dịch chiết từ lá và hạt chùmngây

3 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu

- Lá, hạt chùm ngây được thu hái tại xã Tam Đàn, huyện Phú Ninh, tỉnhQuảng Nam

- Phạm vi nghiên cứu: Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết

- Xác định thành phần một số hợp chất trong dịch chiết từ lá và hạt chùmngây

- Quá trình thí nghiệm được tiến hành tại phòng thí nghiệm hóa học,phòng thí nghiệm vi sinh, trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng.

4 Nội dung và phương pháp nghiên cứu

4.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết

- Thu thập, tổng hợp tài liệu, tư liệu về nguồn nguyên liệu, phương phápnghiên cứu các hợp chất tự nhiên, thành phần hóa học và ứng dụng của câychùm ngây

- Tổng hợp tài liệu về phương pháp lấy mẫu, chiết tách và xác định thànhphần hóa học các chất từ thực vật

- Tổng hợp tài liệu về đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hóa học vàứng dụng của cây chùm ngây

4.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm

- Phương pháp lấy và xử lí mẫu

- Phương pháp trọng lượng xác định độ ẩm

- Phương pháp tro hóa mẫu xác định hàm lượng hữu cơ

- Phương pháp AAS xác định hàm lượng các kim loại nặng

- Phương pháp chiết: Chiết soxhlet bằng các dung môi: n-hexan,diclometan, etyl axetat, ethanol

- Phương pháp xác định thành phần hóa học, định danh, xác định cấutrúc các cấu tử chính bằng phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS)

- Phương pháp sinh học thăm dò hoạt tính kháng sinh của một số dịchchiết

5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

Những kết quả nghiên cứu sẽ góp phần cung cấp các thông tin có ý nghĩakhoa học về thành phần hoá học và hoạt tính sinh học các chất chiết tách từ lá

và hạt cây chùm ngây, qua đó góp phần nâng cao giá trị ứng dụng của câychùm ngây trong ngành dược liệu

CHƯƠNG 1TỔNG QUAN

1.1 KHÁI QUÁT VỀ CÂY CHÙM NGÂY

1.1.1 Phân loại khoa học

Chùm ngây hay còn gọi là chùm ngây cải ngựa, cây dùi trống, câu dầu bel

có tên khoa học là Moringa oleifera Lam, nằm trong hệ thống phân loại sau:Giới Thực vật (Kingdom) : Plantae

Ngành Ngọc lan (Division) : Magnoliophyta

Lớp Ngọc Lan (Class) : Magnoliopsida

Họ Chùm ngây (Familia) : Moringaceae

Chi Chùm ngây (Genus) : Moringa

Loài (Species) : Moringa oleifera Lam

Hình 1.1 Cây chùm ngây

Chi chùm ngây (Moringa) là chi duy nhất trong họ chùm ngây(Moringacese) Chi này có 13 loài, tất cả trong số chúng là các cây thân gỗ sinhsống trong khu vực nhiệt đới và cận nhiệt đới Loài phổ biến nhất là chùm ngâyMoringa oleifera Lam Loài cây này được trồng nhiều nơi trong khu vực nhiệtđới, và loài duy nhất của chi Moringa có mặt tại Việt Nam [1],[2]

1.1.2 Đặc điểm thực vật

Hình dáng: Chùm ngây là cây thân mộc cao cỡ trung bình, ở độ tuổi

trưởng thành cây có thể cao hàng chục mét Cây 1 năm tuổi nếu không cắtngọn cây có thể cao tới 5-6 m và có đường kính 10 cm, 3-4 năm tuổi là cây ở

độ tuổi trưởng thành Thân cây óng chuốt, không có gai [4],[5],[10]

Lá: Lá kép lông chim dài 30–60 cm, màu xanh mốc; lá chét dài

12-20 mm hình trứng, mọc đối có 6-9 đôi, lá kèm bao lấy chồi

Hoa: Cây trổ hoa vào các tháng 1–2 Hoa trắng kem, có cuống, vểnh lên,

hình dạng giống hoa đậu, rộng khoảng 2.5 cm, mọc thành chùm ở nách lá, cólông tơ, nhiều mật Bộ nhị gồm 5 nhị thụ xen với 5 nhị lép Bầu noãn mộtbuồng do 3 lá noãn, đính phôi trắc mô [4],[5]

Hình 1.2 Lá chùm ngây Hình 1.3 Hoa chùm ngây

Quả: Quả dạng nang treo, dài 25–40 cm, ngang 2 cm, có 3 cạnh, chỗ có

hạt hơi gồ lên, dọc theo quả có khía rãnh

Hạt: Hạt chùm ngây màu đen, tròn có 3 cạnh, tròn dẹp, to khoảng 1 cm.

Hình 1.4 Quả chùm ngây Hình 1.5 Hạt chùm ngây

1.1.3 Phân bố

Cây chùm ngây có nguồn gốc ở vùng phụ cận dãy Himalaya, tây bắc Ấn

Độ, có lịch sử phát hiện và sử dụng hơn 4000 năm, nhưng ngày nay đượctrồng rộng rãi ở Châu Phi, Trung Mỹ, Nam Mỹ, Đông Nam Á…

Ở Việt Nam, chùm ngây là loài duy nhất của chi chùm ngây được pháthiện mọc hoang từ lâu đời tại nhiều nơi như Thanh Hóa, Ninh Thuận, BìnhThuận, vùng Bảy Núi ở An Giang, đảo Phú Quốc Tuy vậy, trước đây cây ítđược chú ý, có nơi trồng chỉ để làm hàng rào, và chỉ trong vài chục năm trởlại đây cây được trồng có chủ định và có nhiều nghiên cứu liên quan

1.1.4 Trồng trọt

Chùm ngây là loài cây nhiệt đới và cận nhiệt đới, thích hợp với đất cátkhô và có khả năng chịu hạn hán Theo một số báo cáo thì chi chùm ngâychịu được nhiệt độ từ 18.7 – 28.5oC và pH khoảng 4.5 – 8

Cây chùm ngây rất dễ trồng, có thể trồng từ hạt, hom cành và trồng đượcquanh năm Cây được trồng nhiều ở những vùng đất khô hạn khắcnghiệt nhiệt đới hoặc bán nhiệt đới Cây chuộng đất ráo nước, nhiều cát, dù làđất xấu cũng dễ mọc, chịu được hạn hán, ưa nắng, hầu như không bị sâu bệnhhại, do đó chăm sóc cây không cần điều kiện gì đặc biệt về phân bón và nướctưới Tuy nhiên cây không chịu được úng ngập và dễ chết nếu không đượcthoát nước tốt

Gỗ chùm ngây khá mềm, giòn nên thân cành dễ bị gãy trong mưa bão

Do đó nếu trồng cây để khai thác sử dụng người trồng thường cắt ngọn câykhi đạt độ cao nhất định, vừa tiện thu hái; vừa kích thích cây đâm tược, nảycành theo cấp số nhân như tán dù; vừa hạn chế thiệt hại do gãy đổ

1.2 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY CHÙM NGÂY

1.2.1 Giá trị dinh dưỡng

Các bộ phận của cây chứa nhiều khoáng chất quan trọng, giàu chất đạm,

vitamin, beta-caroten, axit amin và nhiều hợp chất phenol Cây chùm ngâycung cấp một hỗn hợp gồm nhiều hợp chất quý hiếm như zeatin, quercetin,alpha-sitosterol, axit caffeoylquinic và kaempferol Một số nguồn nghiên cứucho biết chùm ngây chứa hơn 90 chất dinh dưỡng tổng hợp bao gồm 7 loạivitamin, 6 loại khoáng chất, 18 loại axit amin, 46 chất chống oxi hóa, liềulượng lớn các chất chống viêm nhiễm, các chất kháng sinh, kháng độc tố, cácchất giúp ngăn ngừa và điều trị ung thư, u xơ tiền liệt tuyến, giúp ổn địnhhuyết áp, hạ cholesterol, bảo vệ gan.

Lá chùm ngây còn chứa nhiều dưỡng chất hơn cả quả và hoa, tính theotrọng lượng, trong đó vitamin C hơn cam 7 lần, vitamin A hơn cà rốt 4 lần,canxi gấp 4 lần sữa, sắt gấp 3 lần cải bó xôi, đạm nhiều gấp đôi sữa chua vàkali gấp 3 lần trái chuối [13]

Trong ẩm thực, lá non và thậm chí cả lá già của chùm ngây được sửdụng để nấu canh với thịt, tôm, nấm hoặc nấu suông, trộn salad, ăn sống, xàothịt, trứng, xay nhuyễn thành nước sinh tố Lá chùm ngây phơi khô tán bột cóthể để rất lâu mà không mất dinh dưỡng, sử dụng cho nhiều món ăn như cháo,bột trẻ em, nhào bột bánh, pha nước uống Trái non được dùng xào, nấu canh,hầm xương, ninh súp như đậu cô ve và cho hương vị gần tương tự măng tây.Khi già, hạt chùm ngây có thể rang ăn như đậu phộng Rễ non của cây ănsống hoặc làm gia vị như cải ngựa (mù tạt)

1.2.2 Giá trị về y học

Rễ chùm ngây

Rễ có vị đắng, được xem như một loại thuốc bổ cho cơ thể và phổi, điềukinh, long đàm, lợi tiểu nhẹ Dịch rễ được dùng ngoài để điều trị chứng mẫnngứa do dị ứng Trong rễ và hạt cũng có chất kháng sinh pterygospermin.Pakistan dùng vỏ rễ sắc lấy nước trị đau răng, đau tai Hay rễ tươi củacây non dùng trị nóng sốt, phong thấp, gout, sung gan và lá lách [15],[19]

Vỏ thân chùm ngây

Vỏ cây được dùng điều trị chứng thiếu vitamin C, đôi khi dùng trị tiêuchảy

Ở Ấn Độ, người ta hay dùng vỏ thân chùm ngây để trị nóng sốt, đau bao

tử, đau bụng khi có kinh, sâu răng, làm thuốc thoa trị hói tóc, chữa đau cổ họng(dùng chung với hoa của cây nghệ, hạt tiêu đen), trị tiểu ra máu, trị thổ tả.Nhựa cây có công dụng giảm đau, chống sưng tấy

để đắp bên ngoài mắt trị sưng mắt đỏ [12]

Bột làm từ lá tươi có khả năng cung cấp năng lượng cho cơ thể Lá cũngđược dùng chữa sốt, viêm phế quản, viêm nhiễm mắt và tai, viêm màng cơ,diệt giun sán và làm thuốc tẩy xổ Sản phụ ăn lá sẽ làm tăng tiết sữa Lá đượcchỉ định dùng chống thiếu máu, do chứa lượng sắt cao [19]

Hoa chùm ngây

Hoa chùm ngây có giá trị y học cao như một chất kích thích, kích dục,tác nhân gây sẩy thai, thông mật, dùng để chữa viêm, những bệnh về cơ, hộichứng rối loạn phân ly, khối u, sự phình to của lách Làm giảm cholesterolhuyết thanh, phospholipid, trigliceride trong máu, tỉ lệ VLDL, LDLcholesterol thành phospholipid và làm giảm chỉ số xơ vữa động mạch, giảmthành phần lipid ở gan, tim và động mạch chủ trong bệnh cao cholesterol máu

ở thỏ và giảm sự thải ra các cặn cholesterol [18]

Quả, hạt chùm ngây

Quả dùng trị bệnh đau gan và tỳ, đau khớp, uốn ván.

Hạt điều trị viêm dạ dày Dầu hạt được dùng để điều trị nấm da Nhiềunơi trên thế giới dùng bột nghiền từ hạt để khử trùng, làm trong nước [18]

1.3 MỘT SỐ CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÙM NGÂY

1.3.1 Vitamin E

Vitamin E là tên gọi chung để chỉ hai lớp các phân tử (bao gồm các

cản trở phản ứng xấu của các gốc tự do trên các tế bào của cơ thể

O HO

Hình 1.6 Công thức cấu tạo của vitamin E

và ngăn sự sản sinh các hợp chất gây viêm trong cơ thể.

- Axit oleic còn góp phần ngăn chặn các tế bào bạch cầu thâm nhập vàothành mạch máu (nguyên nhân chính dẫn đến quá trình hoạt hóa màng trong

H H

Hình 1.9 Công thức cấu tạo của stigmasterol

Vai trò:

- Stigmasterol được xem như một chất trung gian trong quá trình tổnghợp các nội tiết tố androgen, estrogen và corticoid Nó cũng được sử dụngnhư là tiền thân của vitamin D3

- Stigmasterol có tác dụng hạ đường huyết, phòng trị ung thư, bao gồm

cả ung thư buồng trứng, ung thư tuyến tiền liệt, ung thư vú và ung thư ruộtkết Stigmasterol đã được chứng minh rằng có thể ức chế sự suy thoái viêmxương khớp do thoái hóa sụn và là chất chống oxi hóa mạnh [7]

1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY CHÙM NGÂY

1.4.1 Trên thế giới

Chùm ngây được xem là một cây đa dụng, rất hữu ích tại những quốc gianghèo, vì vậy nó được nghiên cứu rất nhiều về trồng trọt, thu hái, cũng nhưnghiên cứu về các hoạt tính y dược, giá trị dinh dưỡng… đa số các nghiên cứuđược thực hiện ở Ấn Độ, Philippines và Châu Phi Theo nghiên cứu tại Đạihọc Nông nghiệp Falsalabad – Pakistan: Moringa oleifera vừa là nguồn dượcliệu vừa là nguồn thực phẩm rất tốt Các bộ phân của cây chứa nhiều khoáng

chất quan trọng và là nguồn gốc cung cấp chất đạm, vitamin, beta-caroten,axit amin và nhiều hợp chất phenol…

Nghiên cứu tại Institute of Bioagricultural Sciences, Academica, ĐàiBắc: dịch chiết từ lá và hạt chùm ngây có các hoạt tính diệt nấm gây bệnh loạiTrichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophyltes…, dầu trích từ lá chùmngây có đến 44 hóa chất

* Nghiên cứu về chống tăng huyết áp, lợi tiểu và giảm cholesterol

Các hợp chất trong cây chùm ngây rất có giá trị trong việc điều trị timmạch vì chúng có khả năng trị bệnh tăng huyết áp và giảm mỡ trong máu,ngoài ra còn có tác dụng lợi tiểu Dịch chiết từ lá chùm ngây có tác dụng ổnđịnh áp suất trong máu (Tạp chí sức khỏe Ấn Độ, 1962; Dahot, 1988) Cáchợp chất nitrile, glycoside thiocarbamate được phân lập từ lá chùm ngây cótác dụng hạ huyết áp (Faizi và cộng sự, 1995) và hầu hết các hợp chất này rấthiếm trong tự nhiên Một nghiên cứu khác các phân đoạn trên cao EtOH củaquả chùm ngây, trích ly được các glycoside thiocarbamate và isothiocyanate

có tác dụng hạ huyết áp (Faizi và cộng sự, 1995) [14]

* Nghiên cứu về chống co thắt, chống loét và bảo vệ gan

Gilani cùng cộng sự (1992, 1994) công bố lá chùm ngây có nhiều tácdụng dược lý, hợp chất 4-[α-(L-rhamnosyloxy) benzyl]-O-methylthiocyanatetrích từ dịch chiết EtOH còn là thành phần trong thuốc chống co thắt vớinguyên nhân tắc nghẽn là các hạt sỏi của các hợp chất canxi Pal và cộng sự(1995) công bố cao EtOH của lá chùm ngây có tác dụng chống lở loét và cóchức năng bảo vệ gan trên chuột, dịch chiết nước lá chùm ngây cũng có khảnăng chống lở loét Ruckmani và cộng sự (1998) cũng nghiên cứu cho thấy rễchùm ngây có chức năng bảo vệ gan Ngoài ra, dịch chiết EtOH trong nướccủa hoa chùm ngây cũng có tác dụng trị các bệnh lý về gan do chúng có chứaQuercetin, một flavonoid có hoạt tính sinh học mạnh [14]

* Nghiên cứu về trị khối u và chống ung thư

Makonnen cùng cộng sự (1997) đã công bố lá chùm ngây chứa nhiềuthành phần có khả năng trị khối u Đó là các hợp chất O-ethyl-4-(α-L-rhamnosyloxy)benzyl carbamate, 4-(α-L-rhamnosyloxy)benzylisothiocyanate,Niazimicin, 3-O-(6'-O-oleoyl-β-D-glucopyranosyl)-β-sitosterol đã được thửnghiệm in vitro cho kết quả là chúng có khả năng ức chế đáng kể virut khángnguyên sớm Epstein Barr Song song đó, Guevara cùng cộng sự (1999) cũng

đã đề xuất Niazimicin là một chất có khả năng phòng ngừa ung thư hiệu quả.Bharali cùng cộng sự (2003) đã nghiên cứu dịch chiết hạt chùm ngây cho thấykhả năng chuyển hóa enzyme chống ung thư gan, chống oxi hóa và chống ungthư da ở chuột [14]

S Sreelatha & P R Padma đã thử nghiệm hoạt tính chống oxi hóa và xácđịnh tổng hàm lượng poliphenol và tổng hàm lượng flavonoid từ dịch chiếtnước của lá cây chùm ngây Hàm lượng poliphenol trong lá già và lá non tươngứng là 45.81 mg/g và 36.02 mg/g trong dịch chiết nước và hàm lượngflavonoid tổng trong lá già và lá non tương ứng là 27 mg/g, 15 mg/g [20] Kawo, A.H cùng cộng sự xác định hạt chùm ngây chứa 18.63% protein,322.9 mg/100 g tanin, 8.24 mg/100 g alkaloid, 9.13% saponin [16]

* Nghiên cứu về khả năng lọc nước

Nghiên cứu tại đại học Jiwaji, Gwalior (Ấn Độ) cho thấy rằng: Hạt chùmngây có chứa một hợp chất “đa điện giải” (polyetronlytes) tự nhiên có thểdùng làm chất kết tủa để làm trong nước Kết quả lọc nước: Nước đục (độ đục15-25 NTU, chứa các vi khuẩn tạp 280-500 cfu ml-1) dùng hạt chùm ngây làmchất tạo trầm lắng và kết tụ, đưa đến kết quả rất tốt (độ đục còn 0.3-1.5 NTU,

vi khuẩn tạp còn 5 - 20 cfu ml-1) Phương pháp lọc này rất hữu dụng tại cácvùng nông thôn của các nước nghèo và được áp dụng rộng rãi tại Ấn Độ

1.4.2 Tại Việt Nam

Trong những năm gần đây, tại Việt Nam bắt đầu có những nghiên cứutập trung vào đối tượng chùm ngây, chủ yếu là các nghiên cứu về thành phầnhóa học và hoạt tính sinh học, tác dụng dược lý, nhằm có những biện phápnghiên cứu, chế biến và sử dụng hiệu quả đối tượng này Trong số đó, một sốcông trình nghiên cứu nổi bật đã được công bố:

Đại học Y dược TP.HCM, 2011, cũng đã có công trình nghiên cứu về tácdụng chống oxi hóa và bảo vệ gan của các dạng cao chiết từ lá cây chùmngây Kết quả cho thấy, cao lá chùm ngây trồng tại Việt Nam có khả năngchống oxi hóa và bảo vệ gan

Trung tâm Sâm và dược liệu TP HCM, 2010 đã khảo sát được trong láchùm ngây có những hợp chất là chất béo, tinh dầu, carotenoid, flavonoid,tannin, axit hữu cơ

Lương y Nguyễn Công Đức - giảng viên khoa Y học cổ truyền (ĐH YDược, TP.HCM), cho biết: Chùm ngây được dùng chữa các bệnh như: trị u xơtiền liệt tuyến - bằng cách, dùng 100 gam rễ chùm ngây tươi và 80 gam látrinh nữ hoàng cung tươi (hoặc dùng rễ chùm ngây khô 30 gam và lá trinh nữhoàng cung khô 20 gam) Đem nấu với 2 lít nước, nấu còn lại nửa lít thuốc,uống ấm 3 lần trong ngày; trị suy nhược cơ thể, suy nhược thần kinh, giúp ổnđịnh huyết áp, ổn định đường huyết, bảo vệ gan - bằng cách, mỗi ngày dùng

150 gam lá chùm ngây non rửa sạch, giã nát, thêm 300 ml nước sạch vắt lấynước cốt (hoặc dùng máy xay sinh tố), thêm 2 muỗng canh mật ong trộn đều,chia uống 3 lần dùng trong ngày; trị tăng cholesterol, tăng lipid máu, tăngtriglyxerid, hoặc làm giảm axit uric, ngăn ngừa sỏi oxalate - bằng cách, mỗingày dùng 100 gam rễ chùm ngây tươi (hoặc 30 gam khô) rửa sạch, nấu với 1lít nước, nấu sôi 15 phút, để uống cả ngày Ngoài ra, chùm ngây còn có côngdụng ngừa thai, đây là loại cây được đồng bào người Raglay dùng làm thuốc

ngừa thai - cứ 5 ngày thì dùng 2 nắm rễ cây chùm ngây còn tươi (150 gam)rửa sạch băm nhỏ nấu với 2 lít nước, nấu còn nửa lít thuốc, chia uống 2 lầntrong ngày Phụ nữ Raglay trong tuổi sinh đẻ nếu uống nước sắc rễ chùmngây thì sẽ không có thai Tuy nhiên, cần lưu ý, phụ nữ đang có thai thì khôngđược dùng cây chùm ngây.

Nghiên cứu tại Đại học Kỹ thuật công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh chothấy hạt cây chùm ngây trồng và thu hái ở Việt Nam có khả năng làm giảmtrên 80% độ đục của nước nhân tạo, ngay cả khi độ đục ban đầu chỉ là 50NTU Trong giới hạn khảo sát, nước càng đục thì hiệu quả giảm độ đục củahạt chùm ngây càng cao ở cùng một ngưỡng nồng độ hạt chùm ngây, và nồng

độ tối ưu cần sử dụng của dịch chiết chùm ngây gần như tuyến tính với độđục ban đầu của nước cần xử lý Khi sử dụng hạt chùm ngây để thực hiện quátrình keo tụ với nước sông, hiệu quả giảm độ đục đạt được khoảng 50% đốivới nước đục trung bình (44 NTU) nhưng lên tới 76% với nước đục nhiều(170 NTU) [11]

Trước đây khi chưa có sự xuất hiện của y học hiện đại, các phương thuốc

và cách thức điều trị bệnh hoàn toàn xuất phát từ thảo dược Người ta ướctính trên thế giới khoảng 80% dân số sống ở các vùng nông thôn vẫn đang sửdụng đa dạng các nguồn thực vật để chữa bệnh trong đó có cây chùm ngây.Ngày nay, có nhiều công trình nghiên cứu về thành phần cũng như tácdụng của cây chùm ngây trên thế giới đối với sức khỏe con người Qua cáccông trình nghiên cứu chúng ta càng thấy rõ hơn giá trị của loài cây này, từ đó

mở ra khả năng khai thác hiệu quả loài cây này trong y học hiện đại để bàochế các dạng thuốc chữa bệnh hoặc thực phẩm chức năng có lợi cho sức khỏecon người

1.5 KHÁI QUÁT VỀ VI KHUẨN

1.5.1 Vi khuẩn Bacillus subtilis

Bacillus subtilis (B.subtilis) được Ferdinand Cohn mô tả và đặt tên năm

1872 Về cơ bản theo phân loại, Bacillus subtilis thuộc:

ở dạng này Đất nghèo dinh dưỡng, đất hoang thì Bacillus subtilis rất hiếm.Nước, bùn ở cửa sông cũng như nước biển có sự tồn tại của bào tử cũng như

tế bào sinh dưỡng Bacillus subtilis [9]

b Đặc điểm hình thái

Bacillus subtilis là trực khuẩn nhỏ, hai đầu tròn, bắt màu tím Gramdương, kích thước 0.5-0.8 µm x 1.5-3 µm, đứng đơn lẻ hay tạo thành chuỗingắn Vi khuẩn có khả năng di động, có 8-12 tiêm mao, sinh bào tử hình bầudục nhỏ hơn tế bào vi khuẩn và nằm giữa tế bào

Bào tử Bacillus subtilis phát triển bằng cách nảy chồi do sự nứt của vỏ,không kháng axit, có tính chịu nhiệt, chịu ẩm, tia tử ngoại, phóng xạ [9]

Hình 1.10 Vi khuẩn Bacillus subtilis

c Đặc điểm nuôi cấy

Bacillus subtilis là vi khuẩn hiếu khí nhưng có khả năng phát triển trongmôi trường thiếu oxi, nhiệt độ tối ưu 37oC Bacillus subtilis thích hợp nhất với

pH từ 6.8 – 7.4

Môi trường thạch đĩa TSA: khuẩn lạc có dạng hình tròn, rìa răng cưakhông đều, có tâm sẩm màu, phát triển chậm, màu vàng xám, đường kính 3-5mm Sau 1-4 ngày bề mặt nhăn nheo màu hơi sẩm

Môi trường thạch nghiêng TSA: dễ mọc, tạo thành màu xám, rìa gợnsóng

Môi trường canh TSB: Bacillus subtilis phát triển làm đục môi trường,tạo màng nhăn, lắng cặn kết lại như vần mây ở đáy, khó tan khi lắc đều lên

d Vai trò của vi khuẩn Bacillus subtilis

Bacillus subtilis tồn tại khắp nơi trong tự nhiên Tính dễ sống, dễ tồn tạicũng là lợi thế sử dụng Bacillus subtilis sản xuất chế phẩm sinh học Trongquá trình hình thành bào tử, Bacillus subtilis thường sản sinh những chất cóhoạt tính sinh học, ứng dụng trong nhiều lĩnh vực Verschuers (2000) đãnghiên cứu và công bố vi khuẩn Bacillus subtilis đóng vai trò quan trọngtrong việc cải thiện chất lượng nước do vi khuẩn này đạt hiệu quả cao trongviệc chuyển đổi vật chất hữu cơ thành CO2 Do vậy, Bacillus subtilis làmgiảm tích lũy chất hữu cơ và các chất hòa tan (Phạm Thị Tuyết Ngân, 2007)

Vi khuẩn Bacillus subtilis dùng để làm sạch môi trường nhờ khả năng sinhcác enzyme (proteaza, amylaza, xenlulaza) phân huỷ các hợp chất hữu cơ vàkiểm soát sự phát triển quá mức của vi sinh vật gây bệnh do cơ chế cạnh tranhdinh dưỡng, giữ môi trường luôn ở trạng thái cân bằng sinh học [9]

1.5.2 Vi khuẩn Escherichia coli

Escherichia coli (E.coli) được tìm thấy bởi bác sĩ nhi khoa TheodorEscherich qua những thí nghiệm lâm sàng về bệnh tiêu chảy năm 1885

Escherichia coli thuộc phân loại khoa học sau:

để nhuộm, có thể thấy giáp mô, nhưng khi soi tươi thường không nhìn thấyđược [9]

b Đặc điểm nuôi cấy

Vi khuẩn E.coli là trực khuẩn hiếu khí và yếm khí tùy tiện, có thể sinhtrưởng ở phổ nhiệt độ khá rộng (từ 5 - 40oC), nhiệt độ thích hợp nhất là 37oC

và phổ pH rộng từ 5.5 - 8.0

Vi khuẩn E.coli phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy thôngthường Khi nuôi cấy trên các môi trường, để trong tủ ẩm ở 37oC và sau 24giờ vi khuẩn sẽ phát triển:

Môi trường thạch thường: Hình thành những khuẩn lạc tròn, ướt, bóngláng, không trong suốt, màu tro trắng nhạt, hơi lồi, đường kính từ 2-3 mm,nuôi lâu, lạc khuẩn có màu nâu nhạt và mọc rộng ra

Hình 1.11 Vi khuẩn Escherichia coli

Môi trường nước thịt: Phát triển rất nhanh, tốt, môi trường đục, để cólắng cặn màu tro nhạt ở dưới đáy, đôi khi có màu xám nhạt, canh trùng cómùi phân thối.

Môi trường MacConkey: Khuẩn lạc có màu hồng cánh sen, tròn nhỏ, hơilồi, không nhầy, rìa gọn, không làm chuyển màu môi trường

Môi trường thạch máu: Khuẩn lạc to, ướt, lồi, viền không gọn, màu xámnhạt

c Khả năng gây bệnh của E.coli

E.coli là thành viên thuộc nhóm vi khuẩn hệ bình thường của đường tiêuhóa, chiếm tỷ lệ cao nhất trong số các vi khuẩn hiếu khí (khoảng 80%) Trongđiều kiện bình thường, E.coli cư trú thường xuyên ở phần sau của ruột, khi cótrong dạ dày hay đoạn đầu ruột non của động vật Khi gặp điều kiện thuận lợi,chúng phát triển nhanh về số lượng, độc lực, gây loạn khuẩn, bội nhiễmđường tiêu hóa và nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy E.coli cũng là 1 vi khuẩngây một số bệnh như: viêm đường tiết niệu, viêm đường mật; đứng hàng đầutrong các căn nguyên gây nhiễm khuẩn huyết E.coli là căn nguyên thườnggặp trong viêm màng não, viêm phổi ở trẻ em mới sinh E.coli còn gặp trongnhiễm trùng ngoại khoa, nhiễm trùng trong bỏng [9]

CHƯƠNG 2NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU

2.1.1 Thu gom nguyên liệu

Mẫu lá và hạt chùm ngây được thu hái tại xã Tam Đàn, huyện Phú Ninh,tỉnh Quảng Nam

Mẫu hạt chùm ngây sau khi thu hái, tách lấy hạt, phơi 3 nắng, sau đótách vỏ cứng, nhân hạt sấy khô trong tủ sấy ở 50oC trong nhiều giờ rồi xaynhỏ và bảo quản trong bình thủy tinh kín

Hình 2.3 Lá chùm ngây phơi khô Hình 2.4 Bột lá chùm ngây

Hình 2.5 Nhân hạt chùm ngây Hình 2.6 Bột hạt chùm ngây

2.1.3 Hóa chất, dụng cụ và thiết bị nghiên cứu

a Hóa chất

* Lựa chọn dung môi chiết

Chọn dung môi phải không hoặc ít độc, không quá dễ cháy, hòa tan đượccác chất cần khảo sát, phù hợp với phương pháp mà ta tiến hành phân tích(với phương pháp GC-MS ta phải chọn dung môi dễ bay hơi và ít phâncực…), phù hợp với điều kiện kinh tế và phải thông dụng, phù hợp với điềukiện phòng thí nghiệm, dung môi có thể loại bỏ một cách dễ dàng sau khichiết tách

Bảng 2.1 Các dung môi có độ phân cực tăng dần tùy vào hằng số điện môi

và độ nhớt

Tên dung môi

Chỉ số phân cực

Chỉ số chiết xuất (20 o C)

Nhiệt

độ sôi ( o C)

Hằng số điện môi

ε (ở

25 o C)

Độ nhớt (mN.S m -2 )

Bước sóng hấp thu UV

Độ tan trong nước (%W/ W)

phân cực của dung môi.

* Dung môi sử dụng

Khảo sát thành phần hợp chất hữu cơ trong lá và hạt chùm ngây cầnchiết bằng các dung môi có độ phân cực khác nhau Trong đề tài, quá trìnhchiết tách sử dụng các dung môi chiết có độ phân cực tăng dần gồm:

+ n-hexan: C6H14, M = 86.16 g/mol, chất lỏng không màu, không tantrong nước, có khối lượng riêng D = 0.6548 g/ml, = -95oC, = 69oC.+ Diclometan: CH2Cl2, M = 84.93 g/mol, chất lỏng không màu, độ hòatan trong nước 1.3 g/ml ở 20oC, khối lượng riêng D = 1.3255 g/ml, = -96.7oC, = 41oC

+ Etyl axetat: C4H8O2, M = 88.11 g/mol, chất lỏng không màu, độ hòatan trong nước 8.3 g/ml ở 20oC, khối lượng riêng D = 0.8897 g/ml, = -

84oC, = 77oC

+ Ethanol: C2H6O, M = 46.07 g/mol, chất lỏng không màu, tan hoàn toàntrong nước, khối lượng riêng D = 0.789 g/ml, = -114.3oC, = 78oC

Ngoài ra còn một số hóa chất khác

Các hóa chất có nguồn gốc Trung Quốc

b Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu

- Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) tại Trung tâm Kỹ thuật Tiêuchuẩn Đo lường Chất lượng II (quatest II), số 2 Ngô Quyền – Đà Nẵng

- Thiết bị đo sắc ký ghép khối phổ (GC-MS) tại Trung tâm Kỹ thuật Tiêuchuẩn Đo lường Chất lượng II (quatest II), số 2 Ngô Quyền – Đà Nẵng

- Thiết bị đo sắc ký ghép khối phổ (GC-MS) tại Trung tâm hóa dầu, khoaHóa học, trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên Hà Nội

- Hai bộ chiết soxhlet.

Nguyên liệu ẩm có thể xem như hỗn hợp cơ học gồm chất khô tuyệt đối

và nước tự do Độ ẩm tương đối của nguyên liệu ẩm là tỉ số của khối lượngnước trên khối lượng chung của nguyên liệu ẩm, tính bằng phần trăm

Độ ẩm của nguyên liệu phải nằm trong giới hạn cho phép để đảm bảonguyên liệu không bị mốc hay hư hỏng, thông thường độ ẩm an toàn củanguyên liệu được quy định không quá 13% Do đó, có thể xác định độ ẩmbằng cách:

- Sấy trong tủ sấy ở áp suất thường

- Sấy trong tủ sấy có áp suất giảm (có hút chân không)

- Sử dụng bình hút ẩm

Trong đề tài này dùng tủ sấy để sấy, dùng sức nóng làm bay hơi hết hơinước trong mẫu Cân trọng lượng mẫu trước và sau khi sấy khô, từ đó tínhđược phần trăm nước có trong mẫu

* Tiến hành

Lấy 3 chén sứ rửa sạch và ký hiệu sẵn, sấy trong tủ sấy đến khối lượngkhông đổi Sấy xong cho vào bình hút ẩm để nguội đến nhiệt độ phòng, rồiđem cân chén sứ, ghi giá trị m1 (gam)

Xác định độ ẩm lá chùm ngây:

+ Lấy vào 3 chén sứ, mỗi chén m (gam) bột lá chùm ngây

+ Sau đó, sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ 100oC Cứ 3 giờ, lấy cốc ra cho vàobình hút ẩm đến khi cốc nguội đến nhiệt độ phòng thì tiến hành cân Và cứtiếp tục thực hiện thao tác trên cho đến khi khối lượng giữa hai lần cân liêntiếp có sai số không quá 0.001 gam Cân cốc chứa mẫu m2 (gam)

* Tính toán

Độ ẩm bột lá chùm ngây được tính bằng công thức:

Trong đó,

w: Khối lượng nước chứa trong nguyên liệu (%)

m: Khối lượng của nguyên liệu (gam)

m1: Khối lượng chén sứ (gam)

m2: Khối lượng nguyên liệu và chén sứ sau khi sấy (gam)

Độ ẩm chung là độ ẩm trung bình của 3 mẫu

Phương pháp này cũng dùng để xác định độ ẩm bột hạt chùm ngây

Đem mẫu đi than hóa trên bếp điện và cho vào tủ nung ở 200oC trong khoảng

2 giờ, tiếp tục nâng nhiệt độ lên 500oC tro hóa mẫu trong thời gian 4 giờ,nung xong lấy mẫu ra khỏi lò, làm nguội trong bình hút ẩm, cân và ghi lạikhối lượng chén nung và tro

Tiếp tục cho cốc vào lò nung và thực hiện quá trình trên cho đến khikhối lượng liên tiếp giữa hai lần cân chênh nhau không quá 0.001 gam thìdừng, ghi giá trị m3 (gam)

Sau khi tro hóa lá chùm ngây hoàn toàn, lúc này tro ở dạng mịn, có màuxám trắng

* Tính toán:

Hàm lượng tro được tính bằng công thức:

Trong đó:

m: Là khối lượng nguyên liệu (gam)

m1: Là khối lượng của chén sứ (gam)

m3: Là khối lượng của chén sứ và lá chùm ngây sau khi tro hóa (gam).Phương pháp này cũng dùng để xác định hàm lượng tro của bột hạtchùm ngây

c Xác định hàm lượng một số kim loại nặng

Mẫu bột lá và hạt chùm ngây sau khi tro hóa được vô cơ hóa về dạngmuối vô cơ cho dễ tan Cho toàn bộ mẫu tro hóa hòa tan trong dung dịchHNO3 đặc và định mức đến 100 ml Lấy dung dịch đã định mức trên đem xácđịnh hàm lượng một số kim loại nặng là Pb, Cu, Zn bằng phương pháp quangphổ hấp thụ nguyên tử (AAS) tại Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lườngChất lượng II (quatest II), số 2 Ngô Quyền – Đà Nẵng

Công thức chuyển đổi từ hàm lượng mg/l sang hàm lượng mg/kg nhưsau:

Trong đó: m: khối lượng mẫu bột trước khi tro hóa

2.2.2 Phương pháp chiết mẫu thực vật

a Giới thiệu chung

Chiết là dùng dung môi thích hợp có khả năng hòa tan chất đang cầntách và tinh chế để tách nó ra khỏi môi trường rắn hoặc lỏng khác Thườngngười ta dùng một dung môi thấp và ít tan trong nước (vì các chất hữu cơ cầntinh chế thường ít tan trong nước), chất cần tách sẽ chuyển phần lớn lên dungmôi và ta có thể dùng phễu để tách riêng dung dịch thu được ra khỏi nước.Bằng cách lặp đi lặp lại việc chiết một số lần, ta có thể tách hoàn toànchất cần tinh chế vào dung môi đã chọn, sau đó chưng cất loại bỏ dung môi vàcất lấy chất tinh khiết ở nhiệt độ và áp suất thích hợp

Người ta cũng thường chiết một chất từ hỗn hợp rắn bằng một dung môihoặc hỗn hợp dung môi với một dụng cụ chuyên dùng đặc biệt gọi là bìnhchiết soxhlet Dung môi được đun nóng, cho bay hơi liên tục và chảy vào bìnhchứa hỗn hợp cần chiết tách (thường gói bằng giấy lọc), nó sẽ hòa tan chất rắncần chiết và nhờ một ống xiphông, dung dịch chảy xuống bình cầu bên dưới,dung môi nguyên chất lại tiếp tục được cất lên Phương pháp này tiết kiệmđược dung môi và hiệu quả tương đối cao

b Kỹ thuật chiết soxhlet