Hiệu quả của kỹ thuật PCR trong chẩn đoán lao phổi

1 NguyӉn Đҳc Trung và cӝng sӵ Bӝ môn Vi sinh Trưӡng Đҥi hӑc Y Dưӧc Thái Nguyên HIӊU QUҦ CӪA KӺ THUҰT PCR TRONG CHҬN ĐOÁN LAO PHӘI TRƯӠNG ĐҤI HӐC Y DƯӦC THÁI NGUYÊN HӜI NGHӎ KHOA KHOA HӐC & CÔNG NGHӊ Y DƯӦC MIӄN NÚI PHÍA BҲC-01/2012 2 Phҫn I. ĐҺT VҨN Đӄ  Ӣ ViӋt Nam, bӋnh lao là mӝt bӋnh truyӅn nhiӉm nһng nӅ.  ViӋt Nam: 12/22 quӕc gia có sӕ bӋnh nhân lao cao nhҩt thӃ giӟi.  Hàng năm có 18.000 BN lao (6.000 BN lao đa kháng thuӕc và 7.400 BN lao/HIV), khoҧng 60% BN ưӟc tính là đưӧc phát hiӋn.  Tăng cưӡng phát hiӋn các trưӡng hӧp mҳc lao và các thӇ bӋnh lao là ưu tiên hàng đҫu trong công tác chӕng lao. 3  Tҥi ViӋt Nam, chҭn đoán lao phәi chӫ yӃu dӵa vào nhuӝm soi đӡm tìm AFB.  Lao phәi AFB (-) cҫn sӵ hӛ trӧ cӫa nuôi cҩy/phim Xquang phәi chuҭn.  Nuôi cҩy có đӝ đһc hiӋu cao nhưng thӡi gian cho kӃt quҧ lâu (6-8 tuҫn).  PCR là mӝt công cө có giá trӏ trong chҭn đoán.  Kӻ thuұt PCR vӟi thưӡng quy riêng đã đưӧc sӱ dөng đӇ chҭn đoán và phát hiӋn sӟm nhӳng trưӡng hӧp mҳc lao.  IS6110 là gen đưӧc sӱ dөng phә biӃn nhҩt trong phát hiӋn vi khuҭn lao bҵng PCR. 4 Mөc tiêu nghiên cӭu 1. Phát hiӋn nhanh vi khuҭn lao Mycobacterium tuberculosis trong các mүu đӡm thu đưӧc tӯ nhӳng trưӡng hӧp nghi mҳc lao phәi bҵng kӻ thuұt PCR. 2. Xác đӏnh hiӋu quҧ cӫa kӻ thuұt PCR trong viӋc phát hiӋn vi khuҭn lao Mycobacterium tuberculosis 5 Phҫn II. ĐӔI TƯӦNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CӬU 2.1. Đӕi tưӧng nghiên cӭu Các mүu đӡm tӯ 117 trưӡng hӧp nghi mҳc lao phәi đӃn khám đӃn khám và điӅu trӏ tҥi BӋnh viӋn Lao và BӋnh phәi Thái Nguyên tӯ tháng 01/2010 đӃn tháng 02/2011. 6 2.2. Quy trình nghiên cӭu BӋnh nhân nghi mҳc lao phәi Mүu đӡm Phát hiӋn vi khuҭn lao M. tuberculosis Nhuӝm soi Ziehl-Neelsen Nuôi cҩy trên môi trưӡng Ogawa PCR (gen IS6110) So sánh và xác đӏnh hiӋu quҧ phương pháp chҭn đoán 7 Kӻ thuұt PCR phát hiӋn vi khuҭn lao Mүu đӡm Xӱ lý Tách chiӃt & tinh sҥch DNA PCR đơn mӗi ĐiӋn di & kiӇm tra sҧn phҭm trên gel agarose 1% (gen IS6110) Trình tӵ gen IS6110 ThiӃt kӃ primer INS1 ± INS2 8 So sánh và xác đӏnh hiӋu quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao: - Phương pháp nuôi cҩy đưӧc sӱ dөng như là chuҭn vàng khi xác đӏnh hiӋu quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao cӫa phương pháp nhuӝm soi và PCR. - HiӋu quҧ chҭn đoán cӫa mӛi phương pháp đưӧc xác đӏnh dӵa trên đӝ nhҥy, đӝ đһc hiӋu, giá trӏ dӵ báo dương tính và giá trӏ dӵ báo âm tính. 9 Phҫn III. KӂT QUҦ VÀ THҦO LUҰN Bҧng 3.1. KӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong đӡm KӃt quҧ Nhuӝm soi n (%) Nuôi cҩy n (%) PCR n (%) Dương tính 57 (48,72) 87 (74,36) 83 (70,94) Âm tính 60 (51,28) 30 (25,64) 34 (29,06) 10 Bҧng 3.2. So sánh kӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong đӡm bҵng nhuӝm soi và nuôi cҩy KӃt quҧ nuôi cҩy Tәng sӕ VK mӑc VK không mӑc KӃt quҧ nhuӝm soi (+) 49 8 57 (-) 38 22 60 Tәng sӕ 87 30 117 - Đӝ nhҥy: 56,32% - Đӝ đһc hiӋu: 73,33% - GTDBDT: 85,96% - GTDBAT: 36,67% [...]...Bҧng 3.3 So sánh kӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong đӡm bҵng PCR và nuôi cҩy KӃt quҧ nuôi cҩy (+) (-) KӃt quҧ PCR Tәng sӕ VK mӑc 83 4 VK không mӑc 0 30 87 30 - Đӝ nhҥy: 95,4% - Đӝ đһc hiӋu: 100% Tәng sӕ 83 34 117 - GTDBDT: 100% - GTDBAT: 88,24%  4 trưӡng hӧp nuôi cҩy (+) nhưng PCR (-) p khuyӃt gen IS6110 Sӱ dөng Multiplex PCR 11 1 2 3 4 5 6 7 IS6110 (249bp) Hình 3.1 ĐiӋn di đӗ gen... Hình 3.3 Vi khuҭn lao mӑc trên môi trưӡng Ogawa 14 KӂT LUҰN HiӋu quҧ cӫa phương pháp nhuӝm soi và PCR đơn mӗi trong phát hiӋn vi khuҭn lao M tuberculosis:  Phương pháp nhuӝm soi: Đӝ nhҥy: Đӝ đһc hiӋu: GTDBDT: GTDBAT:  Phương pháp PCR: Đӝ nhҥy: Đӝ đһc hiӋu: GTDBDT: GTDBAT: 56,32% 73,33% 85,96% 36,67% 95,4% 100% 100% 88,24% 15 KHUYӂN NGHӎ Nghiên cӭu và xây dӵng phҧn ӭng Muliplex PCR sӱ dөng nhiӅu cһp... GTDBAT: 56,32% 73,33% 85,96% 36,67% 95,4% 100% 100% 88,24% 15 KHUYӂN NGHӎ Nghiên cӭu và xây dӵng phҧn ӭng Muliplex PCR sӱ dөng nhiӅu cһp mӗi đӇ phát hiӋn đӗng thӡi nhiӅu trình tӵ đích đһc hiӋu cӫa vi khuҭn lao nhҵm khҳc phөc hiӋn tưӧng khuyӃt gen IS6110 ӣ mӝt sӕ chӫng vi khuҭn này 16 17 . trưӡng hӧp mҳc lao và các thӇ bӋnh lao là ưu tiên hàng đҫu trong công tác chӕng lao. 3  Tҥi ViӋt Nam, chҭn đoán lao phәi chӫ yӃu dӵa vào nhuӝm soi đӡm tìm AFB.  Lao phәi AFB (-) cҫn sӵ hӛ trӧ cӫa. kӃt quҧ lâu (6-8 tuҫn).  PCR là mӝt công cө có giá trӏ trong chҭn đoán.  Kӻ thuұt PCR vӟi thưӡng quy riêng đã đưӧc sӱ dөng đӇ chҭn đoán và phát hiӋn sӟm nhӳng trưӡng hӧp mҳc lao.  IS6110 là gen. biӃn nhҩt trong phát hiӋn vi khuҭn lao bҵng PCR. 4 Mөc tiêu nghiên cӭu 1. Phát hiӋn nhanh vi khuҭn lao Mycobacterium tuberculosis trong các mүu đӡm thu đưӧc tӯ nhӳng trưӡng hӧp nghi mҳc lao phәi