DSpace at VNU: Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật Polymerase Chain Reaction trong chẩn đoán viêm âm đạo- cổ tử cung do Chlamydia trachomatis tại bệnh viện Đại học Y Thái Bình

Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật Polymerase Chain Reaction chẩn đoán viêm âm đạo- cổ tử cung Chlamydia trachomatis bệnh viện Đại học Y Thái Bình Trần Thị Hòa Trường Đại học Khoa học Tự nhiên; Khoa Sinh học Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm; Mã số: 60 42 30 Người hướng dẫn: GS TS Lương Xuân Hiến Năm bảo vệ: 2011 Abstract: Tổng quan vi khuẩn Chlamydia trachomatis: Vi khuẩn Chlamydia trachomatis; Các xét nghiệm chẩn đoán vi khuẩn Chlamydia trachomatis; Các nghiên cứu Chlamydia trachomatis giới nước Trình bày phương pháp nghiên cứu: Phương pháp chọn mẫu cỡ mẫu ; Kỹ thuật xét nghiệm; Xử lý sớ liê ̣u Trình bày kết thảo luận : Tố i ưu hóa phản ứng PCR phát hiê ̣n Chlamydia trachomatis; Độ nhạy kỹ thuật PCR; Độ đặc hiệu kỹ thuật PCR; Kết xét nghiệm kỹ thuật PCR Keyword: Sinh học thực nghiệm; Phụ khoa; Viêm âm đạo; Viêm tử cung; Chlamydia trachomatis Content: Viêm đường sinh dục Chlamydia trachomatis coi bệnh lây truyền qua đường tình dục xếp thứ giới Nhiễm C.trachomatis thường gây viêm niệu đạo , viêm cổ tử cung Tuy nhiên nế u không điề u tri ̣có thể dẫn đế n các biế n chứng viêm phần phụ, đau vùng chậu mãn tính, thai ngồi tử cung, vơ sinh tổn thương ống dẫn trứng, viêm mào tinh đòi hỏi phải chăm sóc y tế với phí tổn cao Tổ chức Y tế giới ước tính hàng năm có khoảng 90 triệu ca nhiễm C.trachomatis phát Bệnh C.trachomatis hay gặp người trẻ tuổi, độ tuổi sinh đẻ Nguy hiểm nhiễm C.trachomatis qua đường sinh dục có tới 75% nữ giới 50% nam giới mắc bệnh mà khơng có triệu chứng, người bệnh hồn tồn khơng biết mắc bệnh Khuếch đại acid nucleic (nucleic acid amplification tests – NAATs) kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng rộng rãi y học để phát tồn vi sinh vật mẫu bệnh phẩm Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction – PCR) NAATs có độ nhạy độ đặc hiệu cao, nhiều nghiên cứu xem PCR tiêu chuẩn vàng để khảo sát giá trị xét nghiệm chẩn đoán khác Đối với bệnh nhiễm C.trachomatis, xét nghiệm cho phép xác định tồn vi khuẩn dịch âm đạo, tử cung bệnh nhân Đề tài thực với mục tiêu: - Chuẩn hóa quy trình kỹ thuật thực phản ứng PCR phát vi khuẩn Chlamydia trachomatis máy Master Cycler C 1000 BioRad Lab sinh học phân tử - Trung tâm KHKT Y Dược - Đại học Y Thái Bình - Bước đầu xác ̣nh tỷ lê ̣ nhiễm Chlamydia trachoma tis bệnh nhân viêm âm đạo , cổ tử cung đến khám bệnh viện Đại học Y Thái Bình từ tháng đến tháng 10 năm 2011 kỹ thuật PCR Đối tượng nghiên cứu: - Mẫu DNA vi khuẩn C.trachomatis Viện Công nghệ sinh học- Viện Khoa học Việt Nam cung cấp - Các bệnh nhân nữ độ tuổi sinh sản (15-49 t̉ i) có biểu viêm âm đạo, cổ tử cung đế n khám ta ̣i phòng khám Sản phu ̣ khoa - Bê ̣nh viê ̣n Đa ̣i ho ̣c Y Thái Bình thời gian từ 01/04/2011 đến 10/2011 Địa điểm nghiên cứu: Lấy mẫu dịch quết cổ tử cung phòng khám Sản phu ̣ khoa - Bê ̣nh viê ̣n Đa ̣i học Y Thái Bình Chuẩn quy trình kỹ thuật , xử lý mẫu, tách chiết DNA thực phản ứng PCR Lab sinh học phân tử - Trung tâm KHKT Y Dươ ̣c - Đa ̣i ho ̣c Y Thái Bình Cỡ mẫu: Với p = 17% (theo nghiên cứu của Farhad B Hashemi và cô ̣ng sự ) lựa chọn giá trị độ sai số m = 0.05 cỡ mẫu tối thiểu 217 bê ̣nh nhân Tách chiết DNA theo phương pháp Boom, chuẩn hóa quy trình kỹ thuật thực phản ứng PCR phát vi khuẩn C.trachomatis máy Master Cycler C1000 BioRad Các bước chuẩn hoá bao gồm: thực phản ứng PCR nồng độ mồi khác nhau, nhiệt độ thời gian gắn mồi, nồng độ MgCl2, số chu kỳ thích hợp phản ứng Xác định độ nhạy phản ứng: mẫu plasmid tái tổ hợp có mang đoạn DNA vi khuẩn C.trachomatis pha lỗng thành dung dịch có nồng độ từ 1010, 109, 108, 107, đến 101 plasmid/µl và sử du ̣ng làm mẫu chuẩ n để đánh giá đô ̣ nha ̣y của phản ưng ́ Xác định độ đặc hiệu phản ứng thử nghiệm PCR với loài Chlamydia khác mẫu DNA khác Xác đinh ̣ tỷ lê ̣ nhiễm C.trachomatis bệnh nhân viêm âm đạo , cổ tử cung đến khám bệnh viện Đại học Y Thái Bình từ tháng đến tháng 10 năm 2011: Các mẫu bệnh phẩm thu thập tiêu chuẩn chọn lựa tiến hành phản ứng PCR theo quy trinh chuẩn Kết quả: Quy trình chuẩn hóa: Phản ứng PCR có MgCl2 nồng độ 2.1 mM, 0.4 pmol loại mồi KL-5, KL-6, 0.05 U UNG, nước đến 25 µl Phản ứng Nested PCR chứa MgCl2 nồng độ 1,5 mM, 0,4 pmol loại mồi KL-1, KL-2, µl phản ứng PCR lần đầu, nước đủ 25 µl Độ nhạy: phát 10 plasmid Độ đặc hiệu 100% Trong số 217 bệnh nhân có biểu viêm âm đạo, cổ tử cung đến khám bệnh viện Đại học Y Thái Bình từ tháng đến tháng 10 năm 2011 có 80 người có kết dương tính với C.trachomatis chiếm tỷ lệ 36.9% Kết xét nghiệm chưa phản ánh tồn quần thể có đối tượng nhiễm bệnh khơng có biểu viêm nhiễm nên không khám, xét nghiệm lần áp dụng Thái Bình Trong số bệnh nhân dương tính, nhóm 25 tuổi có tỷ lệ nhiễm vi khuẩn C.trachomatis cao nhất, chiếm 40.6% Đồng thời tỷ lệ nhiễm vi khuẩn C.trachomatis nghiên cứu Thái Bình nơng thơn cao thành phố Tỷ lệ bệnh nhân dương tính khu vực nông thôn 37.8% References: Tiếng Việt Phạm Đông An (1996) Viêm nhiễm cổ tử cung Chlamydia trachomatis phụ nữ mang thai, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ y khoa, Trung tâm đào tạo bồi dưỡng cán y tế Bộ Y Tế (2007), “Vi sinh vật Y học”, Nhà xuất Y học Lê Hồng Cẩm (2002) Nghiên cứu tỷ lệ viêm cổ tử cung Chlamydia trachomatis số yếu tố kết hợp phụ nữ lứa tuổi sinh đẻ huyện Hóc Mơn, Luận án tiến sỹ y học, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phạm Văn Đức (2007) “ Tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatic phụ nữ hút thai ba tháng đầu thai kỳ yếu tố liên quan”, Tạp chí y học TP Hồ Chí Minh, tập 13 (1), trang 17-22 Nguyễn Phúc Như Hà, “Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử chẩn đoán bệnh phong bệnh lây truyền qua đường tình dục bệnh viện phong- da liễu Trung ương Quy Hòa” Bệnh viện phong- da liễu Trung ương Quy Hòa Nguyễn Thanh Hùng, Nguyễn Trọng Hào, Nguyễn Ngọc Bá, “Giá trị chẩn đoán test nhanh (quick test-USA) so với PCR (công ty Nam Khoa- Việt Nam) chẩn đoán nhiễm Chlamydia trachomatis bệnh nhân đến khám bệnh viện Da liễu thành phố Hồ Chí Minh” Bệnh viện Da liễu thành phố Hồ Chí Minh Trần Hậu Khang, Phạm Đăng Bảng, Lê Huyền My, viện Da liễu Quốc gia (2009), “Áp dụng kỹ thuật PCR chẩn đoán nhiễm Chlamydia trachomatis đường sinh dục tiết niệu”, Tạp chí y học thực hành, 1, trang 641642 Trần Thị Lợi (2000) “Sơ khảo sát tình hành nhiễm Chlamydia trachomatis viêm sinh dục “ Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, Tập (1): trang 14-18 Đặng Chi Mai (2003) “ Chlamydiae” Vi khuẩn học Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh, trang 176-176 10 Nguyễn Văn Thục, “Dịch tễ học bệnh lây truyền qua đường tình dục nhiễm HIV khu vực phía Nam Việt Nam: Một số vấn đề cộm” Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh 11 Achchhe L Patel, Divya Sachdev, Poonam Nagpal, Uma Chaudhry, Subash C Sonkar, Suman L Mendiratta and Daman Saluja (2010), “Prevalence of Chlamydia infection among women visiting a gynaecology outpatient department: evaluation of an in-house PCR assay for detection of Chlamydia trachomatis”, Annals of clinical microbiology and antimicrobials, (24), 12 Anahita Jenab, Naser Golbang, Pouran Golbang, Leili Chamani-Tabriz, M.PH, Rasoul Roghanian (2009), “Diagnostic Value of PCR and ELISA for Chlamydia trachomatis in a Group of Asymptomatic and Symptomatic Women in Isfahan, Iran”, Royan Institue International Journal of Fertility and Sterility Vol 2, (4), pp 193-198 13 Bass CA, Jungkind DL, Silverman NS (1993), “Clinical evaluation of a new polymerase chain reaction assay for detection of Chlamydia trachomatis in endocervical specimens” J Clin Microbiol; 31, pp 2648-2653 14 Boom R et al., (1990), “Rapic and simple method for purification of nucleic acids”, J Clin Microbiol., vol 28 no 3, pp 495-503 15 European Centre for Disease prevention and Control (2008), Technical report review of Chlamydia control activities in EU countries, Stockholm 16 Farhad B Hashemi, BabakPourakbari, and JavadZaeimiYazdi (2007), “Frequency of Chlamydia trachomatis in Women with Cervicitis inTehran, Iran”, Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology Vol 2007, pp 17 Frost EH, Deslandes S, Bourgaux-Ramoisy D (1993), “Sensitive detection and typing of Chlamydia trachomatis using nested polymerase chain reaction” Genitour in Med, 69, pp 290-294 18 James B Mahony, Kathleen E Luinstra, John W Sellors, Dan Jang, and Max A Chernesky (1992), “Confirmatory Polymerase Chain Reaction Testing for Chlamydia trachomatis in First-Void Urine from Asymptomatic and Symptomatic Men”, Journal of clinical microbiology, pp 2241-2245 19 Joanne Rampersad, Xiaohui Wang, Helen Gayadeen, Samuel Ramsewak, and David Ammons (2007), “In-house polymerase chain reaction for affordable and sustainable Chlamydia trachomatis detection in Trinidad and Tobago”, Ammons Rev Panam Salud Publica, 22(5), pp 317- 322 20 J.S Wilson, E.Honey, A Templeton, J.Paavonen, P.A Mardh, A.Stary and B.Stray- Pedesen (2002), “A systematic review of the prevalence of Chlamydia trachomatis among European women”, Human Reproduction update, Vol 8, (4), pp 385-394 21 Loeffelholz MJ, Lewinski CA, Silver SR, (1992), “Detection of Chlamydia trachomatis in endocervical specimens by polymerase chain reaction” J Clin Microbiol, 30, pp 2847-2851 22 Pamela Cribb, Juan Pablo Scapini, Esteban Serra (2002), “One-tube nested Polymerase Chain Reaction for detection of Chlamydia trachomatis”, Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol 97(6), pp 897-900 23 Saiki RK et al., (1985), “Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia”, Science, 230, pp 1350-1354 24 Nguyen Thi Thanh Thuy, Vo Tuyet Nhung, Nguyen Van Thuc, Truong Xuan Lien and Ha Ba Khiem (1998), “HIV infection and risk factors among female sex workers in southern Vietnam”, AIDS, 12, pp 425-432 25 Huynh Thi Trong, Nguyen Quoc Chinh and Nguyen Van Tu (2002), Prevalence of lower reproductive tract infections among married childbearingage women in Ho Chi minh City 26 Vietnam Commission for Population, Family and Children – Ministry of Health AIDS Division and Pasteur Institute Ho Chi Minh City STI/HIV survey among female sex workers in border provinces, Vietnam, 2002 Medical Publishing House, 2003 Tài liệu tham khảo khác 27 www.cfsh.ca/files/PDF/chlamydia in canada.pdf 28 www.pasteur-hcm.org.vn/anpham/anpham.htm 29 www.pasteur-hcm.org.vn/anpham/dichtehoc_blqdtd.htm 30 www.quyhoandh.org.vn 31 www.hosrem.org.vn/index.php? chlamydia nhan 32 www.cicatelli.org/ /CHLAMYDIATESTINGTECHNOLOGIES012007.pdf 33 www.advms.pl/?q=system/files/30_52Bulhak-Koziol.pdf 34 http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Chlamydia_trachomatis 35 www.vsmmb.com/data/upload_file/File/ /PCR_basic.pdf ... nhiễm Chlamydia trachoma tis bệnh nhân viêm âm đạo , cổ tử cung đến khám bệnh viện Đại học Y Thái Bình từ tháng đến tháng 10 năm 2011 kỹ thuật PCR Đối tượng nghiên cứu: - Mẫu DNA vi khuẩn C .trachomatis. .. ̣c Y Thái Bình thời gian từ 01/04/2011 đến 10/2011 Địa điểm nghiên cứu: L y mẫu dịch quết cổ tử cung phòng khám Sản phu ̣ khoa - Bê ̣nh viê ̣n Đa ̣i học Y Thái Bình Chuẩn quy trình kỹ thuật. .. Chernesky (1992), “Confirmatory Polymerase Chain Reaction Testing for Chlamydia trachomatis in First-Void Urine from Asymptomatic and Symptomatic Men”, Journal of clinical microbiology, pp 2241-2245