Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do chlamydia trachomatis tại bệnh viện đại học y thái bình

M U Hin nay, mt cỏc núng bng v chm súc sc khe sinh sn m cỏc nc trờn th gii ang i mt l bnh lõy truyn qua ng tỡnh dc Viờm ng sinh dc Chlamydia trachomatis c coi l bnh lõy truyn qua ng tỡnh dc ng u trờn th gii Nhim Chlamydia trachomatis thng gõy viờm niu o, viờm c t cung Tuy nhiờn nu khụng iu tri cú thờ dõn n cỏc bin chng nh viờm phn ph, au vựng chu tớnh, thai ngoi t cung, vụ sinh tn thng ng dõn trng, viờm mo tinh ũi hi phi chm súc y t vi phớ tn cao T chc Y t th gii c tớnh hng nm cú khong 90 triu ca nhim Chlamydia trachomatis c phỏt hin mi [34] Bnh Chlamydia trachomatis hay gp nhng ngi tr tui, tui sinh Cỏc nghiờn cu mi õy cho thy, t l mc bnh ny ang tng lờn Ti Chõu u t nm 1996-2003, s bnh nhõn nhim Chlamydia trachomatis ó tng gp ụi, ti Hoa K s ny cng tng 14% giai on 2000-2005 [15, 18] Vit Nam khong vi nm gn õy nhim khun Chlamydia trachomatis mi c chỳ ý Mt vi nghiờn cu a t l khong 30% cỏc trng hp n khỏm ph khoa cú tit dich ng õm o bt thng l Chlamydia trachomatis Nguy hiờm nht ca nhim Chlamydia trachomatis qua ng sinh dc l cú ti 75% n gii v 50% nam gii mc bnh m khụng cú triu chng, ngi bnh hon ton khụng bit mỡnh nhim vi khun [2,9] chn oỏn nhim Chlamydia trachomatis ngi ta thng dựng xột nghim nuụi cy- tiờu chun vng chn oỏn xỏc inh nhim Chlamydia trachomatis Tuy nhiờn xột nghim ny cú hn ch l phi bo m vi khun cũn sng quỏ trỡnh chuyờn n phũng xột nghim, thi gian xột nghim di Khuch i acid nucleic (nucleic acid amplification tests NAATs) l k thut sinh hc phõn t ó c ng dng rng rói y hc phỏt hin s tn ti ca cỏc vi sinh vt cỏc mõu bnh phm Phn ng chui trựng hp (Polymerase Chain Reaction PCR) l mt NAATs cú nhy v c hiu rt cao, nhiu nghiờn cu ó xem PCR l mt tiờu chun vng kho sỏt giỏ tri ca cỏc xột nghim chn oỏn khỏc i vi bnh nhim Chlamydia trachomatis, xột nghim ny cho phộp xỏc inh s tn ti ca vi khun dich õm o, t cung ca bnh nhõn Vi mong mun úng gúp vo cụng tỏc chm súc sc khe núi chung v cụng tỏc chm súc sc khe sinh sn núi riờng, chỳng tụi thc hin ti Nghiờn cu ng dng k thut PCR chn oỏn viờm õm o, c t cung Chlamydia trachomatis ti Bnh vin i hc Y Thỏi Bỡnh vi mc tiờu: - Chun húa c quy trỡnh k thut thc hin phn ng PCR phỏt hin vi khun Chlamydia trachomatis - Xỏc inh c t l nhiờm Chlamydia trachomatis bnh nhõn viờm õm o, cụ t cung Chng 1: TNG QUAN 1.1 Vi khun Chlamydia trachomatis Chlamydia trachomatis thuc chi Chlamydia, h Chlamydiaceae, lp Chlamydiae, ngnh Chlamydiae, gii Bacteria [2, 9] V hỡnh thỏi quan sỏt di kớnh hiờn vi quang hc, vi khun cú hỡnh cu hoc hỡnh bu dc, kớch thc khỏc nhau, l vi khun Gram õm cú mng l lipopolisaccharide Vỡ thiu mt s enzyme tng hp cỏc hp cht cao nng s dng cho t bo, vi khun ny phi ký sinh ni bo bt buc, khụng cú kh nng sng sút bờn ngoi t bo H gen ca Chlamydia trachomatis gm phõn t DNA di 1.042.519 nucleotide vi 894 trỡnh t mó húa cho protein Hỡnh 1.1 Cu trỳc h gen ca vi khun Chlamydia trachomatis ( Theo Deborah Dean et al., (2009) Predicting Phenotype and Emerging Strains among Chlamydia trachomatis Infections, CDC Home Vol 15.(9)) Chlamydia trachomatis (C.trachomatis) cha n 10 bn ca plasmid cú kớch thc 7.5 kb Trỡnh t nucleotide ca plasmid l trỡnh t bo th cao (cú di 1% nucleotide thay th), cha khung c m (Open Reading Frame) mó hoỏ cỏc gen v cỏc khỏng nguyờn Mc dự chc nng ca plasmid cũn cha xỏc inh ht nhng trỡnh t nucleotide v s cú mt ca plasmid t bo chng t nú cú vai trũ quan trng i vi vi khun C.trachomatis C.trachomatis c chia thnh 15 loi tuýp huyt khỏc bao gm: Tuýp huyt (A-K), L1, L2, L3, Ba, Da, Ia v L2a Trong ú tuýp A, B, Ba v C gõy bnh mt ht Tuýp D, E, F, G, H, I, J v K gõy bnh viờm ng sinh dc Tuýp L1, L2 v L3 gõy bnh lympho ht, mt bnh viờm hch bch huyt hoa liu bn [2,9] Chu k phỏt triờn ca C.trachomatis bo tng t bo kộo di 48-72 gi [34] Vũng i ca C.trachomatis gm giai on: Thờ c bn v thờ li - Thờ c bn (Elementary Body- EB) l nhng t bo trũn cú ng kớnh khong 0.3àm, nhõn m Thờ ny xõm nhp vo cỏc t bo theo kiờu thc bo - Thờ li (Reticulate Body- RB): Sau xõm nhp vo t bo C.trachomatis chuyờn húa nh t bo v to thnh thờ li (ng kớnh 1àm), sinh sn theo hỡnh thc phõn ụi kiờu trc phõn khong 2-3 gi mt ln Sau ú thờ li li chuyờn thnh thờ c bn v gii phúng t bo thụng qua hỡnh thc ngoi tit bo (exocytosis) Thụng thng mi thờ li gii phúng 100-1000 thờ c bn ri tip tc xõm nhp vo cỏc t bo mi Hỡnh 1.2 Chu k vũng i ca vi khun C.trachomatis (theo Yvonne Pannekoek) ng truyn bnh: Vi khun C.trachomatis l vi khun ký sinh ni bo bt buc, khụng cú kh nng sng sút ngoi t bo nờn ng truyn ch yu l ng tỡnh dc hoc lõy t m sang ngi m mang thai bi nhim C.trachomatis Kh nng gõy bnh: C.trachomatis cú kh nng gõy nờn bnh chớnh ngi: Bnh mt ht v bnh nhim trựng sinh dc tit niu, ú bnh sinh dc tit niu nhiu tuýp (D, E, F, G, H, I, J v K) gõy ra, tng nhanh s lng ngi mc Tr s sinh cú thờ bi mc bnh viờm kt mc hoc viờm phi C.trachomatis nu bi lõy t m ph n Cú ti 75% ph n khụng cú biờu hin triu chng lõm sng v triu chng nu cú cng khụng iờn hỡnh [3], nờn vic chn oỏn v sng lc nhim C.trachomatis n thun da vo triu chng lõm sng hon ton khụng kh thi Cho n cú biờu hin viờm vựng chu hoc bnh nhõn khỏm vụ sinh phỏt hin cú tn thng ng dõn trng thỡ C.trachomatis ó gõy bin chng khú phc hi Vỡ vy cn thit phi cú nhng phng phỏp chn oỏn chớnh xỏc v phự hp giỳp phỏt hin C.trachomatis nhm ngn chn nhng hu qu m nú gõy n gii, vi khun C.trachomatis cú thờ gõy viờm õm ao, c t cung v niu o Cỏc bin chng thng gp bnh nhõn nhim C.trachomatis mn tớnh bao gm: - Tc vũi trng ph n: Mt nhng nguyờn nhõn gõy tc vũi trng l vim nhim vũi trng, bung trng, dõy chng quanh t cung vũi trng C.trachomatis - Cha ngoi t cung: Nguyờn nhõn viờm nhim vũi trng C.trachomatis khin phụi thai tc ti iờm hp Phụi thai ln dn lờn, n mt mc no ú s phỏ v cỏc mch mỏu ni nú u li trờn vũi trng, gõy chy mỏu d di bng, cú thờ lm thai ph t vong nhanh chúng Nhiu thng kờ cho thy cú ti 9% ph n nhim C.trachomatis bi cha ngoi t cung - Viờm vựng chu: Phn ln, viờm vựng chu vi khun lu v C.trachomatis gõy Viờm vựng chu l mt bnh thm lng, nhiu tỏc gi thng kờ cho thy cú ti 40% ph n nhim C.trachomatis bi viờm nhim vựng tiờu khung, s ú cú 20% bi vụ sinh lm nh hng khụng nh ti cht lng cuc sng - C.trachomatis cú thờ kt hp cựng vi HPV (Human papilloma virus) mt virus gõy u nhỳ cú kh nng a n ung th c t cung nam gii nam gii triu chng lõm sng ca nhim C.trachomatis cng m nht hn, biờu hin u tiờn l viờm niu o cú m m gii chuyờn khoa gi l viờm niu o khụng lu, sau ú cú thờ dõn n viờm mo tinh hon Ti tỳi tinh, vi khun gõy c cho tinh trựng, lm gim s lng tinh trựng, i sng tinh trựng ngn li, cht lng gim xung õy chớnh l lý gõy vụ sinh nam Tuy nhiờn, vỡ C.trachomatis lõy qua ng tỡnh dc nờn nam gii nhim bnh nu khụng c phỏt hin v iu tri s l ngun tỏi nhim cho bn tỡnh Ngoi ra, mt s nghiờn cu cũn cho thy C.trachomatis nam gii cú kh nng bỏm vo tinh trựng v theo tinh trựng i qua c t cung lờn ng dõn trng, giỳp phỏt tỏn C.trachomatis vũi trng ca ph n 1.2 Cỏc xột nghim chn oỏn vi khun Chlamydia trachomatis [32] 1.2.1 Nuụi cy phỏt hin C.trachomatis, ngi ta cú thờ dựng bin phỏp nuụi cy ch vi khun gia tng s lng C.trachomatis khụng phỏt triờn ngoi t bo sng c nờn khụng thờ nuụi cy theo phng phỏp thng dựng m phi tin hnh nuụi cy trờn cỏc t bo nh McCoy hoc Hela 229, t bo thai - i vi bnh mt ht, ngi ta ly nang bng cỏch no cỏc nang ri cy vo cỏc t bo thai ngi phỏt hin cỏc ht vựi nguyờn sinh cht ca t bo - i vi bnh viờm sinh dc tit niu: ly m cht tit niu o (nam gii); cht tit c t cung, õm o (n gii) nuụi cy mụi trng cú cha t bo McCoy hoc Hela 229 370C- 5% CO2 Quan sỏt tớnh cht xõm nhim sau 48 gi nuụi cy v phỏt hin C.trachomatis bng k thut dich hunh quang: vi khỏng thờ ỏnh du hunh quang c hiu cho khỏng nguyờn v lipopolysaccharide (LPS) hoc protein mng (major outer membrane protein- MOMP) Xột nghim ny c ỏnh giỏ l tiờu chun vng nhúm xột nghim vỡ cú c hiu rt cao (100%), cho phộp lu gi vi khun lm khỏng sinh phỏt hin chng khỏng thuc Nhc iờm ca phng phỏp ny l ũi hi thi gian di, phi bo m vi khun cũn sng quỏ trỡnh chuyờn n phũng thớ nghim, i ng cỏn b thnh tho v nuụi cy t bo Bờn cnh ú xột nghim ny cú nhy thp (70-85%), thp hn so vi khuch i nucleic acid (nucleic acid amplification tests NAATs) [32] 1.2.2 K thut dch gn enzyme (enzyme immunoassays EIAs) Phng phỏp ny da trờn phn ng húa dich giỳp phỏt hin khỏng nguyờn LPS ca C.trachomatis bng khỏng thờ n dũng hoc a dũng c ỏnh du bng enzyme, phc hp khỏng nguyờn - khỏng thờ s hot húa enzyme chuyờn c cht khụng mu thnh cú mu, phỏt hin c bng phn ng to mu hay o bng quang ph k Khi mõu xột nghim c thờm vo mng, khỏng nguyờn ca C.trachomatis s gn vi khỏng thờ c ph sn trờn mng Sau ú b sung khỏng thờ c hiu vi C.trachomatis liờn kt vi khỏng nguyờn ó c bt gi bi khỏng thờ trờn mng Dung dich enzyme c thờm vo s liờn kt vi khỏng thờ c hiu ca C.trachomatis Bc tip theo l loi b cỏc thnh phn khụng gn vi mng B sung c cht c hiu vi enzyme vo mng Nu cú khỏng nguyờn, c cht phn ng vi enzyme to s thay i mu sc phỏt hin v o c bng mỏy quang ph k Xột nghim ny cú hiu qu vi quy mụ sng lc ln, khụng ũi hi vi khun cũn sng, r tin hn nuụi cy v yờu cu k nng xột nghim va phi Tuy vy nú cú nhc iờm l khụng s dng c vi nhiu loi mõu ly t i trng, c quan hụ hp v õm o gim nhy v c hiu vi cỏc mõu ny, c s dng sng lc qun thờ cú t l dng tớnh thp ( 5%) [32] Xột nghim ny cú nhy thp hn NAATs v c hiu thp hn nuụi cy t bo 1.2.3 K thut khỏng th hunh quang trc tip (direct fluorescent antibody- DFA) Phng phỏp ny s dng khỏng thờ n dũng hay a dũng c hiu c ỏnh du hunh quang phỏt hin trc tip khỏng nguyờn v LPS hay khỏng nguyờn mó húa protein mng MOMP Mõu bnh phm c thu thp, mõu c ỏnh du tờn v ia ch bnh nhõn Sau ú, mõu c pht nh nhng lờn lam kớnh v c c inh lp tc bng methanol Sau c lm khụ khụng khớ t n phỳt, lam kớnh c chuyờn n phũng thớ nghim, nhum bng khỏng thờ ỏnh du hunh quang c hiu vi C.trachomatis Khỏng thờ liờn kt c hiu vi C.trachomatis cú mõu Tip ú l bc loi b nhng khỏng thờ khụng liờn kt Quan sỏt di kớnh hiờn vi hunh quang, mõu dng tớnh C.trachomatis dng c bn mu xanh tỏo tng phn vi mu t ca t bo Xột nghim ỏp dng c cho nhiu loi mõu khỏc nhau, khụng yờu cu vi khun cũn sng, ũi hi k nng xột nghim va phi, thớch hp chn oỏn trờn cỏc i tng cú nguy c cao S thnh cụng ca k thut dich hunh quang ph thuc vo nhiu yu t: Cú khỏng thờ ỏnh du hunh quang c hiu vi C.trachomatis, khỏng thờ kt hp, kớnh hiờn vi hunh quang cht lng tt K thut ny khụng thớch hp cho s lng mõu ln v i tng cú nguy c thp, nhy thp hn NAATs v c hiu thp hn nuụi cy t bo [32] 1.2.4 K thut khuch i nucleic acid (nucleic acid amplification tests NAATs) NAATs l k thut sinh hc phõn t ó c ng dng rng rói y hc phỏt hin s tn ti ca cỏc vi sinh vt cỏc mõu bnh phm, nhy trờn 90%, c hiu tng ng vi nuụi cy t bo K thut NAATs cú u iờm l cú thờ ỏp dng nhng ni khụng cú kh nng nuụi cy, xột nghim khụng ũi hi vi khun cũn sng, thi gian xột nghim ngn (trong ngy) Phn ng chui trựng hp (Polymerase Chain Reaction PCR) l xột nghim cú nhy v c hiu cao thớch hp cho s phỏt hin C.trachomatis [21] Nhiu nghiờn cu ó xem PCR l mt tiờu chun vng kho sỏt giỏ tri ca cỏc xột nghim chn oỏn khỏc i vi bnh nhim C.trachomatis, xột nghim ny cho phộp xỏc inh s tn ti ca vi khun dich qut c t cung hoc mõu nc tiờu ca bnh nhõn vi cỏc cp mi trờn plasmid, trờn gen mó húa protein mng hoc trờn rRNA Tuy nhiờn, xột nghim ny cú thờ gim nhy s cú mt cỏc cht c ch cú mõu hoc khụng nhy phỏt hin mõu cha quỏ ớt dng c bn ca vi khun C trachomatis Do vy cú thờ to sn phm õm tớnh gi Theo Saiki v cng s (1985) [23], phỏt hin 25 ng DNA trờn gel agarose nhum ethidium bromide sau 35 chu k khuch i t 10 phõn t ban u mõu cn hiu qu khuch i cao hn 90% Nested PCR l k thut s dng hai cp mi thay vỡ mt cp mi nh k thut PCR c iờn Cp mi th hai c thit k nm on gen m cp mi th nht khuch i Quỏ trỡnh chy PCR ln u khụng khỏc gỡ PCR thụng thng Sn phm ca phn ng PCR ln u s lm khuụn cho phn ng PCR ln th hai cựng vi cp mi th hai Kt qu sau hai ln PCR thu c sn phm c hiu hn nhiu K thut ny cú nhy rt cao, cú thờ phỏt hin vi khun mt rt thp m cỏc phng phỏp thụng thng khú cú thờ phỏt hin c (1-5 ký sinh trựng/1 àl mỏu) õy c xem l tiờu chun vng mi phỏt hin vi khun cỏc mõu bnh phm nhy v c hiu cao ca nú Theo Pamela Cribb v cng s (2002) [22], xột nghim ny cú thờ phỏt hin DNA tng ng vi nh hn 10 dng c bn (EB) ca vi khun C.trachomatis hn hp phn ng, cho phộp phỏt hin kt qu õm tớnh gi v ỏp ng c vi s thay i cỏc phũng thớ nghim khỏc Mõu c x lý tỏch DNA ca C.trachomatis Cỏc thnh phn ca phn ng PCR c thit lp gm primer, dNTP, Taq polimerase, MgCl Cỏc primer liờn kt vi DNA ớch c hiu ca C.trachomatis Enzym Taq polymerase kộo di mi trỡnh t DNA s dng cỏc nucleotide t to trỡnh t DNA b sung Quỏ trỡnh khuch i ny xy hn hp phn ng c mỏy luõn nhit Mi chu k lm tng s lng DNA ớch theo hm m Sau khuch i, sn phm ln c s dng lm khuụn cho phn ng PCR ln Sau phn ng PCR ln 2, sn phm c in di trờn gel agarose 1%, nhum ethidium bromide v phõn tớch trờn h thng chp nh gel Xột nghim ny cú thờ phỏt hin vi khun C.trachomatis trờn mõu nc tiờu ( nhy ca mõu ny thp hn mõu dich pht), nhiu loi mõu ly t i trng, c quan hụ hp v õm o Xột nghim ny nhy trờn 90%, c hiu tng ng vi nuụi cy t bo, cú u iờm l cú thờ ỏp dng nhng ni khụng cú kh nng nuụi cy, khụng ũi hi vi khun cũn sng, thi gian xột nghim ngn (trong ngy) [13, 17] Nhc iờm ca xột nghim ny l yu t ngoi nhim cao, vy cú thờ trỏnh bng cỏch s dng u cụn lc v dựng enzyme uracil- N- glycosylase phn ng 1.3 Cỏc nghiờn cu v Chlamydia trachomatis trờn th gii v nc 1.3.1 Cỏc nghiờn cu trờn th gii S ngi nhim trờn 100.000 Nm Hỡnh 1.3 T l nhiờm Chlamydia trachomatis mt s nc Chõu u Theo ECDC nm 2009 [15], t l dng tớnh C.trachomatis mt s nc Chõu u thay i t nm 1998 n nm 2007 Thy iờn v Phn Lan, ni nhng nghiờn cu c tin hnh t u nhng nm 90, t l ny gim u nhng nm 90 (tng t vi t l cỏc bnh lõy truyn qua ng tỡnh dc khỏc Chõu u) s thay i thúi quen sinh hot tỡnh dc v mi lo t hiờm AIDS T l ny tng lờn t nm 1995 Ti Anh v an Mch, t l ny tng dn theo mi nm, nguyờn nhõn cú 10 3.2 nhy ca k thut PCR Phn ng PCR gm hai ln chy c thc hin vi mõu chng dng plasmid cú nng khỏc nhau: 101, 102, 103, 104 bn sao/àl v s dng 10 àl in di trờn gel agarose 1% Hỡnh 3.10 nh din di nhy phn ng PCR hai vũng trờn vi khun C.trachomatis Kt qu in di (hỡnh 3.10) cho thy phn ng dng tớnh (quan sỏt c cỏc bng DNA sau nhum ethidium bromide) mõu cú t 10 bn plasmid tr lờn Da trờn kt qu ỏnh giỏ v nhy ca k thut PCR, chỳng tụi la chn nng DNA chun lm chng dng cho cỏc phn ng PCR phỏt hin vi khun Chlamydia trachomatis mõu bnh phm l 101 S dng chng dng nng ny s lm gim nguy c ngoi nhim khuch tỏn sn phm PCR ln quỏ trỡnh chuyờn sn phm khuch i ln sang tuýp th hai nhy ny thun li cho thc t phỏt hin bnh vỡ s lng vi khun mõu bnh phm cú thờ thp Tuy vy so vi nghiờn cu ca Pamela Cribb, Juan Pablo Scapini v Esteban Serra, phn ng nested PCR s dng hai cp oligonucleotides (KL5/KL6 v KL1/KL2) lm mi cú thờ phỏt hin ớt hn 10 EB mi phn ng cỏc mõu sinh hc khỏc nhau, nhy phn ng ca chỳng tụi cha cao bng Do vy chỳng tụi xut cỏc th nghim PCR cỏc iu kin nghiờm ngt hn nhm tng giỏ tri nhy 3.3 c hiu ca k thut PCR Phn ng PCR s dng cp mi KL1, KL2 c thc hin vi cỏc mõu DNA ca vi khun Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci v cỏc mõu DNA cú sn phũng thớ nghim nh: mõu DNA ngi, Escherichia Coli, Mycobacteria Tuberculosis, Hepatitis B virus, Human Papilloma virus Cỏc phn ng sau thc 43 hin c in di kiờm tra bng gel agarose 1% u cho kt qu õm tớnh iu ny chng t c hiu cao 100% ca phn ng PCR, khụng khuch i sn phm ca cỏc i tng khỏc kờ c cỏc loi Chlamydia khỏc 3.4 Kt qua xột nghim bng k thut PCR Phn ng hai vũng l mt NAATs cú nhy v c hiu rt cao Tuy nhiờn kh nng ngoi nhim cng rt ln gim thiờu nguy c ngoi nhim, chỳng tụi s dng bn phũng riờng bit, mt pha mix, mt chun bi mõu v PCR ln 1, mt to phn ng PCR ln v mt phũng in di Trong cỏc phn ng chỳng tụi s dng dUTP thay th cho dCTP ng thi s dng enzyme Uracyl-N-Glycosylase (UNG) nng 0,05U Enzyme ny cú tỏc dng phõn ct cỏc liờn kt N- glycosylic gia Uracyl v glucose ca cỏc sn phm ngoi nhim cú cha dUTP phn ng thnh cỏc dUTP t do, vụ hiu hoỏ amplicon nhim t nhng t PCR trc ú vy s trỏnh c kt qu dng tớnh gi Do vy, trc thc hin cỏc chu k khuch i chu trỡnh PCR, cn bnh phm 37C 15 phỳt vi enzyme UNG phỏ cỏc trỡnh t sn phm PCR nhim t cỏc t trc Cỏc chu trỡnh khuch i tip theo s lm bt hot hot tớnh ca UNG vi nhit trờn 55C Sau chy xong cỏc chu k khuch i, mõu 72C thi gian 20 phỳt bt hot hon ton hot tớnh ca UNG, khụng gõy cn tr cho vic c kt qu PCR Kt qu dng tớnh gi cũn c loi tr bng mt chng õm thc hin ng thi vi xột nghim trờn mõu nhng thay DNA khuụn bng nc kh ion vụ trựng Kt qu õm tớnh gi cng c hn ch n mc thp nht vỡ phn ng cú nhy cao, phỏt hin c kt qu dng tớnh cú mt 10 EB Kt qu xột nghim trờn mõu bnh phm c thờ hin hỡnh 3.11 Hỡnh 3.11 Kt qu xột nghim trờn mu bnh phm 44 NC: Chng õm, khụng cú sn phm DNA (2 àl nckh ion) Ging s 1,3,4: Mu bnh phm dng tinh Ging s 2: Mu bnh phm õm tinh Ging s 5: Chng dng M: Thang DNA 100 bp ca Fermentas vi kich thc mi vch l 100 bp T l dng tớnh C.trachomatis s bnh nhõn n khỏm ti phũng khỏm Sn ph khoa, bnh vin i hc Y Thỏi Bỡnh thờ hin bng 3.5 PCR S lng T l phn trm Dng tớnh 80 36.9 % m tớnh 137 63.1 % Tng 217 100% Bng 3.5 Kt qu xột nghim C.trachomatis Trong s 217 bnh nhõn cú biờu hin viờm õm o, c t cung n khỏm ti bnh vin i hc Y Thỏi Bỡnh t thỏng n thỏng 10 nm 2011 cú 80 ngi cú kt qu dng tớnh vi C.trachomatis chim t l 36.9% Kt qu ny cao hn nghiờn cu ca Trn Thi Li trờn i tng viờm õm o, c t cung nm 1999 cú t l 32.5% [8]; ti bnh vin da liu thnh ph H Chớ Minh nm 2008 vi xột nghim PCR t l ny l 35.7% [6]; ti bnh viờn phong da liu Quy Hũa 12.1% [5] Trong cỏc nghiờn cu ny t l thp nht l ti bnh viờn phong da liu Quy Hũa cú thờ c mõu cũn ớt Kt qu ny cng cao hn nhiu so vi nghiờn cu ca Farhad B Hashemi v cng s ti Iran nm 2006 [16] Tuy nhiờn mt nghiờn cu Súc Trng trờn i tng ph n mi dõm t l dng tớnh vi C.trachomatis l 48.4% [3], cao hn nghiờn cu ca chỳng tụi Kt qu xột nghim trờn cha phn ỏnh c ton b qun thờ vỡ cũn cú nhng i tng nhim bnh nhng khụng cú biờu hin viờm nhim nờn khụng i khỏm, v xột nghim ny ln u tiờn c ỏp dng ti Thỏi Bỡnh Vỡ vy, vi kt qu dng tớnh cao nh trờn, chỳng tụi xut vic triờn khai xột nghim vi khun C.trachomatis bnh vin i hc Y Thỏi Bỡnh trờn cỏc i tng n cú v khụng cú biờu hin viờm nhim sinh dc nhm kiờm soỏt s lõy nhim vi khun ny qua ng tỡnh dc 45 ng thi chỳng tụi nghi tin hnh nghiờn cu thờm trờn c mõu ln hn khng inh kt qu Tip ú chỳng tụi tin hnh thng kờ s bnh nhõn theo nhúm tui Kt qu thu c thờ hin bng 3.6 Bnh nhõn theo nhúm S mu dng tui tớnh 35 (n=88) 32 36.4% T l Bng 3.6 T l nhiờm C.trachomatis theo tuụi Kt qu cho thy nhúm di 25 tui cú t l nhim vi khun C.trachomatis cao nht, chim 40.6% Nghiờn cu ca tỏc gi Bulhak Koziol V v cng s [33] ti mt tnh ca Balan cho thy t l dng tớnh vi vi khun ny l 39.5%, gn tng ng vi kt qu ca chỳng tụi S khỏc bit v t l dng tớnh gia nhúm di 25 tui v trờn 35 tui l cú ý ngha thng kờ vi p[...]... sinh họcViện Khoa học Việt Nam cung cấp - Các bệnh nhân nữ trong độ tuổi sinh sản (15-49 tuổi) có biểu hiện viêm âm đạo, cổ tử cung đến khám tại phòng khám Sản phụ khoa - Bệnh viện Đại học Y Thái Bình trong thời gian từ 01/04/2011 đến 10/2011 2.1.2 Thời gian nghiên cứu: từ 01/04/2011 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu + L y mẫu dịch phết cổ tử cung tại phòng khám Sản phụ khoa - Bệnh viện Đại học Y Thái Bình. .. Chuẩn quy trình kỹ thuật, xử lý mẫu, tách chiết DNA và thực hiện phản ứng PCR tại Lab sinh học phân tử - Trung tâm KHKT Y Dược - Đại học Y Thái Bình 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp chọn mẫu và cỡ mẫu Phương pháp chọn mẫu Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân: Bệnh nhân trong độ tuổi sinh sản, đã từng quan hệ tình dục Được khám và chẩn đoán là viêm âm đạo, cổ tử cung Đồng ý tham gia nghiên cứu... chuẩn loại trừ: 23 Bệnh nhân đang trong giai đoạn kinh nguyệt, bị rong kinh, rong huyết Bệnh nhân đã từng điều trị kháng sinh trong vòng 1 tháng trước đó Không đồng ý tham gia nghiên cứu Những bệnh nhân được lựa chọn vào nghiên cứu sẽ được l y mẫu dịch phết cổ tử cung để tiến hành làm xét nghiệm PCR phát hiện Chlamydia trachomatis tại Trung tâm KHKT Y Dược - Đại học Y Thái Bình Cỡ mẫu: Để xác... pháp l y mẫu Những bệnh nhân được lựa chọn tham gia nghiên cứu đều được thăm khám bởi các bác sĩ Sản phụ khoa để xác định tình trạng viêm âm đạo, cổ tử cung trước khi l y mẫu Dùng tăm bông lau sạch dịch tiết cổ tử cung Dùng tăm bông tiếp theo đưa sâu vào ống cổ tử cung 2 cm, xoay tăm bông và miết tăm bông vào thành ống cổ tử cung từ 15 đến 30 gi y Khi kéo tăm bông ra không chạm vào vách âm đạo...thể do không được nghiên cứu từ đầu những năm 90, sử dụng các chẩn đoán có độ nh y cao hơn, đối tượng nghiên cứu nằm trong các nhóm có nguy cơ cao Theo một nghiên cứu về tỷ lệ nhiễm vi khuẩn n y tại Châu Âu [20] cho th y: Phần Lan Nghiên cứu 298 phụ nữ tuổi từ 18 đến 40, từ năm 1977 đến năm 1980 tại một trung tâm y tế sinh viên tại Đại học Helsinki Những phụ nữ trên được chăm sóc y tế về các... tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở bệnh nhân viêm âm đạo, cổ tử cung đến khám tại bệnh viện Đại học Y Thái Bình từ tháng 4 đến tháng 10 năm 2011 Các mẫu bệnh phẩm thu thập đúng tiêu chuẩn chọn lựa sẽ được tiến hành phản ứng PCR theo quy trình chuẩn ở trên 2.2.2.8 Điện di, phân tích kết quả Chúng tôi sử dụng 10 µl sản phẩm phản ứng PCR để điện di trên gel agarose 1%, nhuộm gel trong dung dịch... tính với C .trachomatis (nhóm Ct IgG+) Từ tháng 8 đến tháng 12 năm 2006, một nghiên cứu áp dụng kỹ thuật PCR xét nghiệm chẩn đoán C .trachomatis được thực hiện tại Viện da liễu quốc gia trên 555 bệnh nhân [7] Bệnh nhân là đối tượng trên 15 tuổi đến khám có biểu hiện tiết dịch niệu đạo và tiết dịch âm đạo Bệnh phẩm là dịch tiết niệu đạo (đối với bệnh nhân nam) và dịch tiết cổ tử cung (đối với bệnh nhân... tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở những phụ nữ viêm cổ tử cung chúng tôi sử dụng công thức: 2  1,96  n≥  p (1 − p )  m  Trong đó: n là cỡ mẫu, m là độ sai số, p là tỉ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở phụ nữ viêm cổ tử cung Với p = 17% (theo nghiên cứu của Farhad B Hashemi và cộng sự [16]) và lựa chọn giá trị độ sai số m = 0,05 thì cỡ mẫu n tối thiểu là 217 bệnh nhân 2.2.2 Kỹ thuật xét nghiệm... cách sử dụng xét nghiệm EIA Tỷ lệ dương tính C .trachomatis là 2% trong nhóm A và 6% trong nhóm B Vương quốc Anh Nghiên cứu được tiến hành đầu tiên (Smith et al., 1991) liên quan đến 197 phụ nữ tuổi từ 19 đến 58 (trung bình 30 tuổi) tại một phòng khám soi cổ tử cung Nghiên cứu cho th y không có sự khác biệt giữa phụ nữ có dịch phết cổ tử cung bình thường và bất thường Bệnh phẩm dịch phết cổ tử cung được... Kết quả 75 nguời có hiện diện của C .trachomatis trên bệnh phẩm phết cổ tử cung, như v y tần suất lưu hành của viêm cổ tử cung do C .trachomatis là 18.07% Tỷ lệ viêm cổ tử cung do C .trachomatis ở phụ nữ đi khám phụ khoa là 32.5% của Trần Thị Lợi tiến hành năm 1999 [8] Năm 2001-2002, Huỳnh Thị Trọng, Nguyễn Quốc Chinh và Nguyễn Văn Tú đã thực hiện một nghiên cứu cắt ngang với phương pháp chọn mẫu xác