... KỹthuậtPCRtrongchẩnđoánlao
KỸ THUẬT PHẢN ỨNG CHUỖI POLYMERASE (PCR)
PHÁT HIỆN M. TUBERCULOSIS TRỰC TIẾP TRONG MẪU BỆNH PHẨM
Kỹ thuậtPCR cho phép xác định tác ... biotin
III. CHUẨN BỊ HOÁ CHẤT, DUNG DỊCH CẦN THIẾT CHO PCRCHẨNĐOÁN LAO
Dung dịch TTE: 1% Triton X 100 pha trong 20mM Tris-HCl pH=8,3 + 1mM EDTA (bảo quản trong
đông lạnh); Hấp ướt khử trùng 121
0
C ... lai ghép với cơ chất trên
phiến nhựa, v.v.
I. CÁC THÔNG TIN CHUNG CẦN BIẾT VỀ PCR
I.1. Nguyên lý của PCR
PCR là kỹthuật khuyếch đại số lượng ADN dựa trên trình tự ADN khuôn mẫu với quy trình...
... cấp.
Các chủng này đợc sử dụng để phát triển kỹthuậtPCR đơn và PCR đa mồi trong
chẩn đoán sớm các căn nguyên tiêu chảy.
- Các vi khuẩn dùng trong nghiên cứu đều đợc định danh lại trên máy ... ly tâm 1000 vòng/phút trong 10 phút, sau đó
ly tâm tiếp với 1 lần 2000 vòng/phút trong 10 phút và 1 lần 4000 vòng/phút trong
10 phút.
Bảng 3.8. Kết quả hoàn thiện kỹthuật tách chiết ADN ... ly tâm 1000 vòng/phút trong 10 phút, sau
đó ly tâm tiếp với 1 lần 2000 vòng/phút trong 10 phút và 1 lần 4000 vòng/phút
trong 10 phút.
Bảng 3.7. Kết quả hoàn thiện kỹthuật tách chiết ADN...
... bớc đầu về PCR
trong chẩnđoán một số căn nguyên vi khuẩn gây tiêu chảy [40, 55, 56]. Tuy nhiên,
việc đa kỹthuật này vào sử dụng đại trà cũng nh phát triển các kỹthuậtPCR
để chẩnđoán cùng ... các PCR đơn mồi đà đợc tối u hóa, nhiều cặp mồi sẽ đợc phối hợp với nhau
trong một phản ứng PCR (PCR đa mồi).
PCR đa mồi sẽ đợc thử Độ nhạy, Độ đặc hiệu
2.4.3. Nghiên cứu triển khai kỹthuật ... dụng kỹthuật nuôi cấy trên tế
bào; Các phơng pháp sử dụng kỹthuật sinh học phân tử nh lai ADN, phản ứng
khuyếch đại gen - Polymerase Chain Reaction (PCR) . Trong số các phơng pháp
trên, PCR...
... của PCRtrongchẩnđoán
nhiễm C.trachomatis đờng sinh dục tiết niệu.
2. Xây dựng quy trình chẩnđoán sớm nhiễm C.trachomatis
đờng sinh dục tiết niệu của PCR trên cơ sở so sánh với kỹthuật ... trong 555 bệnh nhân nghiên cứu, chiếm tỷ lệ 16,2%.
Kết quả so sánh PCRchẩnđoánPCR bằng 2 cặp mồi KL1 KL2 và T1
T2 đợc trình bày trong bảng 3.7.
Bảng 3.7. Kết quả xét nghiệm PCRchẩnđoán ... nguồn lây bệnh
2. độ nhạy v độ đặc hiệu của pcrtrongchẩnđoán
ct đờng sinh dục tiết niệu
Để xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của PCRtrongchẩnđoán đờng
sinh dục tiết niệu, chúng tôi sử...
... tử với kỹthuậtchẩnđoán ELISA đã
tạo điều kiện thuận lợi cho công tác nghiën cứu, chẩnđoán cũng như phòng
trừ bệnh.
KỸ THUẬT ELISA TRONGCHẨNĐOÁN VIRUS ... này em xin thực hiện nội dung “ Kỹthuật
ELISA trongchẩnđoán virus Gumboro”
TP HCM, Tháng 10/2009
Nguyễn Trần Lâm Thanh
KỸ THUẬT ELISA TRONGCHẨNĐOÁN VIRUS GUMBORO
NGUYỄN TRẦN LÂM ...
II.3 Kỹthuật ELISA trongchẩnđoán virus Gumboro:
ELISA là kỹthuật khá nhạy và đơn giản, cho phép xác định kháng
nguyên hoặc kháng thể ở nồng độ rất thấp (0,1ng / ml). So với các kỹ thuật...
...
Bảng 3.3. Độ chính xác của kỹthuật QF – PCR so với kỹthuật di truyền
tế bào
Kỹ thuật
QF – PCR
Kỹ thuật di truyền
tế bào
Chẩn đoán
Số mẫu
(n)
Tỷ lệ
(%)
Chẩn đoán
Số mẫu
(n)
Tỷ lệ ... co thắt tử cung ít hơn so với kỹthuật di truyền tế bào quy ước và là một
kỹ thuật có độ chính xác cao trongchẩnđoán hay kiểm soát hội chứng Down.
Tuy nhiên kỹthuật này cũng có một số hạn ...
với hội chứng Down bằng kỹthuật QF - PCR. Nhóm tác giả đưa ra những
thuận lợi của kỹthuật này rõ ràng vượt trội so với những nhược điểm. Việc sử
dụng kỹthuật QF - PCR dẫn đến câu trả lời...
... (Lightner, 1996)
2.4.5.2 Kiểm khẳng định
Việc chẩnđoán bệnh trọn vẹn có thể được hoàn thành bằng kỹthuậtPCR
(bước đơn hoặc nested PCR) , kỹthuật lai tại chổ, phân tích Western hoặc kính ...
94
0
C trong 20 giây
62
0
C trong 20 giây
72
0
C trong 30 giây
Lặp lại chu kỳ trên 15 lần
72
0
C trong 30 giây
20
0
C trong 30 giây cho kết thúc ở vòng cuối cùng
PCR bước 2:
94
0
C trong ... bằng kỹthuật này. Hiện nay
PCR được ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu để phát hiện và
tạo ra đột biến gen, chẩnđoán phát hiện mầm bệnh. Theo Khuất Hữu Thanh,
(2003) thì PCR...
... (Lightner, 1996)
2.4.5.2 Kiểm khẳng định
Việc chẩnđoán bệnh trọn vẹn có thể được hoàn thành bằng kỹthuậtPCR
(bước đơn hoặc nested PCR) , kỹthuật lai tại chổ, phân tích Western hoặc kính ... ứng RT -PCR:
42
0
C trong 30 giây
94
0
C trong 2 phút
Sau đó
94
0
C trong 20 giây
62
0
C trong 20 giây
72
0
C trong 30 giây
Lặp lại chu kỳ trên 15 lần
72
0
C trong 30 giây
20
0
C trong ...
2.4.5 Các phương pháp chẩnđoán bệnh
Theo tài liệu của FAO về Hướng dẫn chẩnđoán bệnh trên động vật thủy sản
Châu Á thì các phương pháp chẩnđoán WSSV gồm:
2.4.5.1 Dự chẩn
Các quan sát chung...
... đổi màu.
– Kỹ thật ELISA gián tiếp: Theo nguyên tắc kỹthuật ELISA trực tiếp và gián
tiếp không khác nhau, nhƣng kỹthuật gián tiếp có thêm một bƣớc phản ứng.
Conjugate trongkỹthuật trực ... sự kết hợp giữa kháng
nguyên với kháng thể. Có 2 loại kỹthuật ELISA chính: kỹthuật ELISA trực
tiếp và kỹ thật ELISA gián tiếp.
– Kỹthuật ELISA trực tiếp: khi kháng nguyên đƣợc gắn vào đáy ... 24 và kỹthuật khám
thai qua trực tràng đã cho thấy tỷ lệ đậu thai là 80%. Trong lúc đó bằng kỹthuật
khám thai qua trực tràng đã cho thấy hoàng thể tồn lƣu là 2 bò chiếm tỷ lệ là 20%
trong...
... đổi màu.
– Kỹ thật ELISA gián tiếp: Theo nguyên tắc kỹthuật ELISA trực tiếp và gián
tiếp không khác nhau, nhƣng kỹthuật gián tiếp có thêm một bƣớc phản ứng.
Conjugate trongkỹthuật trực ... sự kết hợp giữa kháng
nguyên với kháng thể. Có 2 loại kỹthuật ELISA chính: kỹthuật ELISA trực
tiếp và kỹ thật ELISA gián tiếp.
– Kỹthuật ELISA trực tiếp: khi kháng nguyên đƣợc gắn vào đáy ... mùi.
Nóng chảy ở 127
0
C – 129
0
C.
Thực tế không tan trong nƣớc, tan trong cồn, tan trong ete, dễ tan trong
chloroform, ít tan trong dầu.
Phản ứng màu Zimmernam cho màu đỏ.
Phản ứng...
... phải dựa vào chẩnđoán huyết thanh.
Trớc năm 1997 chúng tôi thờng sử dụng
kỹ thuật ức chế ngng kết hồng cầu
(UCNKHC) để chẩnđoán nhiễm virút viêm
nÃo Nhật Bản nên việc chẩnđoán kết quả ... thay đổi tỷ lệ mắc VNNB
theo chẩnđoán huyết thanh học trong nhóm
tuổi đợc sử dụng vácxin [5].
Việc chẩnđoán virút học gồm 2 phơng
pháp: Phân lập virút và chẩnđoán huyết thanh.
Phân lập ... Luận
1. Bằng kỹthuật MAC-ELISA đà xác định
16,64% trờng hợp VNNB trong tổng số 1405
mẫu huyết thanh của 1159 bệnh nhân đợc
chẩn đoán lâm sàng là viêm nÃo tại bệnh viện
Bạch Mai trong 5 năm...
... thương thanh quản để chẩnđoán mô bệnh học 16
1.5.6- Vai trò X- quang phổi 17
1.6- ChẩnđoánLao thanh quản 18
1.6.1- Chẩnđoán xác định 18
1.6.2- Chẩnđoán phân biệt 19
1.6.3- Chẩnđoán thể lâm sàng: ... lâm sàng chẩnđoánlao thanh quản
1.5.1- KỹthuậtPCR
Do Kary Mullis phát minh năm 1993, đây là mét trong những phát
minh quan trọng của sinh học phân tử trong những năm gần đây, là kỹthuật
khuyếch ... nuôi cấy
tìm VK lao, sinh thiết tổn thương thanh quản làm XN mô bệnh học. NÕu
dương tính có giá trị chẩnđoán xác định bệnh và chẩnđoán phân biệt
1.6.2- Chẩnđoán phân biệt
Chẩn đoán phân biệt...
... kỹthuật miễn dịch phóng
xạ để định lượng progesterone nhằm chẩnđoán sớm có thai ở trâu bò. Việt
Nam.
3. Chung Anh Dũng, 2002. Sử dụng kỹthuật miễn dịch phóng xạ và một số biện
pháp kỹ ...
5.1 Kết luận
Qua thời gian thực hiện đề tài khảo sát hàm lƣợng progesterone trong sữa
bằng kỹthuật ELISA để chẩnđoán mang thai sớm, chậm động dục hoặc phối nhiều
lần không đậu trên bò cho ... bò lai hướng sữa bằng kỹthuật miễn dịch enzyme (ELISA). Tạp
chí chăn nuôi 2006.
10. Nguyễn Thanh Linh, 2006. Khảo sát hàm lượng progesterone trong sữa bò
bằng kỹthuật EIA tại Công ty cổ...
... 24 và kỹthuật khám
thai qua trực tràng đã cho thấy tỷ lệ thụ thai đạt 60%. Trong lúc đó bằng kỹthuật
khám thai qua trực tràng đã cho thấy hoàng thể tồn lƣu là 4 bò chiếm tỷ lệ là 40%
trong ... tôi cao hơn kết quả của Nguyễn Thanh Linh (2006) khi
khảo sát hàm lƣợng progesterone trong sữa để chẩnđoán mang thai ở nhóm bò
chậm động dục hoặc phối nhiều lần không đậu là 0%.
4.2.2 Hàm ... lƣợng progesterone ở
bò lai hƣớng sữa bằng kỹthuật miễn dịch enzyme (ELISA) đối với trƣờng hợp bò
chậm sinh có hàm lƣợng progesterone trung bình trong sữa cao ở bốn thời điểm lấy
mẫu tƣơng...